血必净联合血液灌流对SAP患者线粒体炎症通路及血脂水平的影响

李召龙 安霞 张宏伟

南阳市第一人民医院重症医学科，南阳 473000

急性胰腺炎为一种常见消化道疾病，可见于任何年龄段群体，此类患者多伴有不同程度上腹疼痛或恶心呕吐症状。此病起病急、病情进展迅猛，若未及时予以治疗，部分患者可发展为重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）［1］。胰腺炎患者预后与其病情严重程度密切相关，除上述典型症状外，SAP 患者还可伴多种器官功能障碍或衰竭，与普通患者相比，SAP 病死风险较高［2］。抑制病情恶化为SAP 患者的主要治疗原则，连续肾脏替代疗法及血液灌流（hemoperfusion，HP）等非药物疗法均为其重要治疗手段［3］。HP 是一种将患者血液引入带固态吸附剂灌流器，经吸附作用清除血液内多种内源性、外源性药物及代谢废物、毒素的血液净化技术，能有效改善SAP 患者的临床症状［4］。研究指出，炎症介质在SAP 患者的发生及病情进展中均有重要作用，胰酶活化可损伤胰腺组织并加剧机体炎症反应，炎症因子高表达可上调血脂水平并加重病情，下调胰腺组织中炎症因子表达或可有效抑制SAP 病情加重［5］。血必净为一种中药制剂，能通过改善胰腺微循环而减少炎症因子释放，且近年有研究表明，血必净的抗炎机制在于抑制线粒体炎症通路信号［6］。本研究旨在分析血必净联合HP 对改善SAP患者线粒体炎症通路及血脂水平的影响。

资料与方法

1.一般资料

选取2020年3月至2023年1月南阳市第一人民医院收治的100 例SAP 患者进行随机对照试验，在征得患者本人及家属同意后，以数字随机表法将其分为观察组和对照组，各50 例。观察组中男30 例、女20 例，年龄43～77（60.22±5.17）岁，发病时间3～8（5.52±1.36）h，入院时急性胰腺炎Ranson评分［7］基线值3～6（4.22±1.35）分；对照组中男29例、女21 例，年龄45～75（61.32±5.33）岁，发病时间4～7（5.16±1.44）h，入院时Ranson 评分基线值4～5（4.11±1.27）分，两组患者一般资料差异均无统计学意义（均P＞0.05）。⑴纳入标准：入组患者均符合胰腺炎诊断要点［8］；发病至入院时间均≤8 h；入院时Ranson 评分基线值均在3～6 分之间；均知情、同意且自愿参与研究。⑵排除标准：伴其他感染性症状或免疫功能障碍；参与本研究前接受过其他急诊治疗；已知对研究所用药物存在过敏史；有严重出血倾向；伴其他消化道器质性疾病［8］；伴精神、认知障碍疾病或昏迷。

本研究已获得南阳市第一人民医院医学伦理委员会批准（Q29201）。

2.方法

2.1.对照组 实施常规HP 治疗。⑴常规治疗：入院后统一予以禁食、禁水，连接吸氧装置后予以针对性胃肠减压、抑酸、纠正水电解质紊乱及酸碱失衡。⑵HP 疗法：经常规实施中心静脉穿刺后，将500 ml 浓度为0.9%的生理盐水加入至OC-200（A）型一次性血液灌流器（成都欧赛医疗器械有限公司，国械注准20193100567）中进行HP治疗，HP治疗速率为100～250 ml/min，2 h/次，1次/d，持续治疗7 d。

2.2.观察组 实施血必净联合常规HP治疗。常规治疗及HP 治疗同对照组，本组按50 ml/次剂量加用血必净注射液（天津红日药业股份有限公司，国药准字Z20040033，10 ml）配合治疗，2次/d，连续治疗7 d，治疗期间需按2 500 U/次剂量配合肝素纳注射液（江苏万邦生化医药集团有限责任公司，国药准字H32020612，2 ml∶12 500 U）进行抗凝治疗。

