温补气血膏方的质量标准研究

甘裕昌 黎晓曲 谢志平

（河源市中医院，广东 河源 517000）

河源市中医院自制膏方温补气血膏方（处方组成为：党参、黄芪、茯苓、白术、当归、白芍、酒川芎、熟地黄、肉桂、干姜、枸杞子、黄精、酒萸肉、山药、甘草）[1]。其中党参性味甘平，可补中益气，健脾益肺；黄芪味甘微温，有补气升阳、益卫固表、托毒生肌、利水消肿等多种作用；茯苓味甘淡、性平，可利水渗湿、健脾和中、宁心安神；徐飞飞等[2]研究显示，党参-茯苓-甘草水提取物具抗氧化及调节免疫力的作用。白术味苦甘、性温，有补脾、益胃、燥湿、和中、安胎之效；当归味甘、性温，赵翔凤等[3]通过归纳发现当归除《中华人民共和国药典》中所提到的功效主治外,尚有止咳止呕、止血止汗、明目养心、滋肝润木、安胎催产、排脓生肌等功效；酒川芎味辛、性温，具有改善心脏功能、解痉、抑制肺血管收缩、祛风止痛等功效；熟地黄味甘、性温，可滋阴补血，益精填髓；肉桂味辛甘、性热，可补元阳，暖脾胃，除积冷，温通心阳[4]；干姜味辛、性热，有温中逐寒，回阳通脉之效；枸杞子味甘、性平，可滋肾、润肺、补肝、明目；黄精味甘、性平，可养阴润肺，补脾益气，滋肾填精；酒萸肉味酸涩、性微温，主补肝肾，涩精气，固虚脱；山药味甘性平，可补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。党参、茯苓均有健脾之功，黄芪具补气升阳之效，白芍可养血柔肝，四药合用可具健脾和胃，补气养血之效，用于脾胃虚弱、气血不足证。温补气血膏方的疗效确切，口感佳，深受临床患者使用好评。

根据中成药中膏方的质量标准，膏方应达到优质、高效、安全、稳定的标准，即达到“三效”（高效、速效、长效）“三小”（剂量小、毒性小、副作用小）“三便”（服用方便、携带方便、储存方便）的要求[5-6]。通过本实验研究，形成温补气血膏方的质量控制标准，保证膏方质量，实现膏方生产的稳定性，保障临床疗效，亦为其他类型的膏方质量标准提供参考依据。

1 材料

1.1 仪器 匀浆仪漯河金田JT-C、电子分析天平FA2204N、生化培养箱MJ50、水分测定仪ESH105、超声清洗机KQ3200E、电热恒温水浴锅HWS-24、电热恒温干燥箱（东方-A）、恒温培养箱（东方DF-420SB）、电热恒温培养箱PHD9032、暗箱式紫外仪WFH-203B、便携式密度仪、电子生物显微镜（BM2000）。

1.2 药物 来自河源市中医院膏方药房的温补气血膏方，批次分别为：230301、230401、230501。见表1。

表1 温补气血膏方中所用中药饮片批号

1.3 标准品和试剂 芍药苷对照品（中检所：110736-201438），茯苓对照药材（中检所：121072-201611），枸杞子对照药材（中检所：121117-2019110），薄层G板（自制），所用其他试剂均为分析纯（analytical reagent，AR）。

2 方法与结果

2.1 膏方性状 膏方的外观性状、色泽、气味见表2。

表2 不同批次温补气血膏方的外观性状、色泽、气味

2.2 膏方相对密度 依据2020年版《中华人民共和国药典》（下文简称《中国药典》）[7]第四部通则0601煎膏剂中相对密度的测定方法进行测量，取供试品适量，加水约2倍，混匀作为供试品溶液。按下式计算，结果应符合各品种项下的有关规定。

