老年类风湿关节炎患者免疫球蛋白、类风湿因子、MBL、LncRNA MEG3水平及意义

张婷婷 王静 张茂全 王雅楠

(青岛大学附属青岛市海慈医院(青岛市中医医院) 1风湿免疫科,山东 青岛 266034;2骨关节与创伤外科中心;3药剂科)

类风湿关节炎多发于小关节,以对称性分布为主,能够引发关节畸形、肿胀、脱位,并累及其他组织脏器,促进心血管疾病、恶性肿瘤等疾病的发生与发展〔1〕。类风湿关节炎以关节软组织及骨组织破坏为主要病理改变,免疫功能异常和炎症因子大量释放破坏骨关节是主要发病机制〔2〕。由于年龄对免疫系统和性激素分泌的影响,老年类风湿关节炎患者发病急,活动性较高,症状多样、不典型,大关节受累比例较高〔3〕。临床研究发现,老年类风湿关节炎患者关节外表现较多,患病2年内骨侵蚀的发生率较高〔4〕;因此探索评估该类患者治疗预后的血清学指标对治疗方案的选择和疗效监测具有重要意义。本研究探讨老年类风湿关节炎患者免疫球蛋白(Ig)G、IgM、IgA、类风湿因子、甘露糖凝集素(MBL)、长链非编码RNA(LncRNA)MEG3水平变化及意义。

1 对象与方法

1.1研究对象 选取2020年3月至2022年2月间青岛大学附属青岛市海慈医院收治的老年类风湿关节炎患者54例为类风湿关节炎组。纳入标准：①符合2018年中华内科杂志发表的中国类风湿关节炎诊治指南中的诊断标准;②年龄≥60岁,近3个月无激素、免疫调节药治疗史;③理解、沟通能力正常,自愿配合本研究。排除标准：①合并严重感染性疾病,内分泌系统疾病的患者;②有关节严重外伤史的患者。其中男21例,女33例;年龄61～76岁,平均(66.47±4.25)岁。病程0.6～4.2年,平均(2.63±0.81)年;首发症状：小关节肿痛28例,负重关节肿痛26例。收集同期志愿者36例为健康对照组,均无重要系统、脏器慢性病,男14例,女22例,年龄60～70例,平均(65.60±4.18)岁。两组性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经医院伦理委员会审核批准,受试者均签署知情同意书。

1.2主要试剂 IgG、IgM、IgA免疫比浊检测试剂盒购于上海科华生物工程有限公司;类风湿因子乳胶凝集检测试剂盒购于康知(杭州)生物科技有限公司;酶联免疫检测试剂盒购于深圳生科源生物有限公司;Trizol提取试剂盒、逆转录cDNA合成试剂盒购于研卉(上海)生物科技有限公司;聚合酶链反应(PCR)扩增试剂盒购于上海海方生物有限公司。

1.3血清IgG、IgM、IgA、类风湿因子、MBL水平检测 采集老年类风湿关节炎患者和健康志愿者空腹外周静脉血5 ml,4 ℃恒温离心10 min,收集血清,-20 ℃保存待测。免疫比浊法检测血清IgG、IgM、IgA水平。乳胶凝集法检测血清类风湿因子表达水平,根据试剂盒说明书将类风湿因子浓度>20 IU/ml判断为阳性。酶联免疫吸附试验检测血清MBL水平。

1.4实时荧光(RT)-PCR检测血清LncRNA MEG3表达水平 采集老年类风湿关节炎患者和健康志愿者空腹外周静脉血3 ml,4 ℃恒温离心10 min,收集血清,Trizol法从血清中提取总RNA,逆转录得到cDNA,按照PCR扩增试剂盒说明书进行扩增。LncRNA MEG3上游引物5′-GTCATCGTACGAGTAAAGGGTCTTCGCT-3′,下游5′-CTACCGGGATGCACCCCGTTTCCTGCACG-3′,扩增产物片段131 bp。内参GAPDH上游引物5′-TGGCGGCTTAGCCTTGGCGACTCAC-3′,下游5′-CACAATCCTTTCGGACTCCGTCGG-3′,扩增产物片段176 bp;引物设计由上海捷瑞生物工程有限公司完成。PCR条件：95 ℃变性30 s,62 ℃ 变性40 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,循环40次。以GAPDH为内参计算LncRNA MEG3相对表达量。

1.5标准化治疗后疗效判定 老年类风湿关节炎患者均给予标准化治疗,包括：非甾体抗炎药、免疫抑制剂等个体化药物治疗方案,功能锻炼,患者教育等。治疗后使用28个关节疾病活动度评分(DAS28)判定老年类风湿关节炎患者的疗效,关节包括双侧手腕、肩部、肘、膝关节,双手指近端骨关节,手掌指关节。参照PREVOO的计算方法计算28个关节的压痛数、肿胀数,根据治疗预后分为：活动期组(DAS28>2.6分),缓解期组(DAS28≤2.6分)。

1.6统计学分析 采用SPSS25.0软件进行t检验、χ2检验、Logistic回归分析,免疫球蛋白、类风湿因子、MBL、LncRNA MEG3对老年类风湿关节炎患者预后的评估价值进行受试者工作特征(ROC)曲线分析。

