加味葛根颗粒制备工艺研究

李文莉 朱 凯 赵 莹 王永春 李军鸽

长春中医药大学，吉林 长春 130117

加味葛根颗粒原方经长春中医药大学针灸推拿科多年临床应用，疗效确切，安全性高。方剂由葛根、麻黄、桂枝等九味药组成，有解表升津、舒筋解肌之功效，主治颈椎病、项痹、筋伤[1-2]。

加味葛根颗粒原处方在临床上主要以汤剂为主，汤剂存在携带不便、贮藏困难等缺点，颗粒剂具有起效迅速，携带、服用、贮藏均较方便，并能克服汤剂的缺点[3-6]。在保留其制备方法及药效物质的基础上现进行院内制剂开发研究。本研究采用传统的水煎煮提取方法，以出膏量和葛根素含量共同作为考察指标，采用权法确定综合评分，根据正交试验，优选出最佳的提取过程，以求结果稳定可靠。通过观察颗粒成型状态、溶化性等指标，对辅料种类及用量、润湿剂浓度等条件进行成型工艺考察，确定加味葛根颗粒最佳制备工艺，也为后期其质量标准研究与制剂生产开发提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 LC2030(日本岛津公司)高效液相色谱仪；ME204E分析天平、XS105DU分析天平(METLER)；BPZ-6123LC真空干燥盒(上海一恒科学仪器有限公司)。

1.2 试药与药材 葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110752-201816，纯度：95.6%)，甲醇(色谱纯，美国Fisher公司)，其他试剂均为分析纯；经长春中医药大学唐秋竹教授鉴定检验，葛根、麻黄、桂枝、生姜、炙甘草、芍药、大枣、木瓜、牛膝九味中药饮片全部合格，由吉林北药药材加工有限公司购进；可溶性淀粉(安徽山河药用辅料股份有限公司，200908)。

2 方法与结果

2.1 葛根素含量测定方法的建立

2.1.1 对照品溶液的制备 取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含葛根素0.4 mg的溶液，摇匀，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 样品适量，研细，取约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇25 mL，称定重量，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

a

a b c

2.1.3 阴性对照溶液的制备 取不含葛根的处方水提液干燥样品，按“2.1.2”制备阴性对照溶液。

2.1.4 色谱条件 TechMate C18-ST色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相是甲醇-水(24∶76)；检测波长为250 nm；柱温为35 ℃；流速为1.0 mL/min。

2.1.5 方法学验证

2.1.5.1 专属性试验 取葛根素对照品，供试品溶液及阴性对照溶液，按2.1.4色谱条件试验，记录色谱图，如图1所示。结果，阴性无干扰。

一般地，设X0∈＜a，b＞，X∈＜c，d＞，且X0∈X，则点x关于区间X0和X组成的区间套的位置规定为:

2.1.5.2 线性考察 取葛根素对照品溶液(浓度0.0093 mg/mL、0.0186 mg/mL、0.0247 mg/mL、0.0371 mg/mL、0.0445 mg/mL、0.0928 mg/mL)各5 μL，分别注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到葛根素线性方程为：Y=0.0000002X+0.0041(r=0.9992)，表明葛根素在该范围内线性关系良好。

2.1.5.3 重复性试验 取同一供试品，按“2.1.2”制备6份供试品溶液并进行测定，葛根素平均含量为2.59mg/g，RSD为2.26%，说明该方法具有良好的重复性。

2.1.5.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，按“2.1.2”项下制备供试品溶液，按“2.1.4”色谱条件，分别于0 h、4 h、8 h、12 h、18 h、24 h进行测定，结果，葛根素含量的平均值为2.50 mg/g，RSD为1.08%，24 h内供试品溶液基本稳定。

2.2 出膏量测定 精密量取25 mL的水提液，置一恒重蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃烘箱内烘干至恒重，置干燥器中30 min放凉，计算出膏量。

2.3 提取工艺研究

2.3.1 浸泡时间及药材吸水率考察 按处方比例取药材3份，分别加5倍量水浸泡至透心，每隔30 min测量一次，直至药材全部浸透，滤出全部未被吸收的水液，得药材的吸水率，结果见表1。当饮片浸泡1 h后，吸水量基本不变，药材基本浸透，平均吸水量为286 mL，平均吸水率为101.42%(约饮片干重的1倍量)。由此确定，第一次煎煮需多加1倍的水，浸泡1 h后再第一次加热提取。

