FGF-2及miR-215对早期胃癌患者经内镜黏膜下剥离术后复发的预测价值分析

徐毅

(南阳市第一人民医院胃肠外科,河南 南阳 473010)

胃癌近年的发病率快要赶超肺癌,成为了当前发病率第二的恶性肿瘤,仅次于肺癌[1]。对于早期胃癌来说,根治性手术治疗能够及时将病灶切除,提升患者生存期,因此对胃癌的早期诊断早治疗具有重要价值[2]。内镜黏膜下剥离术作为早期胃癌的常用微创手术方式,能够将黏膜层病灶和基层分离,从而将肿瘤切除,但术后依然有部分患者出现复发情况,影响其生活质量。因此,探究胃癌的早期诊断指标及复发预测指标成为临床研究热点内容。成纤维细胞生长因子2(FGF-2)作为促细胞生长因子,能够诱导内皮细胞增殖,促进新生血管形成,在当前不同的肿瘤细胞增殖与侵袭过程中发挥了重要作用[3]。另外,大量研究发现[4],miRNA和肿瘤的转移、侵袭、增殖与分化具有密切关系,同样也在胃癌的发生与发展中具有重要作用。但FGF-2、miRNA对于胃癌的诊断效能和复发预测价值尚无确切定论。因此,本研究探讨了FGF-2及miR-215对早期胃癌患者经内镜黏膜下剥离术后复发的预测价值,具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2018年1月到2021年1月,选取我院收治的90例早期胃癌患者,将其分为观察组,另选取同期90例经病理活检确定为正常胃粘膜的志愿者,将其分为对照组。其中观察组患者中男性52例,女性38例,年龄为43～72岁,平均年龄(54.32±8.92)岁。对照组男性50例,女性40例;年龄为42～72岁,平均(54.28±7.38)岁。本研究经我院伦理委员会批准。两组受检者一般资料对比无明显差异(P>0.05),具有可比性。

1.2 纳排标准

纳入标准:病理诊断确诊为早期胃癌[5];肿瘤位于胃黏膜层;所有患者均选择应用经内镜黏膜下剥离术治疗;临床资料完整;年龄≥18岁;对本研究知情并签署同意书。

排除标准:诊断前未接受过胃癌相关治疗,其中包括手术、放化疗和靶向治疗等;合并其他恶性肿瘤;临床资料不全和不愿配合研究者;未完成2年随访者;远处转移或淋巴结转移者。

1.3 方法

FGF-2及miR-215检测方法:分别将对照组的正常黏膜组织和观察组的胃黏膜组织进行免疫组织化学法检测,检测浅表组织中FGF-2及miR-215表达情况,具体方法为:从-90℃的环境中将冷冻的组织标本取出,在10%福尔马林溶液中进行固定,随后进行石蜡包埋处理后,制作成为4 mm的切片,随后进行脱蜡处理。并应用3%的过氧化氢溶液进行孵育,孵育时间为10 min,随后应用PBS进行洗涤,每次洗涤时间为3 min,共洗涤3次,随后应用柠檬酸盐缓冲溶液进行高温抗原修复之后,在进行PBS洗涤,同样每次洗涤3 min,共洗涤3次,滴加1抗1滴,在4℃温度下孵育过夜,并滴加二抗1滴,在37℃下孵育60 min,随后滴加二氨基联苯胺进行染色处理,复燃采用苏木素进行,随后应用梯度酒精脱水处理,二甲苯透明处理,并应用中性树胶进行封片。在电子显微镜下观察染色庆康,随后选取5个有代表意义视野,每个视野技术为200个细胞进行评价,取5个视野平均值。并依照阳性细胞百分比进行评分,>75%为4分,50%～75%为3分,25%～50%为2分,<25%为1分,阴性为0分。依照染色强度进行频分,棕褐色3分,黄褐色或黄色2分,浅黄色1分,无染色0分。取两种评分方法的乘积作为最终评价结果,>1分为阳性,≤1分为阴性。并应用FGF-2及miR-215试剂盒提取早期胃癌组织与正常胃粘膜组织中的FGF-2和miR,并分别以FGF-2和miR作为模板反转录合成cDNA,配置cDNA作为模板荧光定量PCR反应体系,分别应用FGF-2及B-actin的引物,miR-215及U6引物,在荧光定量PCR仪上完成PCR反应之后,得到FGF-2及B-actin,miR-215及U6循环曲线与循环瘀滞,以B-actin、U6为内参计算FGF-2及miR-215表达量。

随访方法:治疗后对所有患者进行历时2年随访,对于胃镜复查疑似病变的患者进行病理活检,将出现癌细胞的患者判定为复发,并依照患者是否复发情况分为复发组和非复发组。

一般资料收集:收集所有患者的一般临床资料,其中包括:性别、年龄、肿瘤位置、浸润深度、肿瘤直径、组织分化程度、FGF-2及miR-215表达水平。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 FGF-2及miR-215水平对比

观察组患者胃黏膜组织FGF-2阳性率、表达水平,miR-215阳性率、表达水平明显高于对照组(P<0.05),如表1所示。

表1 FGF-2及miR-215水平对比(n,%)

