Perlecan在子痫前期患者外周血中的表达及与VEGF-165的关系分析

张忠霞,王茹,邓乾葆,许琳,罗书

子痫前期是妊娠期特有疾病,多发生在妊娠20周后,其在世界范围内发病率约2%～8%[1-2]。对于子痫前期患者,若其病情未得到及时有效控制,不仅会出现血小板减少、肺水肿、肝肾功能损害等多种并发症,还会增加不良妊娠结局发生风险,如产后出血、胎膜早破、新生儿窒息等。多项研究显示,胎盘缺血缺氧、血管内皮细胞损伤与子痫前期的发生发展密切相关[3-4]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是维持内皮细胞完整的重要因子,可增加血管内皮细胞通透性,促进内皮细胞增殖、迁移,其中VEGF-165是最先发现的VEGF因子,是该家族中最典型的代表,可直接诱导血管内皮生长[5]。串珠素(Perlecan)是一种硫酸乙酰肝素糖蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPG)的核心蛋白,广泛表达于细胞膜、细胞基质,具有维持负电荷屏障、调节血管生成等多项作用,已有研究显示其与子痫前期的发生有关[6],但其是否影响患者妊娠结局尚缺乏明确报道。本研究通过检测子痫前期患者外周血中Perlecan、VEGF-165表达,探讨二者间关系,旨在为临床防治提供指导,促进妊娠结局改善。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年6月至2022年5月在海南医学院第二附属医院诊治的126例子痫前期患者,其中66例轻度子痫前期患者作为轻度组,60例重度子痫前期患者作为重度组,并选取同期年龄、孕周相匹配的126例产检正常者为正常组。纳入标准:① 轻度组、重度组符合《妊娠期高血压疾病诊治指南(2020)》[7]中相关诊断标准,正常组产检血压正常,未出现蛋白尿;② 3组均计划在我院分娩;③ 均知情本研究方案并自愿签署同意书。排除标准:① 合并慢性高血压、糖尿病;② 合并其他妊娠期并发症;③ 甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退症;④ 出血性疾病;⑤ 合并感染性疾病。轻度组年龄25～45岁,平均(37.12±3.44)岁;孕周21～28周,平均(24.61±1.79)周。重度组年龄26～45岁,平均(37.60±3.61)岁;孕周20～28周,平均(24.86±1.52)周。正常组年龄24～43岁,平均(37.48±3.50)岁;孕周20～28周,平均(24.55±1.61)周。3组基础资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

3组入组时均抽取外周静脉血3 mL,室温下静置30 min,离心10 min,分离取上层血清,保存于-80℃低温冰箱中待测。血清Perlecan、VEGF-165采用美国赛默飞世尔生产的MK3全自动酶标仪进行检测,试剂盒由仪器配套提供。

1.3 观察指标

① 比较3组血清Perlecan、VEGF-165水平。② 分析子痫前期患者Perlecan与VEGF-165相关性。③ 比较3组不良妊娠结局发生率。④ 比较不同妊娠结局的子痫前期患者资料。⑤ 分析Perlecan、VEGF-165与子痫前期不良妊娠结局发生的独立关系。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 3组血清Perlecan、VEGF-165水平比较

126例子痫前期患者血清Perlecan、VEGF-165水平分别为(8.31±1.79)nmol/L、(35.31±6.04)ng/L。3组血清Perlecan、VEGF-165水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),且轻度组低于正常组,重度组低于轻度组及正常组(P<0.05)。详见下页表1。

表1 3组血清Perlecan、VEGF-165水平比较

2.2 子痫前期患者Perlecan与VEGF-165相关性分析

子痫前期患者Perlecan与VEGF-165呈正相关(r=0.620,95%CI:0.499-0.717,P<0.001),详见图1。

图1 子痫前期患者Perlecan与VEGF-165相关性

2.3 3组不良妊娠结局发生率比较

3组产后出血发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组胎膜早破、低出生体重、胎儿窘迫、新生儿窒息及不良妊娠结局总发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 3组不良妊娠结局发生率比较[n(%)]

2.4 不同妊娠结局的子痫前期患者资料比较

126例子痫前期患者发生不良妊娠结局43例,发生率为34.13%(43/126)。发生不良妊娠结局的子痫前期患者年龄、孕周、孕产史、子痫或子痫前期病史、受孕方式、吸烟史、饮酒史、妊娠期贫血与良好妊娠结局患者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。发生不良妊娠结局的子痫前期患者孕前BMI、高血压家族史占比、SBP、DBP、UA、Cr高于良好妊娠结局的子痫前期患者,ALB、血清Perlecan及VEGF-165水平低于良好妊娠结局的子痫前期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。详见下页表3。

