基于网络药理学及分子对接技术挖掘陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的作用机制

赵曼彤，曹霞，林佳子，王晓，杨梦茹，梁蓝元，岳义民，钟璐阳，杜杰勇，余佳敏，周彤，李建华，沈学娟，王毅，舒尊鹏

广东药科大学 中药学院，广东 广州 510006

代谢相关脂肪性肝病是一种与胰岛素抵抗（IR）和遗传易感密切相关的代谢应激性肝损伤，是排除酒精以外其他因素造成的肝脏弥漫性脂肪浸润，包括单纯性脂肪肝及脂肪性肝炎，其病理特征为肝细胞脂肪变与脂质蓄积[1]。近年来，随着我国人民生活水平的不断提高，高糖、高脂的不良饮食以及习惯性长期久坐、缺乏运动的生活方式使人群患上代谢相关脂肪性肝病的风险提高[2]。据统计，近10 年代谢相关脂肪性肝病的患病率逐年提高，其在儿童中的患病率为8%～12%，在成人中的患病率为25%～48%。已成为中国经济发达地区最常见的慢性肝病。代谢相关脂肪性肝病不仅会导致肝损伤，同时也会导致2 型糖尿病、心脑血管疾病等系列疾病的发生，严重威胁我国人民的健康安全[3-4]。由于其无特异性症状与体征的隐匿性，迄今为止代谢相关脂肪性肝病的发病机制仍存在争议。目前，西医临床上治疗代谢相关脂肪性肝病多采用调脂类药物，但效果甚微[5]。我国传统中医理论中未有“代谢相关脂肪性肝病”之名，但根据临床病因可归属于“肝癖”“胁痛”“黄疸”“积聚”等范畴[6]，其病机主要为过食肥甘厚腻之物，或情志不调，或久病体虚，致使体内痰湿之邪大量聚集导致痰湿内阻，阻碍脾气上升，使脾失健运，化脂膏痰浊于肝，并留积于肝脏，气机阻滞于中焦，津液运行受阻，气滞血瘀，导致肾肝脾功能失调，最终诱发代谢相关脂肪性肝病[7-8]。由此可知代谢相关脂肪性肝病的病变部位虽主要在肝，但其治疗关键在脾。

陈皮为芸香科植物橘Citrus reticulataBlanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮，其种类分为“陈皮”和“广陈皮”[9]。广陈皮为茶枝苷的栽培变种，以广东新会（茶枝柑的主产地）所产的质量为优。陈皮含有丰富的黄酮、柠檬苦素、生物碱及挥发油等化合物[10]。现代药理学研究表明，陈皮可用于咳嗽痰多、脾虚气滞[11]。《本草分经》中记载“广陈皮，辛、苦、温。入脾、肺气分，能散、能和、能燥、能泻。利气调中，消痰快膈，宣通五脏，统治百病”。《本草害利》中记载：“橘皮，广东新会皮为胜，陈久者良，理气和中妙品”。《瘴疟指南》中记载的“陈皮半夏汤”，《宋·太平惠民和剂局方》中记载的“二陈汤”，均以陈皮为主药，发挥理气健脾、燥湿化痰之效，为临床常用于调理中枢气机的要药。结合已有文献发现，在治疗代谢相关脂肪性肝病的各类药物中，理气中药的使用频次靠前；在中药处方中，陈皮的使用频率排名靠前[12-13]。由此可见，陈皮作为理气类药物对于代谢相关脂肪性肝病可能具有潜在的治疗作用。

目前已有研究表明陈皮具有改善代谢相关脂肪性肝病的作用，但其发挥功效的药效物质基础与分子机制尚不明确[14]。网络药理学是一个多学科的研究领域，它将生物信息学、网络生物学与药理学信息相整合，通过计算和药理学实验相结合的方法来预测药物在体内可能的作用机制[15]。因此本实验利用网络药理学的方法，借助TCMSP、GeneCards等多个数据库对陈皮理气功效的活性化合物和潜在的蛋白靶点进行预测，采用Cytoscape 构建“化合物–靶点–通路”网络，并利用分子对接技术验证陈皮中化合物与靶点的相互关系，探究陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的分子机制。

