复方中草药对禽白血病鸡成活率及免疫性能的影响

刘 永 ，李子健 ，闫世雄 ，孙大卫 ，付 晶 ，段竹青

（1.云南开放大学 云南乡村振兴教育学院，云南 昆明 650101；2.云南农业大学 动物科学技术学院，云南 昆明 650201；3.云南省畜牧兽医科学研究院 草食家畜研究所，云南 昆明 650224；4.云南省安全生产技术中心，云南 昆明 650041）

禽白血病（AL）是由禽白血病病毒（ALV）和禽肉瘤病毒（ASV）群引起的造血组织中某些细胞成分增生为主的肿瘤性传染病的统称[1-3]，已列入我国二类动物疫病[4]。ALV 感染鸡群后，会导致鸡群发生肿瘤性疾病，更重要的是会造成患病鸡群生产能力和免疫力降低，严重影响蛋鸡产蛋质量和肉鸡生长，严重威胁家禽业的健康、持续、高效发展。现阶段还没有治疗AL 的方法，只能通过ELISA 检测法[6]检测病原，淘汰AL 阳性鸡来净化种群[5]。随着养禽业的发展以及科研、生产的需要，研究防治AL的方法将是今后养禽业的重要任务之一[7]。

在人类医学上，中草药治疗白血病已被临床应用[8-9]，如金银花、蒲公英、紫花地丁等[8]。免疫是机体对自身和非自身的识别，清除非自身的大分子物质，保证机体平衡的一种生理学反应。免疫分子是免疫应答的具体执行者，主要有膜表面抗原受体、主要组织相容性复合物抗原、白细胞分化抗原、黏附分子、抗体、补体、细胞因子、抗原等[10]。抗体又称免疫球蛋白（Ig），是免疫系统受抗原刺激后，B 细胞转化为浆细胞产生的能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白[11-13]，是衡量机体免疫功能的重要指标。禽类已证实的免疫球蛋白有IgG、IgM 和IgA等3 种，其中IgG 是体液免疫应答产生的主要抗体，在血清中含量最高，具有吞噬、凝集、沉淀抗原以及中和病毒和毒素的作用。IgA 是黏膜免疫反应产生的主要效应分子，在机体的防御机制中发挥重要作用。IgM 是B 细胞表面表达最早的抗体，也是B细胞分化过程中主要的表面标志[14-15]。补体是一组有酶活性的球蛋白，激活、调控补体的各成分以及补体受体统称为补体系统[16]。补体系统是具有重要生物学意义的效应系统和效应放大系统[17]。C3、C4 是补体系统中的固有成分。C3 在补体激活中起重要作用，其高低与总补体的含量相平行，通过测定C3 可反应血清总补体水平[18]。C4 在经典途径的活化阶段起着重要作用[19]。C3、C4 是衡量体液免疫的重要指标。

本研究选择了已证明具有增强免疫力和提高抗病毒能力的13 味中草药按一定比例配合，添加到饲料中进行饲喂，统计AL 阳性鸡成活率、免疫球蛋白IgG、IgA，补体C3、C4 含量，以寻求最佳的提高武定鸡免疫力和抗病毒能力，抑制（或治疗）白血病的复方中草药配方。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物 供试动物选用云南农业大学教学实习鸡场孵化的通过ELISA 胎粪检测为AL 阳性的220 羽武定鸡。

1.1.2 试验药材 增加免疫力复方：黄芩、党参、黄精、何首乌、鸡血藤、白术等6 味中草药（云南广昆堂农业科技有限公司）。

抗病毒复方：板蓝根、连翘、鱼腥草、穿心莲、大青叶、黄芩、黄连等7 味中草药（云南广昆堂农业科技有限公司）。

1.1.3 仪器及试剂盒 Thermo Fisher 全波长多功能酶标仪（美国Thermo 公司），禽白血病抗原ELISA 检测试剂盒（武汉科前生物股份有限公司），禽免疫球蛋白IgG、IgA 检测试剂盒（江苏宝莱生物科技有限公司），禽补体C3、C4 检测试剂盒（江苏宝莱生物科技有限公司）。