2 结 果

2.1两组IgG、IgM、IgA水平比较 类风湿关节炎组血清IgG、IgM、IgA水平明显高于健康对照组(P<0.01)。见表1。

表1 两组IgG、IgM、IgA水平、类风湿因子阳性率及MBL、LncRNA MEG3表达水平比较

2.2两组类风湿因子阳性率及MBL、LncRNA MEG3表达水平比较 类风湿关节炎组类风湿因子阳性率明显高于健康对照组,血清MBL、LncRNA MEG3水平明显低于健康对照组(P<0.01)。见表1。

2.3治疗后不同疗效的老年类风湿关节炎患者IgG、IgM、IgA水平比较 老年类风湿关节炎患者治疗后活动期组血清IgG、IgM、IgA水平明显高于缓解期组(P<0.01)。见表2。

表2 治疗后不同疗效的老年类风湿关节炎患者IgG、IgM、IgA、类风湿因子、MBL、LncRNA MEG3水平比较

2.4治疗后不同疗效的老年类风湿关节炎患者类风湿因子、MBL、LncRNA MEG3水平比较 老年类风湿关节炎患者治疗后活动期组类风湿因子阳性率明显高于缓解期组,血清MBL、LncRNA MEG3水平明显低于缓解期组(P<0.01)。见表2。

2.5老年类风湿关节炎患者预后影响因素的多因素Logistic回归分析 将老年类风湿关节炎患者治疗预后情况作为因变量(0=缓解期,1=活动期),将IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3表达水平作为自变量,具体赋值情况为：类风湿因子表达为分类变量(1=阳性,0=阴性),其余各自变量为连续变量。经多因素Logistic回归性分析显示,IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3表达水平是老年类风湿关节炎患者预后的独立影响因素。见表3。

表3 老年类风湿关节炎患者预后影响因素的多因素Logistic回归分析

2.6IgG、IgM、IgA、类风湿因子、MBL、LncRNA MEG3对老年类风湿关节炎患者预后的评估价值 ROC曲线结果显示,IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3表达水平对老年类风湿关节炎患者预后均具有较高的评估价值(P<0.01)。将IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3纳入Logistic回归模型,得出各指标联合的数值计算公式,结果显示各指标联合检测的评估价值最高〔曲线下面积(AUC)=0.940〕,敏感度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测。见表4、图1。

图1 IgG、IgM、IgA、类风湿因子、MBL、LncRNA MEG3对老年类风湿关节炎患者预后评估价值的ROC曲线

3 讨 论

类风湿关节炎发病率存在地理区域上有较大差异,全球发病率为0.50%～1.00%,中国发病率为0.46%〔5〕。目前我国关于老年类风湿关节炎患者发病率的相关数据较少;国外研究显示,过去10年期间,日本在快速老龄化趋势下类风湿关节炎的发病年龄明显增加〔6〕;美国近15年期间类风湿关节炎发病率在65～75岁人群中最高,类风湿关节炎累积风险在60岁左右快速上升〔7〕。受年龄、合并基础病较多、免疫功能下降等因素影响,老年类风湿关节炎患者起病急,症状多样且偏重,预后不良发生率高〔8〕;因此探寻能够准确评估患者治疗预后的血清学指标,对治疗方案的合理选择和疗效监测具有重要意义。IgG是人体血清Ig的主要成分,占70%～75%,以单体形式存在,是初级免疫应答最持久的抗体〔9〕。抗原刺激诱导体液免疫过程中IgM是最先生成的Ig,参与人体的早期防御〔10〕。IgA分为血清型、分泌型,其中血清型IgA能够介导细胞毒性作用,分泌型IgA参与构成人体黏膜防御系统〔11〕。本研究结果提示,老年类风湿关节炎患者IgG、IgM、IgA高表达,且经有效治疗后其表达水平明显下降。

类风湿因子是一种抗人、抗动物IgG分子片段抗原决定簇抗体,在类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病中高表达,可作为诊断指标之一〔12〕;但类风湿因子在部分慢性感染性疾病、恶性肿瘤患者中表达水平也升高,因此单独检测的诊断特异性不理想,应联合其他指标〔13〕。MBL是肝脏合成并分泌的急性时相期蛋白,可通过与病原微生物表面糖基配体结合,调节吞噬作用〔14〕;还可经凝集素途径激活补体系统,参与天然免疫防御〔15〕。LncRNA MEG3在多种人体肿瘤组织中通过调控基因缺失、启动子超甲基化等发挥抑癌作用〔16〕。研究发现,类风湿关节炎中LncRNA MEG3低表达,通过白细胞介素-1β上调LncRNA MEG3表达后能够促进软骨细胞增殖,抑制软骨细胞凋亡和胞外基质降解〔17〕。本研究结果提示,老年类风湿关节炎患者类风湿因子高表达,血清MBL、LncRNA MEG3低表达,经有效治疗后能降低类风湿因子表达,升高血清MBL、LncRNA MEG3表达。

综上,IgG、IgM、IgA及类风湿因子阳性率、MBL、LncRNA MEG3表达水平是老年类风湿关节炎患者预后的独立影响因素,且上述指标对老年类风湿关节炎患者预后均具有较高的评估价值,各指标联合检测的评估价值最高,可用于老年类风湿关节炎的临床诊治。