动物检疫中的样品采集与检疫技术

刘志强

（芜湖市湾沚区乡村振兴促进中心 241100）

随着养殖业的发展与逐步成熟，动物检疫工作的重要性日益突出，为保证养殖户能够回收前期投资，扩大养殖规模与增加畜禽类产品经济收益，必须按照卫生防疫规则进行科学检疫，让地方卫生机构根据国家法律规定，定期使用专业技术设备进行动物流行病学调查，采集多种样品进行化验与血清检测分析，实现规范化样品采集，避免出现病原菌外泄、病毒感染风险被忽视等问题，保证卫生防疫机构在短时间内获得具备代表性的检测样本，克服人为因素与环境因素干扰。

1 动物检疫工作的重要性与核心内容

动物检疫工作是现代禽畜类养殖产业实践中的重要内容，可起到及时发现恶性传染病与致病菌、降低动物感染率的特殊作用，现阶段我国针对畜牧养殖业的卫生检疫制度较为完善，检测方式主要以小规模样品检测与个体隔离取样检测为主，检疫标准较为明确，必须同时对多份样品进行病毒学、血清学、化学检测，保证样本检测结果的多元性与合理性。我国每年都会发生影响范围较大的动物疫情，口蹄疫、禽流感等疫病会导致大量畜禽死亡或停止生长，严重影响了养殖产业正常发展，卫生防疫人员应配合畜禽类产品经营企业，组织开展有计划、有明确目标的检疫活动，快速发现生物入侵与病毒感染传播路径，规范养殖业经营方式，在保证畜禽养殖业发展的同时，维护生态环境稳定，避免致病菌在自然环境中传播繁殖。

2 动物检疫工作中样品采集的基本原则分析

2.1 控制采样时间

在组织开展检疫工作之前，必须根据养殖场规模、经营方式、采样频率等因素，选择较为合理的采样时间点，调整两次采样活动的间隔期，避免出现采样密度过大、样品代表性较低等问题。卫生防疫人员应在组织采样活动之前，提前处理好受到病菌感染、出现患病症状的死亡动物或濒死动物，在动物死亡后4～5 h 以内，组织抽血采样与动物组织切割采样等工作，多数患病畜禽会在死亡后传播病菌，尸体会腐败，导致采样难度提升，因此养殖人员可使用小型冷冻隔离设备对畜禽动物进行冷藏处理，避免病毒通过尸体传播，卫生防疫人员还可对靠近死亡动物的其他动物进行检疫采样，避免病毒通过身体接触传播。针对未死亡的患病畜禽，必须在患病症状加剧之前，及时进行检疫样品采集，控制采集时间与频率，例如在流行病多发的夏秋季节，畜禽在患病后容易快速死亡，存留在脏器与血管中的病毒会在发病后消失或经过新陈代谢排出体外，一旦错开急性期与发热期，则会导致采样效果下降，样品可信度不足，动物组织中含有的病毒量会减少，难以通过专业医学设备检测发现，导致病毒检疫工作无法达成目标。

2.2 典型性原则

在组织动物检疫活动时，卫生人员应保证采集到的样品具备典型性与代表性，采集范围涵盖整个流行病传播范围与饲养场全部动物，必须首先选择具备一定典型性的患病动物，如处于急性发热期或初步感染疾病、未出现明显症状的动物，这一阶段动物体内病毒大量繁殖，逐步进入动物的内脏器官与血管血液系统中，采样难度下降，病理学识别精确度提升。卫生人员应和养殖人员联系，提出明确要求，找出未经药物治疗、患病较早的动物，并停止向患病动物与未患病动物投喂带有抗生素或化学制剂的饲料，避免外来化学物质进入动物体内，导致采集样品中的各项物质数值发生变化。可选择采集带有较多病原体、症状最明显的动物的样品，在组织检疫采样活动之前，应根据外部症状与流行病学调查，对疫病的基本类型、传播途径、危害性进行系统性评估，做出较为合理的初步诊断，并根据医学原理，在病原体容易感染或形成病灶的身体部位进行高密度取样检测，以此保证样品采集效率与代表性达到标准，例如针对通过细菌感染产生的流行疾病，可组织小规模的患病动物血液抽样检测、乳汁与体内脓汁检测，精确测定患病动物身体渗出液的化学性质，获取典型的病原菌样本。卫生人员应严格遵循无菌标准，在带有负压密封属性的实验室中采集样本，使用工具切除患病组织与出现病变较为明显的部位组织，保证采集到的病料中带有相对数量较多的微生物与细菌，还可同步提取病变部位周边健康器官的动物组织样本，进行对比检测，评估二者检测结果的差异，可针对患病动物的肾脏、肝脏、脾脏等内脏器官与淋巴结、心脏、动脉组织等部位进行采样。