1.2 试验设计

试验鸡于云南农业大学教学实习鸡场饲养，饲养至90日龄，采集血液进行AL 复检，根据阳性情况，选择体质相近的180 羽鸡分为6 组（对照组、剂量1、剂量2、剂量3、剂量4、剂量5）进行试验。复方中草药分别由增强免疫力配方及提高抗病毒能力配方复合而成，其配方如表1 所示。

表1 复方中草药的配方Tab.1 Compound Chinese herbal formulas%

对照组在整个试验期间饲喂基础日粮，5 个试验组分别按0.2%增免疫+0.2%抗病毒（剂量1）、0.4%增免疫+0.4%抗病毒（剂量2）、0.6%增免疫+0.6%抗病毒（剂量3）、0.8%增免疫+0.8%抗病毒（剂量4）、1%增免疫+1%抗病毒（剂量5）在饲料中添加复合中草药饲喂。

整个试验期的饲养根据云南农业大学教学实习鸡场饲养管理规范进行，按常规免疫接种，自由采食和饮水，定时观察鸡群健康状况，做好日常记录工作。试验期饲粮根据中国鸡饲养标准（1986年）及参照美国NRC 饲养标准配制，如表2 所示。

表2 日粮营养水平Tab.2 Dietary nutrient level

在饲料中添加复方中草药饲喂0月（90日龄）、1月（120日龄）、2月（150日龄）、3月（180日龄）、4月（210日龄）后测定体质量并进行翅下采血，测定AL 抗原含量及血液免疫指标C3、C4、IgA、IgG含量。

1.3 测定项目及方法

AL 抗原含量和血液免疫指标补体C3、C4 以及免疫球蛋白IgA、IgG 含量的测定按照检测试剂盒生产厂商提供的说明书进行操作。

1.4 数据分析

所有试验数据均采用Excel 2013 和SPSS 21.0软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 复方中草药饲喂武定鸡的体质量分析

不同日龄不同组别间体质量比较如图1 所示。

图1 不同日龄不同组别间体质量比较Fig.1 Comparison and analysis of body weight among different groups at different days

从图1 可以看出，复方中草药添加饲喂0月（90日龄）、1月（120日龄）、2月（150日龄）、3月（180日龄）、4月（210日龄）和对照组体质量相比，饲料中添加复合中草药饲喂对试验鸡生长无明显影响。

2.2 复方中草药饲喂武定鸡的补体C3 含量分析

不同日龄不同组别间血清中C3 含量比较如图2 所示。

图2 不同日龄不同组别间血清中C3 含量比较Fig.2 Comparison of C3 content in serum among different groups at different days

由图2 可知，饲料中按不同剂量添加复合中草药饲喂试验鸡后，血清中C3 含量变化情况，相同日龄各处理组与对照组间，120、150、180、210日龄各剂量组血清中C3 含量均低于对照组，且120日龄剂量1 组血清中C3 含量显著低于对照组（P＜0.05），剂量2 组210日龄血清中C3 含量显著低于对照组（P＜0.05）。相同日龄不同处理组间，120日龄剂量2 组血清中C3 含量显著低于剂量1 组（P＜0.05）。相同处理组不同日龄间，对照组和剂量1 组120日龄血清中C3 含量极显著高于150日龄（P＜0.01），剂量3 组210日龄血清中C3 含量显著高于120日龄（P＜0.05），且除剂量3 组，外其他各组别血清中C3含量随着日龄的增加均呈先下降后上升的趋势。