（式中W1为比重瓶内供试品溶液的重量，单位为g；W2为比重瓶内水的重量，单位为g）

取供试品15 g，加水30 g，混匀，按照2020年版《中国药典》通则0601相对密度测定法中的比重瓶法进行测定。3批次温补气血膏方的相对密度结果见表3。

表3 不同批次温补气血膏方相对密度测定结果

煎膏剂的密度控制在1.3～1.4之间，平均相对密度为1.33。批次间差异较低，质量较稳定。

2.3 不溶物 依据2020年版《中国药典》第四部通则0183煎膏剂中不溶物的测定方法。取供试品5 g，加60～80℃的蒸馏水200 ml，搅拌使溶化，放置3 min后，观察，不得有焦屑等物质。三批次的不溶物观察结果见表4。

2.4 装量差异 本膏方为用小包装单剂量包装，依据2020年版《中国药典》第四部通则0942最低装量检查法（适用于标示装量以重量计的制剂）检查。

重量法，除非另有规定，取供试品5个，除去外盖和标签，容器外壁清洁并干燥，分别精密称定重量，除去内容物，容器洗净并干燥，再分别精密称定空容器的重量，求出每个容器内容物的装量与平均装量，结果应全部符合相关规定。如有1个容器装量不符合规定，则另取5个（50 g以上者3个）复试，直至全部符合规定。标示装量为20～50 g，平均装量不得少于标示装量，每个容器的装量不得少于标示装量的95%。

设定内容物的标示装量为28 g。取供试品3批次，每批次抽检5个。精密称定空包装膜的重量，再称重装好膏的整体重量。求出每袋装量和平均装量。结果见表5。

2.5 膏滋含水量 温补气血膏方3个批次各2～5 g，精密称定，按照2020年版《中国药典》0832水分测定法中的第二法（烘干法）进行含水量测定。三批样品测定结果见表6。

表6 不同批次温补气血膏方膏滋含水量测定结果

2.6 薄层色谱鉴别 膏方成分较复杂，应用2020年版《中国药典》第四部通则0502薄层色谱法分离鉴别膏方样品中的各组分。

2.6.1 白芍的薄层色谱鉴别：取样品5 g，加60～80℃的蒸馏水15 ml使其溶解，放冷，加乙醚各15 ml，振摇2次，弃去乙醚液；水液用正丁醇提取两次，每次15 ml，合并正丁醇液，用15 ml水洗涤后，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；按处方配比取各味药材（白芍除外）适量，同法制成阴性对照溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成1 ml含3.2 mg的对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（8∶1∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色蓝紫色斑点，阴性无干扰。见图1。

图1 白芍的薄层色谱测定结果

2.6.2 茯苓的薄层色谱鉴别：取样品10 g，加乙醚回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；按处方配比取各味药材（茯苓除外）适量，同法制成阴性对照溶液；另取茯苓对照药材0.4 g，同法制成阴性对照溶液。上述3种溶液各吸取5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干。喷2%香草醛硫酸溶液-乙醇（4∶1），在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性有干扰。见图2。

图2 茯苓的薄层色谱测定结果

2.6.3 枸杞子的薄层色谱鉴别：取样品5 g，加60～80℃的蒸馏水25 ml使溶解，放冷后，用乙酸乙酯振摇提取两次（20 ml、15 ml），合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；按处方配比取各味药材(枸杞子除外)适量，同法制成阴性对照溶液；另取枸杞子对照药材0.2 g，加水50 ml煮沸5 min，过滤，滤液用乙酸乙酯振摇提取两次（20 ml、15 ml），合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作为对照药材溶液。上述3种溶液各吸取10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以甲苯-甲醇-冰醋酸（40∶8∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性有干扰。见图3。

图3 枸杞子的薄层色谱测定结果

2.7 微生物限度 取3个批次的温补气血膏，分别取10 g，加入pH 值7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml，混匀，制成1∶10供试液。取1∶10 供试液适量，按照2020年版《中国药典》第四部通则1105微生物计数法的平皿法进行测定。微生物限度标准：需氧菌数≤1 000 cfu/g，霉菌数≤100 cfu/g，不得检出大肠埃希菌。测定结果符合药典中相关微生物限量标准。结果见表7。