2.3 安全性原则

卫生人员应秉承安全性原则，参与检疫活动之前，清洗身体并穿上密封防护服，在进出疫区时接受消毒喷淋处理，以维护养殖人员与专家的健康，做好卫生防护工作，避免部分人畜共患传染病通过接触人体传播。针对部分烈性传染病，如布鲁氏菌病、沙门氏菌病等，可在无法解剖患病动物时，利用真空负压设备，采集动物静脉中的血样，将其制作为血清样品，送往实验室进行检测。在采样过程中，应控制动物样本数量，同步采集超过5 个患病动物的组织样本，满足实验用量与科学备份要求，还要对盛装各类样品的容器与采样设备进行消毒杀菌处理，及时消除潜在污染源与残留的细菌，避免病毒通过未消毒器具感染人类与其他动物。在样品保存运送过程中，应将经过密封的容器进行冷冻保存，存放在小型冷冻机中，针对病毒学样本，可使用甘油与PBS 溶液进行保存，将动物组织样本经过切片后，放入防腐制剂中，在冷冻室中-50℃的环境中保存，避免进行多次冻融循环导致病毒扩散。卫生人员可使用无菌试管与真空加压设备制作出负压环境，将血液样本、空气样品放入其中，在远距离运输的情况下，可在血液样本中添加青霉素，使之发挥防腐作用，实现平稳化运输[1]。

3 现代化动物检疫工作中常用检疫技术类型

3.1 病原学检测技术

病原学检测技术是现代化动物检疫中常用的检测手段，其基本应用方式为卫生人员精确判定样品中含有病菌的基本属性，精确区分病毒与常见病菌，根据病原学原理，分析样本中细菌、病毒的繁殖链与迭代速度，对多种病理学样本进行隔离检测，提升恶性传染病的检测效率。例如针对常见的寄生虫病，可通过样品提纯与添加同类型病菌的方式，进行检查与培育实验，发现样本中含有的虫卵与幼虫，延长检测周期，以评估寄生虫成虫的生物属性与繁殖规律，精确判定寄生虫的种类与感染方式，了解其性状[2]。卫生人员应发挥检疫工具如显微镜、精密化筛查设备等装置的优势，统计样本中病原体密度与分布范围，给予传染性较强的病原体以生化实验检测，运用新型PCR 技术，对不存在活性致病菌的样本进行溯源检测，突出检测活动科学、合理的基本特点。国内常用动物检疫技术基本特点如表1所示。