2.3 复方中草药饲喂武定鸡的补体C4 含量分析

由图3 可知，饲料中按不同剂量添加复合中草药饲喂试验鸡后，血清中C4 含量变化情况，相同日龄各处理组与对照组间，120、150、180、210日龄各剂量组血清中C4 含量均低于对照组，且120日龄剂量2 组血清中C4 含量显著低于对照组（P＜0.05）。相同日龄不同处理组间，120、150、180、210日龄各剂量组血清中C4 含量无显著差异（P＞0.05）。相同处理组不同日龄间，剂量4 组120日龄血清中C4 含量显著高于150日龄（P＜0.05），且各组别血清中C4 含量随日龄的增加均呈先下降后上升的趋势。

图3 不同日龄不同组别间血清中C4 含量比较Fig.3 Comparison of C4 content in serum among different groups at different days

2.4 复方中草药饲喂武定鸡的免疫球蛋白IgA 含量分析

从图4 可以看出，饲料中按不同剂量添加复合中草药饲喂试验鸡后，血清中免疫球蛋白IgA 含量变化情况，相同日龄各处理组与对照组间，120、150、180、210日龄各剂量组血清中免疫球蛋白IgA含量均低于对照组，且120日龄剂量1 组血清中免疫球蛋白IgA 含量显著低于对照组（P＜0.05），210日龄剂量2 组血清中免疫球蛋白IgA 含量极显著低于对照组（P＜0.01）。相同日龄不同处理组间，210日龄剂量3 组血清中免疫球蛋白IgA 含量极显著高于剂量2 组（P＜0.01）、显著高于剂量5 组（P＜0.05）；180日龄剂量3 组血清中免疫球蛋白IgA 含量显著高于剂量5 组（P＜0.05）。相同处理组不同日龄间，剂量2 组120日龄血清中免疫球蛋白IgA 含量极显著高于210日龄（P＜0.01），剂量5 组150日龄血清中免疫球蛋白IgA 含量显著高于210日龄（P＜0.05）。

图4 不同日龄不同组别间血清中IgA 含量比较Fig.4 Comparison of IgA content in serum among different groups at different days

2.5 复方中草药饲喂武定鸡的免疫球蛋白IgG 含量分析

不同日龄不同组别间血清中IgG 含量比较如图5 所示。

图5 不同日龄不同组别间血清中IgG 含量比较Fig.5 Comparison and analysis of IgG content iin serum among different groups at different days

从图5 可以看出，饲料中按不同剂量添加复合中草药饲喂试验鸡后，不同处理组血清中免疫球蛋白IgG 含量变化情况，相同日龄各处理组与对照组间，除180日龄外，120、150、210日龄各剂量组血清中免疫球蛋白IgG 含量均低于对照组，且120日龄剂量2 组血清中免疫球蛋白IgG 含量显著低于对照组（P＜0.05）。相同日龄不同处理组间，180日龄剂量1 组血清中免疫球蛋白IgG 含量显著高于剂量2 组（P＜0.05）。相同处理组不同日龄间，对照组120日龄血清中免疫球蛋白IgG 含量极显著高于180日龄（P＜0.01），剂量3 组120日龄血清中免疫球蛋白IgG 含量显著高于180日龄（P＜0.05）。

2.6 复合中草药抑制家鸡白血病的效果

从表3 可以看出，在添加复合中草药饲喂试验鸡4 个月后，剂量1、2、3 组成活率均不同程度高于对照组，且剂量2 组成活率达93%；剂量2、3 组出现不同程度的转阴现象，说明该复合中草药配方具有增强武定鸡免疫力和抗病毒能力，抑制（或治疗）AL 的效果。

表3 复合中草药抑制家鸡白血病效果Tab.3 Inhibitory effect of compound Chinese herbs on avian leukemia%

3 结论与讨论

AL 是威胁家禽产业健康发展的重要疫病之一，是一种有脂囊膜的反转录病毒[20]，可分类为A～J 10 个亚群[21]。其中，A～E 和J 亚群主要感染鸡；尤其是感染J 亚群之后，家禽通常会多发肿瘤、肾病和成红细胞增多等病症，最终导致生长延迟、免疫耐受，甚至死亡[22]。ALV 会引起禽类免疫器官出现障碍等[23-24]，导致丧失免疫功能，降低抗病毒能力。

