高效液相色谱法测定食品中丙酸钠、丙酸钙的含量

2023-11-29曹倩蕾冯彦勇康宗华

现代食品 2023年18期

关键词：丙酸重复性回归方程

◎ 刘群，曹倩蕾，冯彦勇，康宗华

（1.湖南口味王集团有限责任公司，湖南益阳 413000 ；2.湖南中益食品化工检测院，湖南益阳 413000）

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

1.1.1 仪器

高效液相色谱仪、电子天平（AR224CN、XS205）。

1.1.2 试剂

甲醇、硅油、磷酸、磷酸溶液（1 mol·L-1）、磷酸氢二铵、磷酸氢二铵溶液(1.5 g·L-1）、酱油（义丰祥生产）、面包（亿满香生产）、标准品丙酸，实验室用水为符合一级水（GB/T 6682）的要求。

1.2 色谱条件

①色谱柱：Purospher RP-18 endcapped 250×4.6 mm 5 μm；检测波长：214 nm；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。②流动相：含有1.5 g·L-1磷酸氢二铵的溶液，该溶液通过将1 mol·L-1磷酸溶液逐渐加入并调节pH值在2.7～3.5范围内来配制。③在使用前，流动相需经过0.45 μm微孔滤膜过滤，以去除杂质；流速：1.0 mL·min-1。

1.3 试验步骤

1.3.1 样品预处理

为配制流动相，首先将1 mol·L-1磷酸溶液逐渐加入并调节pH值在2.7～3.5范围内。配制完成后，流动相需经过0.45 μm微孔滤膜过滤，以去除杂质。对于固体样品，需要先将其捣碎混匀后备用。对于面包样品，需要在鼓风干燥箱中进行风干。液体样品需要摇匀后备用。

1.3.2 标准溶液配制

①标准溶液配制。丙酸标准储备液（10 mg·mL-1）：准确称取250 mg丙酸标准品于25 mL容量瓶中，加水至刻度，4 ℃冰箱中保存，有效期为6个月。②标准系列工作液。用蒸馏法和直接浸提法提取样品制备丙酸标准液。在制备丙酸标准液的过程中，应注意使用高纯度的溶剂和试剂，并确保所有使用的仪器、容器和试剂都是清洁和干燥的[1]。另外，应遵循安全操作规范，避免接触有害物质或引发火灾或爆炸的情况。

1.3.3 标准曲线绘制

面包的线性回归方程为Y=561 992x-552.423，相关系数（r2）0.999 89；酱油的线性回归方程为Y=561 906x-741.991，相关系数（r2）0.999 92。其中，两者的线性范围均为0.05～0.5，检出限均为0.006。

分别称取酱油、面包样品各11份，按照以上方式处理，结果见表1。

表1 回收率和重复性结果表

逐级稀释标准溶液，采用信噪比法来测定样品中组分的检出限，当信噪比为3±1即为检出限。0.569 9 μg·mL-1浓度标准溶液连续进样2次，计算信噪比。

逐级稀释标准溶液，采用信噪比法来测定样品中组分的定量限，当信噪比为10±1即为定量限。1.900 μg·mL-1浓度标准溶液连续进样2次，计算信噪比。

2 结果与讨论

2.1 线性评价

根据GB/T 27417—2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》的规定，对于准确定量的方法，线性回归方程的相关系数R应大于等于0.99。从实验结果来看，直接浸提法和蒸馏法的相关系数分别为0.999 89和0.999 92，都远远高于0.99的要求，说明这两种方法的线性关系非常好。线性关系的好坏可以通过相关系数R来评价，R的取值范围为-1～1，R越接近1，表示线性关系越好；R越接近-1，表示线性关系越差；R接近0，表示线性关系非常弱甚至不存在[2]。

本实验中，直接浸提法和蒸馏法的相关系数都非常接近1，分别为0.999 89和0.999 92，说明它们的线性关系非常好。这意味着在一定浓度范围内，样品的浓度与测定值之间存在着线性关系，可以通过线性回归方程进行准确的定量分析[3]。因此，根据线性回归方程的相关系数R的高值，可以认为直接浸提法和蒸馏法都符合GB/T 27417—2017的要求，是准确的化学分析方法。

2.2 精密度评价

根据GB 5009.120—2016《食品安全国家标准食品中丙酸钠、丙酸钙的测定》第一法的规定，精密度的要求为≤10%。

在本实验中，测定酱油中丙酸的精密度为0.1%，测定面包中丙酸的精密度为0.2%。这两个结果都满足精密度≤10%的要求。精密度是评价方法的重复性和稳定性的指标，它反映了同一实验条件下，重复进行多次测定所得结果的离散程度。精密度越低，说明测定结果的离散程度越小，说明方法的重复性和稳定性越好[4]。在本实验中，酱油和面包中丙酸的精密度分别为0.1%和0.2%，远远低于10%的要求，说明测定结果的离散程度非常小，方法的重复性和稳定性非常好。因此，根据精密度的结果分析可以认为，该方法在测定酱油和面包中丙酸的含量时，具有较好的重复性和稳定性，结果是可靠的。

2.3 检出限评价

在本实验中，测得丙酸的检出限为0.006 g·kg-1，远远低于0.03 g·kg-1的要求，符合标准的要求。检出限是指在分析方法的测定条件下，能够被测定方法可靠地检出的最低浓度[5]。检出限的低值说明方法的敏感性高，能够准确地检测到低浓度的物质。在本实验中，测得丙酸的检出限为0.006 g·kg-1，远远低于0.03 g·kg-1的要求，说明该方法对丙酸的检测具有较高的敏感性，能够可靠地检测到低浓度的丙酸。

2.4 定量限评价

在本实验中，测得的定量限为0.019 g·kg-1，远远低于标准规定的限值，说明该方法对丙酸的测定具有较高的准确性和精确性。定量限的低值，说明方法的准确性高，能够精确地测定低浓度的物质。在本实验中，测得的定量限为0.019 g·kg-1，远远低于0.10 g·kg-1的要求，说明该方法能够准确地测定低浓度的丙酸，结果是可靠的。