犬冠状病毒病的诊断技术及治疗措施

丁小鹏

（北票市动物疫病预防控制中心，辽宁 北票 122100）

冠状病毒是广泛存在于自然界的一大类病毒，可感染人、犬、猫和家禽等脊椎动物，导致严重的呼吸道、消化道及神经系统疾病。犬冠状病毒主要导致犬只发生急性肠胃炎，严重可导致犬死亡，给犬类养殖造成严重经济损失。本文主要从病原体特征、流行病学、致病机制、临床症状、临床诊断、实验室诊断及防治措施等对犬冠状病毒做一概述。希望可以为犬养殖业诊断和防治该病带来一定参考。

1 病原特征

该病的病原为犬冠状病毒，主要存在于病犬的肠上皮细胞和肠内容物中。犬冠状病毒形态多样，多为圆形或椭圆形，大小不一，直径在60～200纳米之间，外表有一层脂质囊膜，囊膜表面均匀分布着冠状病毒独有的、20纳米长、呈花瓣状的纤突，冻融易脱落，失去传染性，因电镜负染照片形似皇冠而得名。病毒核心由蛋白质和RNA组成。犬冠状病毒对高温、紫外线和氯仿、乙醚、75%酒精、含氯消毒剂和脱氧胆酸盐等化学消毒剂敏感。在粪便中可存活6～7天，4℃条件下保存数月仍有传染性，可保存在-70℃条件下数年。

2 流行病学

在1985年我国首次发现犬冠状病毒，由徐汉坤报道，后继续发现于军犬、警犬和民用犬之间。犬冠状病毒可感染不同品种和年龄的犬只，幼年犬免疫力低，更易感染，发病率和死亡率均高于成年犬，狐狸和貉等犬科动物也会感染。冬季、初春和晚秋等天气寒冷的季节易感。该病传播速度快，主要传染源为患病犬和带毒犬及其排泄物，主要通过粪口途径传染给易感犬，也可经垂直传播。

3 致病机制

犬冠状病毒感染犬只后两天左右到达十二指肠，病毒表面蛋白与小肠细胞受体结合，进入小肠绒毛间的吸收细胞后，迅速利用宿主进行大量的复制增殖。在细胞质空泡的平滑膜上出芽，导致细胞破裂，释放出大量犬冠状病毒，导致小肠感染加重，小肠绒毛变得短粗，停止分泌消化酶，致使小肠的消化吸收功能减弱，犬只开始出现呕吐和腹泻的症状。如果不进行及时的补液和消炎，严重的呕吐和腹泻会导致病犬最终脱水或酸中毒死亡。通常单独感染犬冠状病毒的死亡率低，但犬冠状病毒会损害病犬体内的免疫细胞，导致宿主免疫力下降，继发感染犬细小病毒和轮状病毒、或是运输和突然降温等应激情况后，会大大提高犬只的死亡率。

4 临床症状

犬冠状病毒病的主要临床表现为不同程度的消化道症状，潜伏期为1-3天，主要症状为精神萎靡、食欲不振、喜卧、呕吐、腹痛、腹泻，粪便气味恶臭，严重时病犬会拉绿色或橙色的糊状或水样便，其中或许有血或黏膜组织，少数犬只会出现体温升高的情况。初期呕吐的是未消化完全的食物，随后变为黄绿色黏液，且混有泡沫。犬冠状病毒病严重时会引发犬只结膜炎，导致视力下降。幼犬免疫力低下，感染该病毒后，体型快速消瘦、脱水，严重者在1～2天死亡。成年犬只及时治疗后，可在7～10天康复，但在康复后也可能长时间携带病毒，导致疾病复发。若病犬继发感染其他病毒、细菌或寄生虫等，导致病情复杂，康复较慢，或是因严重感染死亡。

5 病理变化

解剖病死犬发现，发生感染病变最严重的部位是回肠，肠道内有白色或黄绿色液体，肠黏膜脱落导致肠壁变薄，小肠绒毛短缩，并出现融合，隐窝变深，黏膜固有层的细胞成分增加，腹上皮细胞变得扁平，杯状细胞排空。该病特异性的病变为细胞内形成密丝体结构和膜结合小体。非特异性的细胞病变是线粒体发生变形，微绒毛被破坏，胞浆密度严重降低，胞浆空泡扩张，并出现脂质包涵体。