1 材料与方法

1.1 陈皮化合物、化合物潜在作用靶点、理气功效靶点、代谢相关脂肪性肝病疾病靶点的搜集

以“陈皮”为检索词，在中药系统药理学（TCMSP，http://lsp.nwsuaf.edu.cn/tcmsp.php）数据库中进行全成分的检索，通过PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）数据库对陈皮现有靶点进行收集，利用SwissTargetPrediction（http://www.swisstargetprediction.ch/）数据库对陈皮潜在作用靶点进行预测，将所得成分与化合物靶点进行整合，得到药物成分与化合物靶点的数据集合。

以“regulatingqi”“non-alcoholic fatty liver disease”为关键词，在GeneCards（http://www.Genecards.org/）数据库中进行检索，将获取的靶点结果进行筛选汇总后去重，得到理气功效与代谢相关脂肪性肝病疾病的相关靶点。

1.2 陈皮–理气映射靶点、陈皮–理气–代谢相关脂肪性肝病映射靶点的获取

将陈皮目标化合物靶点集合与理气靶点集合之后对二者进行映射，得到和陈皮–理气功效靶点；随后将陈皮–理气靶点与代谢相关脂肪性肝病靶点进行映射，得到陈皮–理气–代谢相关脂肪性肝病关键靶点。利用JP Online 在线作图工具，制作陈皮功效成分作用靶点与疾病靶点相交的Venn 图。

1.3 陈皮理气功效关键化合物的筛选

参考以下条件对陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的主要功效成分进行筛选：（1）陈皮在《中国药典》2020 年版中规定的质量标志物；（2）通过CNKI 文献数据库与Web of Science 文献数据库检索陈皮理气功效与陈皮治疗代谢相关脂肪性肝病的活性化合物，得到陈皮目前已经被证明具有药理活性或在药物中含量较高的有效成分。

1.4 陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病蛋白相互作用（PPI）的分析及网络可视化的构建

将56 个映射靶点输入到STRING 数据库中，选择“multiple proteins”，置信度蛋白参数评分值＞0.4，去掉单一靶点进行分析，得到PPI 网络关系图，并将数据结果以TSV 格式导出。将输出数据导入Cytoscape 3.9.0 中，对PPI 网络进行可视化处理，并运用“network analyzer”功能对PPI 网络进行拓扑参数的分析，根据degree 值排序对节点的颜色深浅与大小进行调节，得到PPI 关系可视化网络，挖掘网络中的核心作用靶点。

1.5 潜在靶标基因本体（GO）与京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析

DAVID（https://david.ncifcrf.gov/）数据库是一个生物信息数据库，为大规模的基因蛋白提供综合的生物功能注释信息，将1.2 项下所得到的药物–疾病靶点输入到DAVID（https://david.ncifcrf.gov/）数据库中进行靶点通路分析，筛选P＜0.05 的通路作为分析的关键通路，并通过微生信在线作图工具（http://www.bioinformatics.com.cn/）输出GO、KEGG通路富集分析气泡图。

1.6 陈皮理气功效的“化合物–靶点–通路”网络的构建

根据陈皮药物主要活性成分，及其所调控的关键靶点和靶点所关联的通路，利用Cytoscape 3.9.0构建“化合物–靶点–通路”网络。

1.7 分子对接

分子对接能够准确预测已知结构的小分子配体在合适蛋白配体的结合部位，并评估其结合模式和结合亲和力，是新药开发领域广泛使用的计算工具[16]。本研究选择的候选蛋白来于PPI 网络中degree 值较高的靶点，并在RCSB-PDB 数据库中选择蛋白结构；选择对接的候选化合物为1.3 项下得到的关键化合物，其三维结构来自Pubchem 数据库。使用AutoDock Vina 将这些功效化合物与蛋白对接，对接结果被导入Pymol 进行三维可视化。

2 结果

2.1 陈皮潜在作用靶点与疾病靶点搜集情况

通过对 TCMSP、PubChem、SwissTarget Prediction 3大数据库进行搜集与筛选共得到目标化合物63 个，将其作为陈皮的候选成分，见表1。进一步分析，陈皮中63 个候选成分共获得了540 个潜在作用靶点。另外，通过对GeneCards 数据库进行代谢相关脂肪性肝病疾病靶点搜索，共得到580个与理气相关的靶点信息，478 个与代谢相关脂肪性肝病相关的靶点信息。

