微卫星不稳定性联合肿瘤突变负荷评估非小细胞肺癌病人术后复发转移的临床价值

姬生威 王萍

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer ,NSCLC)早期临床表现不明显,临床诊断多以中晚期为主,生存率较低[1]。肿瘤根治术是治疗肿瘤的最佳手段,但术后生存率仍较低,术后常以放化疗辅助,但其治疗疗效和预后程度差异较大。有研究指出,肿瘤突变负荷(tumor mutation load,TMB)和微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)对肿瘤预后有着密切关系[2]。术后复发转移是影响病人生存率的主要因素之一,化疗疗效与术后复发转移的发生有着直接影响的关系。本研究分析MSI联合TMB对NSCLC术后病人复发转移的评估价值。

对象与方法

一、对象

2020年3月～2021年3月本院收治的NSCLC病人病理组织标本80例,男42例,女38例。根据术后是否发生复发转移分为复发转移组(47例)和未复发转移组(33例)。复发转移组:男∶女(例)=29∶18,平均年龄(64.54±3.47)岁,鳞癌∶非鳞癌=14∶33。未复发转移组:男∶女(例)=13∶20,平均年龄(63.79±2.53)岁,鳞癌∶非鳞癌=12∶21。两组性别年龄等比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 影响NSCLC术后复发转移的单因素分析

纳入标准:(1)符合NSCLC诊断标准;(2)符合肺癌根治术适应症并同意手术且手术顺利;(3)已留存癌组织病理组织标本及静脉血标本;(4)完成1年以上随访;(5)术后复发转移者均已经影像学或病理诊断进行确诊。排除标准:病例资料缺失;合并其他恶性肿瘤;术前有接受免疫治疗。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》。

二、方法

1.参考《非小细胞肺癌术后辅助治疗中国胸外科专家共识(2018版)》[3],两组病人均行肺癌根治术,术后均予以维持性化疗。

2.临床相关资料收集:自制信息调查表,以查阅病历的方式收集病人临床相关资料:性别、年龄、病理类型、吸烟史、肿瘤分期、有无淋巴结转移等。资料收集均由专职人员负责,采用双人录入法进行登记核对。

3.MSI及TMB检测:癌组织病理标本经固定、石蜡包埋后切片染色,静脉血经抗凝处理沉淀白细胞,提取肿瘤细胞和白细胞中DNA。MSI检测采用PCR,经变性、退火、延伸后,进行电泳反应(150 V),观察电泳图。与正常组织比较,任一电位电泳条带有增多或减少的表现则为阳性,反之则为阴性。TMB采用基于Illumina测序平台的5209ene panel NGS测序。TMB(mut/Mb)=总突变数量(包括同义、非同义点突变、置换、插入及缺失突变)/目标区域编码区大小,与白细胞数据对比。TMB突变个数在8个及以上为高TMB,反之则为低TMB。

三、统计学处理

采用SPSS 21.0软件进行数据分析,计数资料用例(%)表示,行χ2检验,Logistic回归单、多因素分析影响病人术后复发转移的危险因素,评估价值以ROC曲线分析,联合检查采用并联,Delong Test函数比较不同检测方案评估NSCLC术后复发转移ROC曲线之间AUC。P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1.影响NSCLC术后复发转移的单因素分析:复发转移可能与吸烟史、肿瘤分期高、低中分化、有淋巴结转移、MSI阴性、高TMB有关(P<0.05)。见表1。

2.影响NSCLC术后复发转移的多因素分析:将是否发生复发转移作为因变量,有复发转移=1;未复发转移=0,表1中有差异的自变量进行赋值:吸烟史(是=1;否=0),肿瘤分期(Ⅲ期=1;Ⅱ期=0),肿瘤分化(低中分化=1;高分化=0),淋巴结转移(是=1;否=0),MSI(阴性=1;阳性=0),TMB(高水平=1;低水平=0)。多因素分析结果显示,淋巴结转移、高TMB是影响术后复发转移的独立危险因素(P均<0.05);MSI阳性是术后复发转移的保护因素(P<0.05)。见表2。

3.ROC曲线分析:MSI与TMB检测均具有评估NSCLC术后复发转移的价值(P<0.05),MSI AUC与 TMBAUC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合检测AUC与MSIAUC比较,差异有统计学意义(P<0.05),但与TMBAUC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表2 影响NSCLC术后复发转移的多因素分析

表3 ROC曲线分析水平分析

讨论

NSCLC临床多采取术后放化疗辅助[4],但仍有复发转移的可能性。本研究结果显示,NSCLC术后发生复发转移可能与存在吸烟史、肿瘤分期高、低中分化、有淋巴结转移、MSI阴性、高TMB有关,与既往研究部分相似[5]。其原因可能是,非吸烟史病人的肺部对化疗药效的敏感性较高,降低复发转移风险;肿瘤恶性程度越高,术中残留的癌细胞恶性程度可能越高;存在淋巴结转移的病人,癌细胞侵袭部分广泛,术后癌细胞易感性可能高于无淋巴结转移者,在受到外界一些致癌因素的刺激下易发生复发转移。

MSI是指肿瘤组织DNA多聚酶滑动导致重复序列中一个或多个碱基的错配和微卫星重组,导致碱基对缺失或插入,而造成微卫星长度的改变,出现新的微卫星等位基因现象,而错配修复的基因突变导致DNA功能改变,易引发广泛MSI[6]。本研究显示,复发转移者MIS阳性率低于未复发转移者,提示MSI阳性与其术后预后具有显著关系,与张文静等[7]研究相似。MSI阳性的出现,肿瘤细胞内存在大量的DNA功能缺失,基因转录功能减弱,可有效增加治疗疗效,降低术后复发转移的风险。TMB是指肿瘤细胞基因组内基因外显子编码区每兆碱基中发生置换和体细胞突变的总数。本研究显示,NSCLC术后复发转移的TMB水平较高,与既往研究相似[8]。肿瘤组织中突变的基因越多,就越有可能产生更多的异常的蛋白质,而这些异常的蛋白质产生的抗原对机体免疫功能存在攻击作用,增加病人术后复发转移的风险。多因素分析结果显示,淋巴结转移、MSI阳性、低TMB是影响术后复发转移的独立危险因素。ROC曲线显示,MSI与TMB的检测均具有评估病人术后复发转移的价值,两者AUC比较无差异,联合检测的价值虽有所提高,但与TMB比较无显著差异,提示临床医师可直接观察NSCLC病人病理组织的TMB特征来对病人术后复发转移风险进行评估。