表1 药材吸水率考察结果

表2 加水量考察结果

2.3.3 提取时间的考察 称取处方药材282 g，4份，分别加7倍量水，第一次煎煮追加1倍量水，浸泡1 h，分别提取1 h、1.5 h、2 h、2.5 h，提取2次，滤过，合并滤液，按“2.2”方法测定出膏量，取干膏粉，按“2.1”方法测定葛根素含量。结果见表3，随着提取时间的延长，出膏量和葛根素含量呈增加趋势，当提取时间延长至2.5 h时，出膏量和葛根素含量与2 h相差不多，结合生产实际节约资源，可选择1 h、1.5 h、2 h为正交试验提取时间考察水平。

表3 提取时间考察结果

2.4 正交实验设计 加水量选择5倍药材量、7倍药材量、9倍药材量三水平；煎煮时间选取1 h、1.5 h、2 h三水平；煎煮次数选择1次、2次、3次，对三因素三水平进行整理，见表4，以出膏量、葛根素含量为考查指标，利用正交L9(34)设计正交实验。按方剂配比称取药材282 g，共9份，第一次加水量追加1倍量，并在首次加热提取之浸泡1 h。按照L9(34)正交表进行水煎煮提取试验，按“2.2”方法测定出膏量，取干膏粉，按“2.1”方法测定葛根素含量。

表4 正交试验因素水平表

按上述公式计算出膏量(Y1)、葛根素含量(Y2)两项指标组合权重系数分别为0.373、0.627。综合评分=(Y1/Y1max×0.373+Y2/Y2max×0.627)×100%。将综合评分导入正交表，结果正交试验分析结果见表5。方差分析见表6。

表5 正交实验结果

表6 方差分析

表5分析可知，因素A(加水量)的结果为A3>A2>A1，因素B(煎煮时间)的结果为B2>B3>B1，因素C(煎煮次数)的结果为C3>C2>C1；表6分析可知，A因素(加水量)和B因素(煎煮时间)没有显著影响，因素水平可选A3和B2，C因素水平对试验结果有显著的影响，C3>C2，但选C3提取周期较长，提取液过多，浓缩耗能较大，故从节能降耗方面综合考察，对A3B2C2与A3B2C3进行比较试验，A3B2C2方案出膏量为73.23 g，葛根素含量为187.26 mg，A3B2C3方案出膏量为74.33 g，葛根素含量为188.54 mg。A3B2C2方案的出膏比A3B2C3方案少1.095 g，葛根素含量无明显变化。考虑生产实际情况，可以选择C2水平，故最后选择A3B2C2为加味葛根颗粒最佳提取工艺，即每味药材按处方比例取药，第一次加10倍量的水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，滤过，第二次加9倍量水，煎煮1.5 h，滤过，滤液合并。

2.5 提取验证工艺 取处方药材3份，每份282 g，按确定的最佳提取工艺条件进行提取，浓缩，干燥，考察出膏量和葛根素含量。结果见表7。三份样品的出膏量、葛根素含量的RSD分别为1.77%、2.22%，综合评分均较高，重现性良好。故确定A3B2C2为最佳提取工艺。

表7 水煎煮工艺验证性试验结果

2.6 成型工艺研究

2.6.1 干膏的制备 称取处方药材，第一次加10倍量的水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，滤过，第二次加9倍量的水，煎煮1.5 h，滤过，合并滤液，药液浓缩至相对密度为1.18～1.25(65 ℃)的稠膏，60 ℃减压干燥，得干膏。

2.6.2 辅料的选择及药辅比的考察 制颗粒常用辅料有蔗糖、乳糖、糊精、可溶性淀粉等多种[8]，当干膏粉分别与蔗糖和乳糖制软材时，软材粘性较大，不容易过筛，且不易烘干，色泽不均匀，整粒后颗粒成型性不好；干膏粉分别与糊精和可溶性淀粉制粒软才时，软材适中，颗粒成型性好，溶化性符合规定[9]。糊精和可溶性淀粉具有无毒、水溶性较好、成型率较高、成本较低等特点，适用人群范围大[10]，对于加味葛根颗粒而言，可二选其一，本研究以可溶性淀粉作为加味葛根颗粒辅料。

取干膏粉3份，每份100 g，分别加入可溶性淀粉50 g、100 g、150 g，适量70%的乙醇，混匀制软材，干燥，整粒，制粒结果如图2，见表8，干膏粉∶可溶性淀粉为1∶1软材适中，过筛容易，颗粒成型性好，不易结块，色泽均一，溶化性符合要求，因此确定可溶性淀粉加入量约为干膏粉的1倍。

表8 干膏粉加可溶性淀粉制颗粒结果

2.6.3 过筛目数的考察 称取处方药材，按照 “2.6.1”项下的方法制备干膏，取干膏粉4份，分别加1倍可溶性淀粉，再加入70%乙醇作为润湿剂，分别用10目、14目、18目筛制粒，干燥，整粒，记录制粒情况及颗粒外观。结果14目筛时，颗粒的外观、粒径较均匀，故选择加味葛根颗粒过筛目数为14目。

