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软糖中辅酶Q10 含量检测方法研究

2023-11-10张敬锴赵英妮

现代食品 2023年16期
关键词:软糖乙醚辅酶

◎ 张敬锴,张 琪,赵英妮,陈 烁

(广东亿超生物科技有限公司,广东 汕头 515000)

辅酶Q10是一种醌环类化合物,又称泛醌10,是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物[1],在人体呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用,可作为细胞代谢和细胞呼吸激活剂。同时,辅酶Q10是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂[2],具有抗心肌缺血、抗心衰、抗心律失常、提高人体免疫力、增强抗氧化、延缓衰老和增强人体活力等功能[3-7]。根据相关的研究,辅酶Q10在碱性和光照条件下容易被破坏[8]。

2003 年,美国食品药品监督管理局(FDA)正式批准辅酶Q10作为食品添加剂广泛使用[9]。2021 年3 月1 日,我国实行的《保健品食品原料目录 辅酶Q10》允许辅酶Q10添加到膳食补充剂中[10]。目前,添加辅酶Q10的剂型大部分是片剂或软胶囊,我国已批准171 个辅酶Q10类保健食品[11]。然而,对于辅酶Q10添加到软糖中作为膳食补充剂的研究很少。因此,为检测软糖中辅酶Q10含量,本研究采用HPLC 法测定软糖基质中辅酶Q10含量。

1 试验部分

1.1 仪器与试药

1260 高效液相色谱仪(安捷伦)配紫外检测器;多管式涡旋混合器;辅酶Q10对照品(中国食品药品检定研究院)。

1.2 色谱条件

色谱柱:C18 柱,流动相;甲醇∶无水乙醇(1 ∶1);柱温:35 ℃,进样体积:10 μL,检测波长:275 nm,进样量:10 μL。

1.3 前处理方法研究

1.3.1 选择不同的提取溶剂

辅酶Q10易溶于氯仿、苯、四氯化碳、石油醚、乙醚、丙酮、正己烷,微溶于乙醇,不溶于水、甲醇。但高比例的有机溶剂无法溶解软糖,软糖在检测时,需要先用水溶解,再选用合适的溶剂进行提取。对此,本研究分别选取石油醚、乙醚和正己烷3 种溶剂,以筛选适合的提取溶剂。

1.3.2 选择不同的用水量溶解软糖

分别加入5、10、15、20 mL 水,以筛选适合溶解软糖的用水量。

1.3.3 选择不同的溶剂提取次数

分别重复实验提取步骤1、2、3、4 次,以筛选适合的溶剂提取次数。

1.4 前处理方法研究结果分析

1.4.1 选择不同的提取溶剂

1.4.1.1 选择不同的提取溶剂结果(如表1)

表1 不同的提取溶剂结果表

1.4.1.2 检测结果分析

由表1 可见,①使用石油醚和乙醚提取检测结果,高于使用正己烷提取的结果。其原因在于正己烷和水层的提取效率没有石油醚、乙醚和水层的提取效率高。②石油醚和乙醚溶剂提取检测结果基本没有差别,但是考虑到乙醚是易制毒试剂,在日常的使用中受到严格的管控,而石油醚没有此限制,所以选用石油醚作为提取溶剂。

1.4.2 选择不同的用水量溶解软糖

1.4.2.1 选择不同的用水量结果(如表2)

表2 不同用水量结果表

1.4.2.2 检测结果分析

分别用5、10、15、20 mL 水溶解软糖后,按前处理方法处理,用10 mL 水溶解软糖检测结果最高。其原因在于用水量太少,导致软糖溶解后的水溶液太黏稠,影响提取效果;用水量太多,使用的多管式涡旋混合器无法使溶液充分涡旋混合。因此,选用10 mL水溶解软糖。

1.4.3 选择不同的溶剂提取次数

1.4.3.1 不同的溶剂提取次数结果(如表3)

表3 不同的溶剂提取次数结果表

1.4.3.2 检测结果分析

由表3 可见,重复提取步骤1、2、3 和4 次,随着提取次数增加,检测结果会相应提高,提取3 次后,检测结果基本没有变化,所以选取溶剂提取3 次。

1.5 方法学验证

根据前处理方法研究结果,确定前处理方法为取样品1 g 于离心管中,加入10 mL 水,在水浴中溶解样品,再加入石油醚15 mL,涡旋2 min,10 000 r/min 离心2 min,收集上层提取液于旋蒸瓶中,重复上述步骤共3 次,石油醚液减压旋蒸,蒸干后定量加入无水乙醇50 mL,溶解残渣,过滤后,即为供试品溶液。

1.5.1 检测限、定量限与线性范围的测定

配制辅酶Q10工作曲线,从检测结果获得回归方程:y=10.65x-8.461,R2=0.999 9, 在11.187~559.367 μg/mL 浓度范围内,有良好线性。在样品称样量为1 g、稀释倍数为50 mL 时,辅酶Q10检出限80 mg/kg,定量限267 mg/kg。

1.5.2 精密度与准确度的测定

取辅酶Q10阴性样品,分别加入一定量的辅酶Q10标准品溶液,使之成为理论浓度分别约为25、100、300 μg/mL 的样品,每个浓度平行操作6 份,照1.2的色谱条件上机测定,计算各组样品含量的RSD%,结果如表4。

表4 样品RSD 结果表

试验结果显示,辅酶Q10阴性样品3 个浓度水平加标精密度分别为1.7%、1.7%、2.5%,3 个浓度水平准确度在90.10%~104.5%之间,结果均在可接受标准范围内。

2 结论

本研究通过辅酶Q10含量测定的前处理方法进行研究,开展了针对检测限、定量限、线性、精密度和准确度的实验,检测结果均在可接受标准范围内。由此可见,本研究采用的方法可以用来测定软糖中辅酶Q10的含量。

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