表3 不同妊娠结局的子痫前期患者资料比较

2.5 分析Perlecan、VEGF-165与子痫前期不良妊娠结局发生的独立关系

以子痫前期患者是否出现不良妊娠结局为因变量,以Perlecan、VEGF-165四分位组为自变量,以Q1分位组为对照,经Logsitic回归模型分析发现,调整混杂因素后Perlecan、VEGF-165仍是子痫前期患者不良妊娠结局的独立相关因素(P<0.05)。详见下页表4。

表4 Perlecan、VEGF-165与子痫前期不良妊娠结局发生的独立关系

3 讨论

目前关于子痫前期的发病及进展因素尚未完全明确,且缺乏特效防治方案,对于病情严重者甚至需终止妊娠。目前已有关于子痫前期患者不良妊娠结局的影响因素分析[8-9],但个体化差异明显。本研究发现,子痫前期患者不良妊娠结局发生率高于正常组,尤其是重度子痫前期患者,其不良妊娠结局总发生率高达45%,严重危害母婴健康。因此,能否通过检测客观生化指标判断患者不良妊娠结局风险仍是临床研究的重要方向之一。

血管内皮损伤在子痫前期发病、病情进展中的作用已逐渐得到临床重视[10-11]。VEGF与其受体结合后不仅能维持血压正常,同时是保持血管代谢平衡的关键。已有多项研究指出,子痫前期患者血清VEGF及胎盘组织中VEGF蛋白均降低,主要考虑与其促血管生成因子和抗血管生成因子失衡有关,从而影响胎盘血管发育,胎盘滋养细胞增殖、分化受到抑制,造成胎盘缺血缺氧[12-13]。VEGF-165作为最活跃、特异性结合位点最多的VEGF,可大量、持久诱导血管新生,有研究证实VEGF-165在脑卒中、糖尿病肾病等发生中具有重要作用[14-15],但VEGF-165在子痫前期患者外周血中的表达情况相关研究较少。本研究检测结果显示,轻度组血清VEGF-165水平低于正常组,重度组低于轻度组及正常组,这可能与子痫前期患者胎盘绒毛浸润能力下降、新生血管速度降低有关,且病情越重,其血管内皮功能损伤越明显,胎盘功能更差。由此推测,临床上可通过检测外周血VEGF-165表达情况判断患者妊娠结局。

Perlecan是基底膜上最先被识别的HSPG,可被体内唯一一种HSPG降解酶Hpa降解后释放多种活性因子,参与子痫前期胎盘缺血缺氧性损伤及肾损伤[16-17]。郭红霞等[18-19]学者占比研究结果显示,Perlecan不仅可通过转导Ras/Raf-1/MEK/ERK信号通路影响子痫前期小鼠肾小球血管生成,还能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路来促进血管内皮细胞过度自噬参与血管生成过程。

Perlecan在子痫前期诊断中的价值亦在王实等[20]研究中证实,当孕血清Perlecan低于9.46 nmol/L时存在子痫前期发病风险,且重度子痫前期患者血清Perlecan水平更低。本研究中血清Perlecan水平在正常孕妇、轻度子痫前期、重度子痫前期孕妇中依次降低,与上述结果具有一致性。经相关性分析发现,子痫前期患者Perlecan与VEGF-165呈正相关。VEGF-165可在基底膜蛋白多糖硫酸乙酰肝素链的参与下特异性结合VEGF-165受体,且膜蛋白聚糖-1在低氧诱导血管生长部位等血管生长因子较丰富的区域可延长血管生长因子半衰期,以确保硫酸乙酰肝素链与血管生长因子最大化结合,同时VEGF-165也可通过血管生长因子受体-2诱导基底膜蛋白多糖合成,新合成的基底膜蛋白多糖亦能进一步提高内皮细胞上生长因子与受体结合。因此可判断Perlecan在子痫前期患者病情进展中的作用与调节VEGF-165有关。

子痫前期患者妊娠结局受多种因素影响,本研究通过对比发现,孕前BMI、高血压家族史、SBP、DBP、UA、Cr、ALB、血清Perlecan及VEGF-165水平在不同妊娠结局的子痫前期患者中均显示出差异,但调整混杂因素后,Perlecan、VEGF-165仍与子痫前期患者不良妊娠结局独立相关。Perlecan、VEGF-165表达降低越明显意味着患者血管内皮细胞增殖减少,血管调节功能降低,患者更易出现血压升高、血液黏稠度增加等血液流变学问题,胎盘缺氧缺血性损伤越严重,胎盘功能状态变差,严重影响胎儿发育。但临床是否可通过药物干预增加乙酰肝素酶的消耗,降低Perlecan蛋白的降解,从而缓解子痫前期患者血管内皮损伤,改善患者妊娠结局,这将作为后期研究的方向之一,进一步为子痫前期的治疗提供新思路。

综上所述,Perlecan在子痫前期患者外周血中呈低表达,患者发生不良妊娠结局的机制可能与Perlecan靶向调控VEGF-165影响胎盘新生血管生成有关。