2.6.4 润湿剂浓度的考察 称取处方药材，按照“2.6.1”项下方法制备干膏，取干膏粉3份，分别加1倍可溶性淀粉，再分别加入70%、75%、80%乙醇作为润湿剂，14目筛制粒，60 ℃鼓风干燥，整粒，记录制粒情况及颗粒外观。结果各浓度乙醇润湿剂对制颗粒影响不大，故选择浓度较低，制粒容易、颗粒成型较好的乙醇润湿剂浓度，根据试验结果决定采用70%乙醇作为加味葛根颗粒的润湿剂。

2.6.5 湿颗粒干燥温度的确定 湿颗粒制成后应迅速干燥，放置过久湿粒易结块，考察80 ℃、70 ℃、60 ℃干燥温度，结果80 ℃干燥颗粒较硬，易结块，70 ℃和60 ℃颗粒干燥效果较好，故湿颗粒干燥温度应控制在60～70 ℃干燥即可。

2.7 成型工艺验证 取处方药材3份，按“2.5”最佳提取工艺提取，药液浓缩至相对密度为1.18～1.25(65 ℃)稠膏，60 ℃减压干燥，粉碎成细粉，加1倍量可溶性淀粉、70%乙醇适量，混匀，14目筛制颗粒，60～70 ℃干燥，即得。成型工艺验证结果见表9。

表9 成型工艺验证结果

3 讨论

3.1 剂型的选择 中药院内制剂大多是有着多年临床经验的名老中医，经过多年实践总结出的疗效确切的验方[11]，还有一些是流传几千年的经典名方[12]。中药院内制剂的研究能极大地推动我国的中医药事业向前发展[13-16]。加味葛根颗粒原汤剂经长春中医药大学附属医院多年临床应用，反复实践、对比研究，结果表明，选择颗粒剂，既能保留原汤剂的功效，又便于患者的携带、服用、储藏等。

3.2 含量测定指标的选择 加味葛根颗粒由九味药材组成，处方中各药材所含有效成分各不相同，含量指标的选择，应从质量控制的可测性和整体性考虑，从处方配伍看，首选君药葛根，在《中国药典》(2020年版)含量测定中测葛根素，葛根素具有抗骨质疏松[17]、解热镇痛作用[18]、降血糖[19]、抗炎[20]等作用，故参考药典方法测定处方中葛根素含量，结果方法简单、可靠、易行，所得图谱峰型好，阴性无干扰，小试试验计算葛根素转移率较高为30%，故将葛根素确定为有效成分的评价指标。

3.3 提取工艺的选择 本方原剂型为汤剂，为了最大限度地保留其功效，因此选择传统的水煎煮工艺对其进行提取，以加水倍数、提取时间、提取次数作为考察因素，以出膏率和葛根素含量作为提取工艺的评价指标，为了使结果稳定，可靠，采用熵权法确定综合评分，并根据正交试验优选出最佳提取工艺。正交试验的优点是科学性高、效果显著、操作简便等，广泛应用于中药提取工艺的研究中[21]，根据试验结果表明，提取次数对综合评分影响最大，其次是加水倍数、提取时间。因此优选出的最佳提取工艺为加9倍量水，提取两次，每次1.5 h。

3.4 成型工艺的选择 通过观察颗粒成型性状态、溶化性、休止角等指标，对辅料种类及用量、润湿剂浓度、过筛目数、干燥温度等条件进行成型工艺考察。临床常用的辅料种类很多，经测定发现，加味葛根颗粒适宜的辅料为可溶性淀粉和糊精，对于本研究而言，选用溶解性更好的可溶性淀粉。通过试验考察，最佳配比为干膏粉：可溶性淀粉=1∶1。

本研究为保证加味葛根颗粒提取和辅料添加的客观准确性，选用多个指标综合测评。优选出最佳制备工艺为第一次加10倍量水(第一次煎煮追加1倍量水，煎煮前浸泡1 h)，第二次加9倍量水，每次1.5 h，滤过，合并煎液，滤液浓缩至相对密度为1.18～1.25(65 ℃)稠膏，60 ℃减压干燥，粉碎成细粉，加1倍量可溶性淀粉，加70%的乙醇适量，过14目筛制成颗粒，60～70 ℃干燥，整粒，即得。通过本研究优选出的加味葛根颗粒最佳制备工艺合理、可行、稳定，为后期颗粒的制备和生产提供理论依据。