3.观察指标

⑴于治疗开始前24 h内、治疗7 d后分别检测并对比两组患者的线粒体炎症通路相关蛋白表达水平，检测方法如下：①甲酰肽受体1（FPR1）及寡聚化结构域样受体3（NLPR3）均采用免疫组化法检测，于胰腺组织横断面切取一块直径为0.5 cm 的病变组织置入固定液中，24 h 后应用乙醇、无水乙醇进行脱水后加入透明剂，并应用石蜡进行透蜡、包埋后获得石蜡切片样本，后应用二甲苯对切片作脱蜡处理并加入乙醇作水化处理；经热修复抗原后阻断内源性过氧化氢酶，封闭后加入1∶400 的FPR1 抗体及1∶200 的NLPR3 抗体；于4 ℃下孵育过夜，次日洗片后再次进行常规二抗孵育，经加入二氨基联苯胺［上海杰浩生物技术有限公司，沪食药监械（准）字2013第1401615号］显色后予以苏木素复染，并予以梯度乙醇，待二甲苯透明后应用中性树胶予以封片后，于光镜下随机观察3个400倍视野观察染色强度及面积，分别以FPR1、NLPR3 高阳性、阳性、低阳性评分之和作为最终阳性评分［9］。②线粒体素-泛素氧化还原酶链（MT-ND）均采用蛋白免疫印迹法检测，MT-ND1、MT-ND3、MT-ND6 均上样60 μg 后加入蛋白定量试剂盒，经电泳分离蛋白；转膜并进行封闭后分别加入1∶500（MT-ND1）、1∶1 000（MT-ND3）、1∶1 000（MT-ND6）的一抗于4 ℃下孵育过夜；次日洗膜后加入1∶500 二抗再次孵育1 h，后经化学发光法曝光后测定MT-ND1、MT-ND3、MT-ND6蛋白灰度，并参考β-actin灰度记录相对表达量。⑵于治疗开始前24 h内、治疗7 d后分别检测并对比两组患者的血脂水平及炎症指标，统一采集外周静脉血作抗凝处理，后按转速3 000 r/min，半径10 cm 离心5 min 后将血清样本送入AU5800 全自动生化分析仪［美国，贝克曼库尔特公司，国食药监械（进）字2010 第2402510号］中检测，血脂水平的检测方法为免疫比浊法，炎症指标检测方法为酶联免疫吸附试验。

4.统计学方法

数据均采用软件SPSS 22.0 处理，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验，组内采用配对t检验，计数资料用率（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

1.两组FPR1、NLPR3受体阳性表达评分比较

治疗前，两组患者的蛋白受体阳性表达评分差异均无统计学意义（均P＞0.05）；治疗后，观察组的FPR1、NLPR3受体阳性表达评分均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 两组重症急性胰腺炎患者治疗前后FPR1与NLPR3受体阳性表达评分比较（分，± s）

表1 两组重症急性胰腺炎患者治疗前后FPR1与NLPR3受体阳性表达评分比较（分，± s）

注：观察组实施血必净联合常规血液灌流治疗，对照组实施常规血液灌流治疗；FPR1 为甲酰肽受体1，NLPR3 为寡聚化结构域样受体3；与同组治疗前比较，aP＜0.05

2.两组MT-ND相对表达量比较

治疗前，两组患者MT-ND 相对表达量差异均无统计学意义（均P＞0.05）；治疗后，观察组的MT-ND1、MT-ND3、MT-ND6 相对表达量均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表2。

表2 两组重症急性胰腺炎患者治疗前后MT-ND相对表达量比较（± s）

表2 两组重症急性胰腺炎患者治疗前后MT-ND相对表达量比较（± s）

3.两组患者的血脂水平比较

治疗前，两组患者血脂水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）；治疗后，观察组的总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）水平均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表3。

表3 两组重症急性胰腺炎患者治疗前后血脂水平比较（mmol/L，± s）

注：观察组实施血必净联合常规血液灌流治疗，对照组实施常规血液灌流治疗；TC 为总胆固醇，TG 为三酰甘油，LDL-C 为低密度脂蛋白；与同组治疗前比较，aP＜0.05

4.两组患者炎症指标比较

治疗前，两组患者炎症指标差异均无统计学意义（均P＞0.05）；治疗后，观察组的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、血清淀粉酶（AMS）水平均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表4。