表1 陈皮的活性成分Table 1 Active ingredients of t Citrus Reticulata

2.2 陈皮–理气–代谢相关脂肪性肝病映射靶点分析

为了进一步理解陈皮化合物成分与理气靶点之间的复杂关系，将陈皮目标化合物作用靶点与理气靶点经行映射，得到陈皮–理气映射靶点共127个，包括丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt1）、酪氨酸激酶（SRC）、表皮生长因子受体（EGFR）、原癌基因c（JUN）等；具有理气功效的药效成分14 个，包括柚皮素（naringenin）、川陈皮素（nobiletin）、橘皮素（tangeretin）等，见图1。将陈皮–理气靶点与478 个代谢相关脂肪性肝病疾病靶点进行映射得到56 个陈皮–理气–代谢相关脂肪性肝病关键靶点，包括Akt1、VEGF、EGFR、JUN、雌激素受体α（ESR1）等，见图2。为了更好地展示药物作用靶点与疾病靶点之间的逻辑联系，本实验利用VP Online 在线作图工具将陈皮药物靶点、理气功效靶点、代谢相关脂肪性肝病疾病靶点取交集，直观展示各个集合之间的特征关系，见图3。

图1 陈皮–理气药效成分、映射靶点图Fig.1 Citrus Reticulata -regulating qi pharmacological components,mapping targets

图2 陈皮–理气–代谢相关脂肪性肝病药效成分、映射靶点图Fig.2 Citrus Reticulata -regulating qi-metabolic associated fatty liver disease pharmacodynamic components,mapping targets

图3 陈皮–理气–代谢相关脂肪性肝病交集靶点Venn 图Fig.3 Citrus Reticulata-regulating qi-metabolic associated fatty liver disease intersecting target Venn diagram

2.3 陈皮理气功效关键化合物的筛选

通过《中国药典》2020 年版和以发表文献[17-18]中被证实陈皮理气功效与治疗代谢相关脂肪性肝病的药效成分，对14 个候选成分进行筛选，发现陈皮发挥理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的有效成分主要为黄酮类物质，其中陈皮发挥理气功效的化合物为多甲氧基黄酮类物质（包括川陈皮素、二氢川陈皮素、橘皮素）和二氢黄酮类（包括橙皮苷、柚皮素、柚皮苷）[18]，在具有理气功效的化合物中可治疗代谢相关脂肪性肝病的药效物质为川陈皮素、橘皮素、橙皮苷、柚皮苷、柚皮素。

2.4 PPI 网络分析结果

将STRING 数据库中得到的陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病靶点的degree 值（表2）。按照degree 值大小进行排序，degree 值高的靶点有Akt1、EGFR、白蛋白（ALB）、JUN、血管内皮生长因子A（VEGFA）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）等，可以认为这些靶点在陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病中起到主要的作用，并在Cytoscape 软件中建立PPI 网络，见图4。

图4 陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病PPI 网络图Fig.4 PPI interaction network of Citrus Reticulata in treatment of metabolic associated fatty liver disease by regulating qi

表2 陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病核心网络潜在靶点拓扑参数分析Table 2 Analysis of potential target topology parameters of the core network of Citrus Reticulata in treatment of metabolic associated fatty liver disease by regulating qi

2.5 通路富集分析结果

在DAVID 数据库中将陈皮理气功效治疗非酒精性的潜在作用靶点进行KEGG、GO 通路富集分析。以P＜0.05 为筛选条件，GO 分析可通过富集得到蛋白靶点作用的生物过程（BP），分析结果提示陈皮发挥理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的BP 显著富集在细胞凋亡、基因转录、葡萄糖稳态等225 个BP 中，GO 富集气泡图如图5 所示。以P＜0.05 为筛选条件，得到关键的信号通路图如图6 所示，KEGG 富集分析表示，许多靶基因与细胞增殖凋亡通路，如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt 信号通路、Ras 信号通路；免疫炎症相关通路，如Toll样受体信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路；胰岛素抵抗通路和代谢相关脂肪性肝病信号通路密切相关。