中草药有药源广泛、遗传毒性低等优点，可在治疗同时对机体的功能从根本上进行恢复，增强免疫力和抗病毒能力是当前防治疾病新药研发的热点。如黄芩、党参、黄精、白术、板蓝根、穿心莲、大青叶等都具有增强免疫力、提高抗毒能力、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等作用[25]。免疫球蛋白IgG、IgM 和IgA 是衡量机体免疫功能的重要指标，在机体的防御机制中发挥重要作用。C3、C4是补体系统中的固有成分，是衡量体液免疫的重要指标。本试验主要测定了饲料中按不同剂量添加复合中草药饲喂试验鸡后，血清中免疫球蛋白IgG、IgA 及补体C3、C4 的含量，以揭示在饲料中添加复合中草药饲喂AL 阳性鸡后免疫球蛋白及补体水平的变化，结果显示，无论是试验组还是对照组随着日龄的增长IgG、IgA 及C3、C4 含量都大致呈现先下降后增长的趋势，且在180日龄时含量最低。这与何健等[26]给肉鸭饲喂自然霉变玉米，随着日龄的增加其血液中免疫球蛋白IgG 也随之增加；马金萍[27]通过新城疫弱毒苗感染免疫雏鸡，与非感染组相比IgA 抗体水平均有所提高；冯焱等[28]研究发现，免疫亢进组血液免疫指标均不同程度的低于非免疫组和常规免疫组；QI 等[29]研究发现，攻毒沙门氏菌后，北京油鸡的IgY、IL-6、TNF-α 血清介质水平显著高于白来航鸡的研究结果一致。从而说明，在机体受到外界病原体感染时，体内IgG、IgA、C3、C4 含量会有所提高以抵御病原体感染。本研究中各试验组IgG、IgA、C3、C4 含量均不同程度低于对照组，可间接说明添加中草药饲喂后有增强AL 阳性鸡免疫能力的作用。

廖吕燕等[30]研究表明，由黄芪、党参、白术等制成的中药多糖能在一定程度上对抗环磷酰胺所致的免疫损伤。方磊涵等[31]研究表明，由黄芪、党参、茯苓、麦冬等制成的中药多糖不仅能促进雏鸡的生长，同时能显著提高鸡体内的免疫球蛋白及抗体效价，增强雏鸡的免疫功能。CHANG 等[32]研究黄连、鱼腥草等6 味中药制成的复方预防小鼠伤寒沙门氏菌感染时发现，黄连可使血清IgA 水平降低41%。本研究中，饲料中添加不同剂量的复合中草药组免疫球蛋白IgA、IgG 和补体C3、C4 含量均不同程度的低于对照组，说明本复合中药配方能够缓解AL 所造成的免疫机能受损。5 个剂量组中剂量2、3 效果最佳，成活率达93%、86%，且还有转阴现象，转阴率达7%。说明该复合中药配方还有抑制（或治疗）AL 发病或者缓解AL 所造成的免疫机能受损的功效。但剂量4、5 组出现了死亡率增加的现象可能是因为中草药的毒性效应，计划在下步验证试验中重点注意添加剂量的控制。

在本试验中，从120日龄开始随着日龄的增加免疫球蛋白和补体均表现为先降低后增加的趋势；试验组的免疫球蛋白和补体含量均低于对照组。随着日龄的增长，当达到体成熟时，武定鸡的抗病能力最强；本复合中药配方可以提高AL 感染武定鸡的成活率、免疫能力和抗病力；本中草药配方具有抑制（或治疗）武定鸡AL 的效果，以剂量2 组（0.4%抗病毒+0.4%增免疫）效果最佳。