表4 两组重症急性胰腺炎患者治疗前后炎症指标比较（± s）

注：观察组实施血必净联合常规血液灌流治疗，对照组实施常规血液灌流治疗；TNF-α为肿瘤坏死因子-α，IL-6为白细胞介素-6，AMS为血清淀粉酶；与同组治疗前比较，aP＜0.05

讨论

SAP 为一种常见危重症，此病起病急、病情进展快，可给患者生命安全造成严重威胁。相关数据显示，近年随外科治疗技术不断进步，SAP 的治愈率有明显提升，但因病情凶险，此病总体病死率仍可高达17%左右［10］。目前，临床尚未明确SAP 具体发病原因，但考虑与多种胆道疾病以及患者个人暴饮暴食或酗酒等因素密切相关［11］。以上因素均可破坏胰腺细胞结构，胰腺细胞受损可释放大量胰酶，活化的胰酶可逐步消化机体自身胰腺组织，并引发胰腺炎症反应或导致组织坏死［12］。研究指出，炎症介质异常升高是导致SAP 发生及病情进展的重要原因，也是诱发全身炎症反应综合征和多器官衰竭的危险因素［13］。在传统HP 及药物治疗基础上，积极控制炎症反应并下调炎症因子表达水平或可抑制病情恶化［14］。血必净为一种由丹参、赤芍、红花、川芎、当归制成的中成药，具有活血化瘀、疏经通络等功效。

FPR1、NLPR3 均为线粒体炎症信号通路中的重要蛋白因子，FPR 受体能通过控制免疫细胞并将其招募至损伤部位而激活白细胞，作为一种G 蛋白偶联受体，可有效增强机体免疫应答并驱动中性粒细胞高度聚集于炎症反应位点［15］。NLPR3 为炎性小体的重要组成部分，其对于免疫细胞的活化机制主要在于可早期识别病原体相关分子模式和损伤相关分子模式方面，高表达NLPR3 能促使大量促炎因子释放并加剧机体炎症反应［16］。本研究中，观察组治疗后

注：观察组实施血必净联合常规血液灌流治疗，对照组实施常规血液灌流治疗；MT-ND 为线粒体素-泛素氧化还原酶链；与同组治疗前比较，aP＜0.05的FPR1、NLPR3 受体阳性表达评分均低于对照组，提示将血必净联合用于SAP 的HP 治疗能有效抑制线粒体炎症通路相关蛋白表达。除FPR 受体外，NFPs 在SAP 患者的全身炎症反应综合征发生机制中也有重要作用。目前，已发现的NFPs 主要包括MT-ND1～6，其中MT-NE1、MT-ND3、MT-ND6 表达情况与机体炎症反应呈显著正相关［17］。本研究中，观察组治疗后的MT-ND1、MT-ND3、MT-ND6 相对表达量均低于对照组，提示血必净还可对NFPs 产生显著抑制效果。通过应用血必净抑制线粒体炎症信号通路后，即可有效促进SAP 患者的症状改善并减轻胰腺组织损伤［18-19］。既往有研究指出，被大量释放的炎性介质可上调血脂水平表达，而高血脂水平亦会加剧机体炎症反应，二者相互作用并形成恶性循环后也会逐步加重SAP患者病情［20］。本研究中，观察组治疗后的TC、TG、LDL-C 水平均低于对照组，提示血必净结合HP 能增强对血脂水平的抑制作用。李依和周平［21］研究指出，血必净能有效抑制SAP的血脂水平，该研究结果显示，观察组经血必净配合治疗后，TG 水平明显低于对照组，与本研究结果具有一致性。当患者血脂水平得到明显控制后，其机体炎症反应也能得到相应缓解，故观察组治疗后的TNF-α、IL-6、AMS水平均低于对照组。

综上所述，血必净可有效抑制线粒体炎症信号通路，与HP 联合用于治疗SAP 能下调患者血脂水平并缓解炎症反应。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明李召龙：收集分析数据、文章撰写、统计分析；安霞：给与论文指导性意见、分析数据；张宏伟：对文章内容做出批判性指导意见、指导撰写