图5 陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的GO 富集分析气泡图Fig.5 Bubble plot of GO enrichment analysis of Citrus Reticulata in treatment of metabolic associated fatty liver disease by regulating qi

图6 陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的KEGG 通路富集分析气泡图Fig.6 KEGG pathway enrichment analysis bubble plots of Citrus Reticulata for metabolic associated fatty liver disease by regulating qi

2.6 “化合物–靶点–通路”网络构建

将5 个候选成分、56 个映射靶点与关键通路在Cytoscape 软件中建立“化合物–靶点–通路”网络，见图7。其中川陈皮素、柚皮素、橙皮苷、柚皮苷、橘皮素为陈皮发挥理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的关键成分，Akt1、EGFR、ESR1、PPARγ，PPARα、JUN、VEGFA 为陈皮发挥理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的关键靶点。

图7 陈皮理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病“化合物–靶点–通路”网络图Fig.7 “Compound– target-pathway” network diagram of Citrus Reticulata in treatment of metabolic associated fatty liver disease by regulating qi

2.7 分子对接验证

将PPI 网络筛选的degree 值较大关键靶点与药物中对应的活性成分进行分子对接验证，从PDB 数据库获得所需文件：Akt1（PDB ID：6CCY）、PPARγ（PDB ID：2ATH）、PPARα（PDB ID：3VI8）、EGFR（PDB ID：3IKA）、JUN（2P33），所有受体文件均做删除有机物、水分子及加氢分配电荷处理。柚皮素、柚皮苷、川陈皮素的三维结构来自PubChem。使用Pymol 对对接结果进行三维可视化处理。“靶点蛋白–活性分子”绘制成对接模式图，见图8。结果表明，柚皮素、川陈皮素等活性成分与Akt1、JUN 等关键靶点之间有很好的亲和力，可通过作用于相关靶点治疗或改善代谢相关脂肪性肝病。

图8 分子对接结果图Fig.8 Plot of molecular docking results

3 讨论

代谢相关脂肪性肝病是指除酒精和其他明确的损肝因素外所致的代谢综合征，其发病机制尚待研究，目前“二次打击”学说所引申出的“多重打击”学说为代谢相关脂肪性肝病病机提供了更为精准的解释。大量文献报道表明在代谢相关脂肪性肝病研究早期，IR 所导致的肝脂肪变性，造成了肝内脂肪酸聚集即第一次打击；进一步研究发现，在氧化应激和脂质过氧化等作用下，引发了一系列的肝细胞损伤、坏死、炎症、纤维化即第二次打击；随着相关研究的深入，目前出现的“多重打击”学说包含脂毒性、线粒体功能障碍、内质网应激、脂肪组织功能障碍、炎性细胞因子等多重打击因素，为代谢相关脂肪性肝病的病机提供了新的解释[19]。目前临床中多采用保肝、调脂等治疗手段，但其效果甚微，因此，寻找新药物治疗代谢相关脂肪性肝病疾病迫在眉睫。现已有研究表明，陈皮可以明显针对此种疾病，但其潜在的药效物质基础和作用机制还有待研究[14]。

根据记载，传统中医古籍中并无代谢相关脂肪性肝病，总结多数医家经验认为脾虚、痰湿为非酒精性脂肪肝最为常见的证型特点[20]。基于此特点，治疗时要始终抓住疏肝健脾、化痰利湿这2 大原则。陈皮作为理气类良药，其味苦“能燥脾家之湿证”，具有理气健脾、燥湿化痰功效，适用于各种因素所致的脾胃气滞证。姜萍等[21]发现陈皮等理气类药物可降低高脂诱导的大鼠模型脂肪匀浆中TNF-α 水平，抑制代谢相关脂肪性肝病大鼠肝脏炎症，还证明了“脾不升清”是肥胖产生及发展的病机关键之一，说明陈皮可发挥健脾理气的功效，干预肥胖所引发的代谢综合征疾病。二陈汤在中药古籍中具有理气健脾、燥湿化痰之功效，其主治湿痰、咳嗽痰多等症状，近年来临床中采用二陈汤治疗代谢相关脂肪性肝病，且疗效显著。石磊等[22]发现二陈汤中的陈皮具有降低高脂饮食小鼠肝脏氧化应激的作用，减缓代谢相关脂肪性肝病病情的发展。但由于陈皮中所含化学成分复杂，调节的靶点众多，导致其发挥理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的作用机制尚不明确。故本文采用网络药理学及分子对接方法探究陈皮潜在的药效物质基础及可能的作用通路，应用大数据挖掘的手段，从系统性、整体性和相关性探讨陈皮理气功效对代谢相关脂肪性肝病的改善作用，为陈皮的临床应用及功效开发提供了理论基础。