2.2 FGF-2及miR-215对早期胃癌的诊断效能分析

FGF-2对早期胃癌的诊断效能明显高于miR-215(P<0.05),其中FGF-2诊断早期胃癌的曲线下面积为0.852,最佳诊断界限值为1.11,miR-215曲线下面积为0.735,最佳诊断界限值为0.86,如图1、表2所示。

图1 FGF-2及miR-215对早期胃癌的诊断ROC曲线

表2 FGF-2及miR-215对早期胃癌的诊断效能分析

2.3 复发组与非复发组一般临床情况对比

复发组与非复发组患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤直径对比无明显差异(P>0.05),复发组与非复发组患者浸润深度、组织分化程度、FGF-2及miR-215水平对比差异显著(P<0.05),如表3所示。

2.4 FGF-2及miR-215对早期胃癌患者经内镜黏膜下剥离术后复发的预测价值

对上述单因素分析具有统计学差异的指标进行赋值,logistic回归分析结果表明:FGF-2及miR-215为胃癌患者预后的独立影响因素(P<0.05),如表4所示。

表4 血清MMP-9和MMP-2对胃癌患者的预后预测价值

3 讨论

本研究结果表明,观察组患者胃黏膜组织FGF-2阳性率、表达水平,miR-215阳性率、表达水平明显高于对照组(P<0.05)。研究发现[6],miR-215在胃癌组织或血清中呈现高表达情况,并且通过靶基因表达水平影响胃癌细胞增殖与迁徙能力,与本研究结果相符。这是因为,miRNA作为人类净化中高度保守内源性非编码小分子RNA的一种,他能够与靶基因mRNA中3-UTR区域相结合,从而对靶基因翻译产生阻遏,调控靶基因表达的同时,也参与了多种疾病病理生理发展过程。MiRNA编码基因属于当前最大一类调节基因,在细胞的生长、发育和凋亡过程中发挥着重要作用。已有研究表明[7],miR-21、miR-233、miR-199等与胃癌的发生与发展具有重要关系。FGF-2属于一类强有力细胞分裂促因子的一种,对于成纤维细胞在内的多种细胞产生促进分化和增殖功能,因此与肿瘤的生长具有密切关系。研究发现[8],FGF-2在胰腺癌、乳腺癌以及胃癌等多种恶性肿瘤中均存在过度表达情况,与本研究结果相符。

本研究结果表明,FGF-2对早期胃癌的诊断效能明显高于miR-215(P<0.05),其中FGF-2诊断早期胃癌的曲线下面积为0.852,最佳诊断界限值为1.11,miR-215曲线下面积为0.735,最佳诊断界限值为0.86。提示FGF-2及miR-215对早期胃癌均具有重要诊断价值。以往研究中对于FGF-2及miR-215与早期胃癌诊断的相关研究较少,多研究发现[9],两者与胃癌的发生与发展具有一定相关性。但本研究发现,FGF-2对于早期胃癌的诊断效能优于miR-215,其具体机制还需日后增加样本量进行持续深入分析。

复发组与非复发组患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤直径对比无明显差异(P>0.05),复发组与非复发组患者浸润深度、组织分化程度、FGF-2及miR-215水平对比差异显著(P<0.05)。研究发现[10],许多早期胃癌患者通过内镜黏膜下剥离术后能够达到完全治愈效果,但依然有一部分患者术后会出现胃癌复发或淋巴结转移情况。因此,对胃癌术后复发情况进行早期预测具有重要价值。而本研究发现,浸润深度、组织分化程度与胃癌复发情况具有一定关系,这主要是因为恶性肿瘤转移和浸润过程中,最先浸润的就是胃黏膜组织,组织分化程度增加,浸润程度越深,虽然通过手术治疗可将病灶组织剥离,但残留病灶情况发生率较高,因此也增加了患者术后复发情况。而对于FGF-2及miR-215水平与黏膜下剥离术后复发的关系来说,主要是因为,miR-215能够通过抑制神经营养因子受体纪元蛋白相关激酶C截短形式来发挥辅助作用,这种截短形势下对于胃癌细胞的生长调节具有重要作用。有研究发现[11],胃癌细胞的发生发展与miR-215表达具有显著关系,与本研究结果相符。另外,对于FGF-2来说,它能够直接作用在肿瘤细胞分泌的各种蛋白分解酶与胶原酶,促进肿瘤浸润与转移,若患者通过内镜黏膜下剥离术后依然有残余病灶,FGF-2作为血管生长因子对于活动生长的肿瘤具有明显促进作用,能够促进肿瘤毛细血管内皮增殖,增加对于肿瘤血液供应,从而促进肿瘤细胞分裂的同时,也增加了早期胃癌患者的术后复发情况。

logistic回归分析结果表明:FGF-2及miR-215为胃癌患者预后的独立影响因素(P<0.05)。提示临床上对于FGF-2及miR-215表达增加的经内镜下黏膜剥离术治疗的早期胃癌患者要及时采取相关措施来预防术后复发情况的发生。

综上所述,FGF-2及miR-215对于早期胃癌的诊断价值较高,且FGF-2、miR-215水平升高为早期胃癌经内镜黏膜下剥离术后复发的独立预测因素。