表7 不同批次温补气血膏方的微生物限度检测结果

3 讨论

膏方，又名膏剂，属于中医里丸、散、膏、丹、酒、露、汤、锭八种剂型之一，有外敷和内服两种。通常人们说的膏方就是内服膏方，又称为膏滋，是经过多道工序将中药饮片反复煎熬，蒸发浓缩后掺入某些辅料而制成的一种稠厚状半流质。目前内服膏方又分为成方膏滋药（市场上、药店销售的现成膏方）和临方膏滋药（经过医师针对患者进行辨证处方，做到一人一方、一人一膏）两种[8]。由于不同处方药材种类不同，不同膏剂制作流程又有差异，因此制作流程应按照国家规定的相关标准对工艺流程中的关键环节进行质量控制，以使膏方的制备工艺流程符合科学化、合理化、规范化[9]。中医膏方在临床领域发挥的作用日益显著，《江苏中医膏方临床应用专家共识（2021）》的出台进一步规范了膏方的临床应用和制备工艺。但由于膏方制作的相关设备、工作人员素质、质量管理标准等多个因素各不相同，导致制成的中药膏方成品质量差别很大。因此，有必要对膏方制备工艺和质量控制标准进行进一步研究。本研究抽查了对我院制定的三个批次的温补气血膏，并按照质量相关检测标准对膏方进行了各方面鉴定。

3.1 温补气血膏外观性状、色泽、气味质量标准 通过观察我院三批次温补气血膏的外观性状、色泽、气味，外观性状为半流体、无焦屑，色泽黑褐色，气味微甜，符合膏方相关质量标准。

3.2 温补气血膏的相对密度、不溶物标准 国内学者研究发现，成品膏的相对密度与膏方成品的质量呈正相关，与含水量呈负相关[10]。河源市中医院温补气血膏方经过两次煎煮，滤出，浓缩收膏，膏体的平均相对密度在1.33左右，无焦屑，符合煎膏剂的要求。

3.3 温补气血膏的膏滋含水量标准 既往研究显示，如果加水量、煎煮次数过少，有效成分析出太少，已经溶出的药效成分会被药渣重新吸附，影响膏方的质量和疗效；如果加水量、煎煮次数过多，容易导致有效成分被稀释而浓度降低，且药液量增多，影响下一步的浓缩效率，同时导致膏方中出现较多的无效成分，严重影响膏方质量[11]。温气补血膏制作过程合并两次滤液后浓缩，严格控制收膏过程，其连续三批次膏滋含水量平均为42.01%。

3.4 温补气血膏的薄层色谱鉴别实验质量标准 芍药的薄层色谱组分鉴别结果表明：供试品和阴性对照液显示的斑点分离效果较佳，阴性对照液在供试品主斑点相应位置处无斑点出现，说明在该薄层色谱条件下，温补气血膏中的其他组分不干扰测定组分的鉴别。该方法专属性强，可作为温补气血膏的薄层色谱定性鉴别组分的质量控制方法。而茯苓、枸杞子的薄层色谱鉴别试验结果中，阴性对照液均出现干扰的主斑点，方法专属性不强，不建议作为定性鉴别膏方组分的标准方法。

3.5 温补气血膏的含水量测定及微生物限度标准 含水量测定结果表明我院的温气补血膏含水量较低，小包装密封，不容易霉变，利于保存。对连续三批次温补气血膏的微生物学进行验证，各指标完全符合国家标准。为达到更好的保存效果，保证膏方的保存质量和微生物检测标准，建议膏方保存时温度和相对湿度不能太高，同时应注意制作和包装过程的环境及人员卫生，应严格遵循中药制作流程的卫生检测标准。

综上，通过对温补气血膏方的膏滋相对密度、不溶物、装量差异、微生物限度检查、膏滋含水量、薄层色谱定性鉴别组分等质量稳定性指标进行了研究测定，基本确定了温补气血膏方的质量标准评价方法，通过研究证实温补气血膏方在现有制备条件下，质量可控，拟定的质量标准可行。在日后的生产过程中需严格执行相关标准，为市民提供质量稳定可控的膏方，亦可为其他膏方的质量控制研究提供参考依据。