在陈皮药效物质的研究中，利用网络药理学收集并预筛选了陈皮的化学成分，共筛选出柚皮素、橙皮苷、柚皮苷、橘皮素、川陈皮素、二氢川陈皮素等63 个主要活性化合物。根据文献报导，在上述成分中，橙皮苷对代谢相关脂肪性肝病大鼠肝脏有明显的保护作用，其可减少肝细胞脂肪变性，抑制汇管区炎性细胞浸润，减轻肝损伤程度[23]。另有王焱等[24]发现橙皮苷能降低代谢相关脂肪性肝病大鼠血清中TNF-α、白细胞介素（IL）-6 等炎症因子的水平，同时提高IL-10 抗炎因子的水平，发挥改善代谢相关脂肪性肝病大鼠肝细胞的损伤作用。汪娇等[25]通过建立代谢相关脂肪性肝病细胞模型，发现川陈皮素具有改善代谢相关脂肪性肝病脂肪功能障碍作用，其分子机制主要是川陈皮素通过抑制肝脏中lncLSTR 上调，降低肝细胞脂质沉积，增加肝脏甘油三酯清除率。柚皮苷是发挥止咳化痰理气作用的主要功效成分，柚皮素为其代谢产物,具有抗炎、抗氧化等特性[26]。此外，文献还报道了橘皮素可增加核因子E2相关因子2（Nrf2）的核转位，上调其下游因子血红素加氧酶-1（HO-1）、谷氨酸半胱氨酸连接酶亚基（GCLC）的表达，降低肝脏中的氧化应激，进而缓解代谢相关脂肪性肝病[27]。柚皮素可减少脂肪的从头合成，增加脂肪酸氧化并改善代谢紊乱，减少代谢相关脂肪性肝病的发病风险[28]。根据网络药理学预测及上述文献报道的共同论证，本研究最终确定柚皮素、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素可能为陈皮利用理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病的主要药效物质基础。

基于上述陈皮利用理气功效抗代谢相关脂肪性肝病的药效物质基础研究后，对代谢相关脂肪性肝病的核心靶点和信号通路进行筛选与富集，得到相关蛋白靶点56 个，通过PPI 网络互作分析发现，Akt1、EGFR、PPARα、PPARγ、c-JUN 为陈皮通过理气功效发挥抗代谢相关脂肪性肝病核心网络中的关键靶点。根据相关研究表明，Akt1 可作为多条信号通路的交叉点，通过影响下游多种因子的活化，介导细胞凋亡和糖代谢过程[29]。Xie 等[30]发现脂联素可以通过Akt1/叉头框蛋白O1（FoxO1）信号通路，抑制FoxO1 的表达，从而改善代谢相关脂肪性肝病。另有研究表明，内质网应激是肝脏炎症和代谢性肝病发病机制的重要过程，c-Jun 能够保护肝细胞免受内质网应激，调节肝细胞存活[31]。Yan等[32]发现JNK/c-Jun 能够直接结合先天免疫反应的关键调节因子（C7ORF41）的启动子，抑制C7ORF41的转录进而保护棕榈酸诱导的代谢相关脂肪性肝病小鼠的肝脏炎症。EGFR 属于ErbB 受体酪氨酸激酶家族，其通过调控脂肪酸合成和脂肪分解的转录因子，在代谢相关脂肪性肝病小鼠模型的脂肪变性中发挥了重要作用[33]。PPARα 和PPARγ 是过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）核受体超家族中的2 种亚型，在调节炎症和脂质等方面发挥作用。PPARα 能够促进脂肪酸氧化、调节炎症、改善胰岛素敏感性。PPARγ 能够调节脂肪组织的增殖与分化，减少肝细胞的脂肪生成；同时有研究发现，PPARγ 的激动剂，能够抑制TNF-α、纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）、IL-6 等炎症因子的表达，间接减少炎症状态下炎症产物的生成，从而改善代谢相关脂肪性肝病[34]。Goldwasser 等[35]证明柚皮素是PPARα 和PPARγ 的激动剂，其可诱导PPARγ 调节脂肪酸氧化基因（CYP4A11、ACOX），增加脂肪酸的氧化，进而逆转代谢相关脂肪性肝病的症状。基于上述文献报道，Akt1、EGFR、PPARα、PPARγ、c-JUN 等关键蛋白参与生物学过程中多个重要环节，因此认为这5 种关键蛋白可能为代谢相关脂肪性肝病发病机制中重要调节因子。

