宫颈癌组织SGK3、SIK1表达及其对患者预后的预测价值分析

周立飞,高跃丽,耿欣,张静亚,耿飞龙,康非,王亚凡

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,致死率仅次于乳腺癌,近年来宫颈癌发病率呈上升趋势,严重威胁女性生命健康。2020年,全球新发宫颈癌有604 127例,死亡341 821例[1]。患者通过手术切除癌组织后,预后情况较好。有报道指出,宫颈癌的病变期长,对此时期进行干预治疗能够抑制癌症发展[2-3]。血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(serum and glucocorticoid-induced protein kinase,SGK)是AGC亚家族中的一员,研究证实,SGK在多种恶性肿瘤中表达水平升高[4],SGK3是哺乳类SGK亚家族三种亚型之一。Machado等[5]研究表明,SGK3能够使L-plastin Ser5磷酸化从而促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。Wang等[6]研究发现,宫颈癌患者子宫颈相较于正常子宫颈中PDK1和SGK3的表达量上升。盐诱导激酶1(salt inducible kinase 1,SIK1)属于AMP激活蛋白激酶家族中的一员,研究认为,SIK1在前列腺癌[7]、胃癌[8]等恶性肿瘤中起抑癌作用[9]。基于此,本研究旨在探讨宫颈癌患者SGK3、SIK1表达水平及其是否对患者预后具有较好评估价值,以期为临床改善宫颈癌患者预后提供更多参考依据。

1 资料与方法

1.1 样本量计算

参考文献[10]可知总体发生率π0为0.15,σ=0.10,α=0.05,β=0.10,行双侧检验,查表得Zα为1.960,Zβ为1.282,样本量计算公式为:n=[(Zα+Zβ)/δ]2×π0×(1-π0),计算可知样本量至少需119例,本研究纳入150例。

1.2 研究对象

选取2017年5月至2020年5月在石家庄市妇幼保健院手术治疗的150例宫颈癌患者为观察组,病理类型:腺癌26例,鳞癌88例,腺鳞癌36例。另选取同期体检健康者150例为对照组。纳入标准:① 经影像学检查,病理切片确诊为宫颈癌,符合相关诊断标准[11];② 无其他恶性肿瘤;③ 无免疫系统、精神系统疾病;④ 原发性宫颈癌;⑤ 自愿签署知情同意书。排除标准:① 合并其他恶性肿瘤;② 合并心、肝、肾等脏器功能障碍;③ 合并严重感染;④ 怀孕及哺乳期女性;⑤中途失联及资料缺失。本研究内容经本院伦理委员会审核通过后实行(伦理批号:2017-0053),并得到所有参与者的知情许可。

1.3 方法

1.3.1 宫颈癌临床分期评估 参照国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)标准[12]评估宫颈癌临床分期,根据手术病理结果,肿瘤部位在子宫颈为Ⅰ期;肿瘤超过子宫,未达到骨盆壁或阴道下1/3为Ⅱ期;肿瘤扩散至骨盆壁,与盆壁之间无间隙,肿瘤累及阴道下1/3为Ⅲ期;肿瘤超出骨盆范围,或侵犯膀胱和直肠黏膜为Ⅳ期。

1.3.2 宫颈癌组织SGK3、SIK1表达水平 将术中切除的宫颈癌组织和癌旁组织标本进行常规脱蜡水化,微波煮沸将抗原修复,自然冷却后用3% H2O2封闭15 min,PBS漂洗5 min后,甩去余液后加10%正常羊血清28 ℃放置20 min,分别加入SGK3、SIK1一抗,阴性对照使用PBS代替一抗。37℃孵育1 h,PBS冲洗4次,加入二抗,在37 ℃黑暗条件下孵育30 min,PBS冲洗、DAB染色10 min,显色后自来水充分冲洗终止显色反应,复染、脱水、透明、封片。在显微镜下选取5个高倍(400倍)视野观察SGK3、SIK1在组织中的染色情况。阳性对照选用阳性病理切片进行观察。