6 临床诊断

兽医可根据丰富的临床经验，对患病犬感病的临床症状以及流行病学特点做一个初步诊断。但犬冠状病毒通常会与其他病毒混合感染，且轮状病毒的临床表现与之相似，很难得出一个明确的诊断结果。临床上会应用快速检测试剂配合诊断。

7 实验室诊断

7.1 电镜观察

使用电子显微镜对病犬的粪便进行观察，可发现冠状病毒特有的冠状纤突结构，但粪便含有太多杂质，或许可有物质与之有相似的冠状结构，导致结果出现假阳性。纤突极易脱落，或是病毒发生变异，冠状结构不明显，导致观察结果出现假阴性。电镜检查的结果误差较大，使用费用较高，很多检测机构还没有该设备，限制了该技术的临床使用。公认的诊断犬冠状病毒的最标准的方法是分离培养，但分离培养耗时长，难度大，且效率不高，在分离培养期间，犬只可能已经死亡，耽误疾病的防控工作。

7.2 病毒分离培养

取病犬的粪便，无菌条件下离心取上清液，经0.22微米的过滤器过滤后，接种于犬肾细胞或是猫肾细胞的培养液中，在37℃恒温箱中、5%二氧化碳的条件下培育48小时后，观察发现细胞变圆、脱落，没有明显的形态上的病变症状。病毒分离培养所得结果更加直观，但在采样、分离、培养和鉴定的过程中耗时较长，人为因素导致结果出现误差的概率较大，而且灵敏度低于高通量的筛选方法。

7.3 血清学诊断技术

血清学诊断技术主要是采集病犬血清进行中和实验和间接ELISA实验，检测病犬血清中的抗体效价是否升高。血清学诊断特异性强、灵敏度高，不与其他病毒交叉反应，是兽医临床使用率较高的实验方法之一。

7.4 普通RT-PCR

普通RT-PCR特异性强且灵敏度高，可检测轻微患病的病犬，且检出率较高，但对病毒的载量无法确定。实验要求较高的操作技术，否则会导致交叉污染，影响实验结果的准确性。

7.5 实时荧光定量RT-PCR

实时荧光定量RT-PCR比普通PCR灵敏度高10倍，还具有准确率高、重复性好、检测速度较快的优点。但实验需要精密度高的仪器和实验水平高的工作人员。

7.6 纳米PCR

在PCR的反应体系中加入纳米金颗粒，纳米金颗粒尺寸小，可调节DNA与聚合酶之间的特异性结合，间接的提高聚合酶浓度，有利于模板与引物的结合，提高目的基因的扩增效率，减少非特异性扩增，纳米金颗粒导热性更强，可缩短实验时间，灵敏度和敏感性更优于实时荧光定量RT-PCR，操作简便，且实验成本较低，适用于临床上快速诊断。

8 防治措施

如果发现病犬，应第一时间隔离，并清理排泄物，病死犬和排泄物要进行无公害处理，对犬舍和用具进行彻底的消毒，彻底切断病毒的传播。病犬要及时进行补液、止呕、抗病毒和防止酸中毒等治疗，同时采取与抗生素、消炎药和球蛋白相配合的治疗方法，避免继发感染轮状病毒和犬细小病毒，导致病情复杂，难以治疗。病犬肠胃功能减弱，难以消化食物，应饲喂一些容易消化的食物，随意饲喂会增加肠胃负担，会导致病情难以康复。没有特效药可以治疗犬冠状病毒，多以预防为主，加强清洁消毒。最有效的预防措施是给健康犬提前注射犬冠状病毒高免血清和犬免疫球蛋白。给妊娠犬注射疫苗，激发母源免疫，幼犬可以从胎盘和乳汁中获得抗体，提高免疫力。加强日常饲养管理，尤其在犬冠状病毒多发的冬季，定期清理消毒犬舍，多通风，但也应保持温暖，不饲喂变质的饲料，不混用喂食器，不要将未吃完的饲料饲喂其他犬只。