基于上述关键靶点的预测，进行了KEGG 通路富集分析。结果表明，许多关键靶点与PI3K/Akt 信号通路、Ras 信号通路、胰岛素信号通路、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路、核因子-κB（NFκB）信号通路等密切相关。其中PI3K/Akt 信号通路和AMPK 信号通路为胰岛素信号传导与胰岛素抵抗相关的关键途径，在代谢相关脂肪性肝病中发挥重要作用。胰岛素通过与胰岛素受体（InsR）结合，激发细胞内胰岛素受体底物IRS 家族的磷酸化，磷酸化的IRS 与PI3K 的p85 调节亚基的结合，导致其下游的信号分子Akt 磷酸化，从而调节细胞的增殖、分化、凋亡和葡萄糖转运等多种活动[36]。此外胰岛素除了活化Akt 以促进脂肪形成外，还可激活AMPK 促进脂肪酸的合成，而激活后的AMPK 又可以间接抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）以改善胰岛素抵抗，进而改善代谢相关脂肪性肝病[37-38]。彭慧敏[39]研究发现，川陈皮素能够活化AMPK 信号通路，降低3T3-L1 细胞中脂质的积累。理气消瘿方中主要的药物为陈皮，此方具有理气健脾、燥湿化痰的功效，田曼等[40]发现，理气消瘿方可抑制PI3K/Akt 信号通路激活，调控甲状腺肿大鼠模型的细胞凋亡/增殖，发挥理气功效对病症起到治疗效果。陈袁等[41]发现，川陈皮素通过抑制PI3K/Akt 通路的激活，促进代谢相关脂肪性肝病大鼠机体肝细胞自噬，减轻肝细胞脂肪变性，改善代谢相关脂肪性肝病的症状。由此推测，陈皮中的川陈皮素，可通过抑制PI3K/Akt 通路的激活，发挥理气化痰的功效，促进代谢相关脂肪性肝病患者肝细胞的凋亡/增殖，达到改善代谢相关脂肪性肝病的目的。Bhattacharya 等[42]揭示了，柚皮素通过上调Akt1 蛋白，促进胰岛素信号通路的表达，增强INS-1E 细胞中胰岛素分泌和葡萄糖敏感性，恢复胰岛β细胞中与脂毒性相关基因的调控，减轻代谢相关脂肪性肝病的脂毒性。Yang 等[43]发现柚皮素通过EGFR/PI3K/Akt 信号通路，下调活性氧（ROS）的产生，抑制NF-κB 的活性，减少气道炎症过程中黏液的生成，发挥化痰理气作用。由此推测，柚皮素可通过抑制EGFR 表达，影响PI3K/Akt 信号通路，发挥理气作用；同时上调Akt1 蛋白表达，促进胰岛素信号通路的传导，减轻代谢相关脂肪性肝病的脂毒性。基于上述讨论，推测PI3K/Akt 信号通路、Ras信号通路、胰岛素信号通路、AMPK 信号通路、NFκB 信号通路与陈皮发挥理气功效治疗代谢相关脂肪性肝病密切相关。

综上所述，陈皮中的橘皮素、柚皮苷、柚皮素、川陈皮素、橙皮苷可能为其发挥理气功效的主要药效物质基础，其通过调节Akt1、PPARγ、JUN、ESR1、PPARα 等蛋白靶点，调控PI3K-Akt 信号通路、Ras信号通路、胰岛素信号通路、AMPK 信号通路、NFκB 信号通路等信号通路，发挥理气功效改善代谢相关脂肪性肝病的作用。

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