1.3.3 实时荧光定量聚合酶链式反应法检测血清SGK3、SIK1表达水平 抽取患者入院第2天清晨空腹8 h的肘部静脉血5 mL,抽取体检当天空腹8 h及以上肘部静脉血5 mL,2 500 r/min离心10 min后,吸取上清液置于-80℃冰箱待检测。提取总RNA逆转录,以GAPDH为内参,定量分析血清SGK3、SIK1表达水平,检测按照试剂盒说明书进行操作。引物序列见表1。

表1 引物序列表

1.4 随访

对宫颈癌患者进行门诊定期复查和电话回访结合的方式随访,自首次手术治疗开始随访,至2022年5月结束随访,若患者死亡则结束随访。随访结束统计宫颈癌患者死亡40例(26.67%)列入死亡组,生存110例(73.33%)列入生存组。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 两组一般资料比较

两组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性,详见表2。

表2 两组一般资料比较

2.2 宫颈癌组织与癌旁组织SGK3、SIK1表达阳性率比较

表3 宫颈癌组织与癌旁组织SGK3、SIK1表达阳性率比较[例(%)]

与癌旁组织相比,宫颈癌组织SGK3阳性表达率较高,SIK1阳性表达率较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表3和图1(彩插3)。

2.3 两组血清SGK3、SIK1表达水平比较

与对照组相比,观察组血清SGK3表达水平高于对照组,SIK1表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表4。

表4 血清SGK3和SIK1表达水平比较

2.4 宫颈癌患者血清SGK3和SIK1表达相关性

相关性分析结果显示,血清SGK3和SIK1表达之间呈现显著负相关(r=-0.347,P<0.001)。

2.5 死亡组与生存组临床资料比较

死亡组与生存组淋巴结转移、临床分期、分化程度比较,差异有统计学意义(P<0.05);死亡组血清SGK3水平高于生存组,SIK1水平低于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。见下页表5。

表5 死亡组与生存组临床资料比较例(%)]

2.6 COX回归分析宫颈癌患者预后的影响因素

以宫颈癌患者预后情况为因变量(赋值:死亡=0,生存=1),以淋巴结转移(赋值:无=0,有=1)、临床分期(赋值:Ⅰ+Ⅱ期=0,Ⅲ+Ⅳ期=1)、分化程度(赋值:高、中分化=0,低分化=1)、SGK3表达(赋值:阴性表达=0,阳性表达=1)、SIK1表达(赋值:阴性表达=0,阳性表达=1)为自变量,COX回归分析结果显示,淋巴结转移(HR=5.313,95%CI:2.032-13.889)、SGK3(HR=1.755,95%CI:1.002-3.074)是影响宫颈癌患者预后的危险因素,SIK1(HR=0.355,95%CI:0.137-0.921)是影响宫颈癌患者预后的保护因素。见下页表6。

表6 COX回归分析宫颈癌患者预后的影响因素

2.7 Kaplan-Meier法分析宫颈癌组织SGK3、SIK1表达与患者预后的关系

通过Kaplan-Meier法分析宫颈癌组织SGK3、SIK1表达与患者预后的关系,结果发现,SGK3阳性表达患者生存率(62/94,65.96%)低于SGK3阴性表达患者(48/56,85.71%)(χ2=5.678,P<0.05);SIK1阳性表达患者生存率(48/59,81.36%)高于SIK1阴性表达患者(58/91,63.74%)(χ2=5.361,P<0.05)。见图2、图3。