表1 国内常用动物检疫技术的特性与优点

3.2 病理学检测技术

病理学检疫技术可被概括为检疫人员基于医学原理，对患病动物体征与习性进行精确判断，向养殖人员询问相关情况，如畜禽在生长过程中出现的染病症状，包括停止饮水、倒卧不动等，并检查死亡动物的体内器官与神经、血液系统，进行小规模采样，评估动物死亡前新陈代谢速度与肠道病菌繁殖量。卫生检疫人员应按照要求，在无菌室内组织死亡动物尸体剖检活动，保证样本采集组织的完整性，将动物体内含有大量病菌、具备典型性的器官切割一部分，进行组织学、医学检测，使用专业科学仪器，将其放入培养皿中，进行持续性观测检验，发现动物疫病的性质与种类，保证检疫精确度。例如针对萎缩性胃炎、急性肠胃炎等病症，可重点检查脏器与肠胃的病变情况，发现可能存在的病菌感染与穿孔、腐烂现象，及时发现恶性传染病并停止解剖。还可观测死亡动物表皮毛细血管中是否含有瘀血或有毒汗液，评估动物死亡前皮肤颜色与营养状况，采集死亡动物曾经排泄的粪便与尿液，并进行较为细致的口腔、肠道、鼻腔、颈部、腹腔的检查，找到动物体内肿瘤与脑组织、肠组织病变，对采集的动物组织样本使用着色剂进行染色处理。在检疫方法不能确诊或动物出现死亡时，应及时利用病理学方法进行检查[3]。如支气管败血巴氏杆菌是引起猪萎缩性鼻炎的病原之一，在该病检疫中，应充分利用病理组织进行检疫，有效弥补传统检疫技术的不足，有效确诊，明确动物病变性质。

3.3 临床隔离检疫与免疫学检疫

临床检疫包含常见的听诊、触诊等，可判别患病动物健康情况，发现较为明显的患病症状，如心脏跳动速度加快、腹腔扩张、瞳孔放大等，根据流行病学防疫原理，及时将出现明显症状的动物送往医学实验室进行长期隔离观测。群体性隔离检疫的持续时间不定，长期约为30 d 左右，针对无症状动物的短期隔离检疫可持续约10 d[4]。在隔离检疫过程中，应避免为隔离动物喂食带有化学物质或高剂量抗生素药物的食物或水，以免影响检疫采样结果判定精确性。免疫学检疫是新出现的现代化检疫技术，是基于病理学原理构建的，可针对新出现的烈性传染病进行精确检测，由于部分畜禽类传染病病毒分离难度较大，采集窗口期较短，可采用这一技术，通过初步采集患病动物的血液样本，将其加工为血清样本，使用免疫学试剂，检测血样的血型、病毒含量、繁殖速度等信息，在短时间内判定患病动物的病情与血液感染情况。免疫学血清检测技术具备检测时间较短、可靠性较高等优点。

4 动物检疫技术改进措施分析

卫生检疫人员可采用个体检疫方法，针对养殖场中单一患有病症、出现明显患病情况的动物，进行系统性的个体检查，组织病毒基因学检测与生物学观察等活动，判断动物所患疾病的症状与传播方式，还可与其他健康动物在特殊场所中进行集中饲养，定期评估共同饲养动物是否患上同类型疾病，以此发现疾病的传播方式与传播速度，提升检疫效果。可重点观察动物的精神状况、生活习性等外在情况，分析动物心脏跳动速度、脉搏波动频率是否合理，一旦确诊烈性传染病或其他病症，则立刻将作为单一样品的动物进行隔离或扑杀处理，同步采集动物内脏样品进行检测。在输送样品过程中，可采用整体浓度超过10%福尔马林液（市售甲醛溶液1 份加蒸馏水9 份）或95%浓度的酒精等物质保存病理组织学样品，固定液体积应为病料的10 倍。如用10%福尔马林固定组织，经24 h 必须更换一次新鲜溶液；神经系统组织需使用10%福尔马林[5]。

5 结语

在现代动物检疫工作中，卫生防疫人员应根据实际情况，调整样本采集方式与样本量，组织小规模个体检疫与间隔时间较长的分段式检疫，将有几率患上畜禽类流行病的动物隔离在封闭空间中，定时定点采集检疫样本，将其送往本地实验室进行检测，基于病理学原则进行深入分析，结合动物习性与外部症状，组织活体解剖或尸体解剖，及时发现畜禽感染的恶性传染病，在负压密封实验室中完成检测，保证检测环境中不存在杂质与其他干扰因素。