图2 宫颈癌组织中SGK3表达与患者生存率间的关系

2.8 ROC曲线评估血清SGK3、SIK1预测宫颈癌患者预后

ROC曲线分析结果显示,二者联合评估宫颈癌患者预后的AUC值高于SGK3和SIK1单独检测。见下页表7、图4。

图4 血清SGK3和SIK1预测宫颈癌患者预后的ROC曲线

表7 ROC曲线评估血清SGK3和SIK1预测宫颈癌患者预后

3 讨论

宫颈癌是威胁女性健康的第二大恶性肿瘤,其发病机制复杂,临床治疗主要以手术切除为主,宫颈癌患者确诊时往往癌症发展已进入晚期,肿瘤细胞浸润侵犯周围器官和组织,手术难度大,患者预后恢复较差,5年生存率仅60%[13]。因此探寻临床上能够评估宫颈癌预后的靶点,对于指导治疗宫颈癌,提高患者预后生活质量具有重要意义。

SGK3是一种能够迅速活化的基因,相关研究证实,SGK3与多种恶性肿瘤的发生发展有关,参与细胞增殖、迁移、分化[14-15]。Cao等[16]研究发现,SGK3在肝癌发生过程中能作为主要的PDPK1下游因子驱动肿瘤细胞生存。乳腺癌细胞中,SGK3过表达诱导糖原合酶激酶3磷酸化,增强凋亡和侵袭相关基因及蛋白,导致肿瘤的发生和侵袭[17]。Zhang等[18]研究显示,miR-377-3p下调可以预测宫颈癌患者预后不良,SGK3是miR-377-3p在宫颈癌细胞中的靶点,SGK3下调抑制宫颈癌细胞侵袭与迁移。宫颈癌中抑制因子通过抑制PI3K途径的下游分子AKT和SGK3的活化来控制癌细胞的增殖与扩散[19]。本研究显示,在宫颈癌组织中SGK3的阳性表达率相较于癌旁组织明显提升,与对照组相比,患者血清中SGK3的表达水平明显上调,提示在宫颈癌细胞中SGK3被活化,从而促进癌细胞增殖扩散。

SIK1属于AMP激活蛋白酶家族中的一员,研究认为SIK1在多种肿瘤中起抑癌作用[9]。有研究表明,卵巢癌中SIK1在组织和细胞中表达下调,而过表达的SIK1能够抑制癌细胞增殖、扩散并促进癌细胞凋亡。SIK1沉默能够打破抑癌因子对卵巢癌的抑制作用[20]。Peng等[21]研究发现,在宫颈鳞状细胞癌中NR2F1-AS1表达下调,进一步实验研究发现,NR2F1-AS1过表达导致miR-17靶向SIK1表达水平上调,NR2F1-AS1与SIK1高表达抑制宫颈鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移。本研究显示,宫颈癌细胞中SIK1表达阳性率明显降低,与对照组相比,宫颈癌患者血清SIK1表达水平明显下调,提示在宫颈癌发生发展过程中,SIK1被靶向调控,表达水平下调,对癌细胞侵袭和迁移的抑制作用降低。

本研究结果表明,宫颈癌组织SGK3表达上调,SIK1表达下调,相关性分析表明患者血清SGK3和SIK1之间表达呈显著负相关。患者有无淋巴结转移、临床分期、分化程度、SGK3和SIK1表达水平与患者预后有关,进一步通过COX回归分析结果发现,淋巴结转移、SGK3表达水平是影响患者预后的危险因素,SIK1表达水平是影响患者预后的保护因素。生存分析结果显示,宫颈癌组织SGK3阴性表达患者生存率高于阳性表达患者,SIK1阳性表达患者生存率高于阴性表达患者。ROC曲线分析结果显示,血清SGK3、SIK1评估宫颈癌患者预后的AUC为0.866,高于血清SGK3和SIK1单独检测,提示血清SGK3和SIK1与宫颈癌之间可能存有密切关系,二者联合评估宫颈癌患者预后具有一定临床潜力。

综上所述,宫颈癌组织SGK3表达上调,SIK1表达下调,且血清SGK3和SIK1联合评估患者预后具有较好的临床效能。但本研究仍存在样本量较少等局限性,有待进一步探究。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突。