强精汤对肾虚血瘀型男性不育患者精液质量及精子DNA损伤的影响

王爱华,左晓琦,张欣欣,郑彦强,薛卫艳

(1. 邯郸市妇幼保健院,河北 邯郸 056001;2. 河北医科大学第二医院,河北 石家庄 050000)

近年来随着国家生育政策的放开,邯郸市妇幼保健院生殖医学科门诊就诊的患者夫妇中男性不育比例有增多的趋势。男性不育症的原因复杂多样,国内外大量报道显示精子DNA完整性与男性不育关系较密切[1],而精子DNA碎片指数(DFI)是评价精子DNA完整性的有效指标[2]。传统中医在改善精子功能方面有明显优势,但对DFI是否有影响还不明确。本研究观察了强精汤对肾虚血瘀型且伴有精子DNA损伤的男性不育患者精液质量参数及精子DNA完整性的影响,现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1诊断标准

1.1.1西医诊断标准 按照《人类精液检查与处理实验室手册》(WHO第五版)[3]标准,精子DNA完整性异常:精子DFI≥15%,或精子DNA完整性<85%。

1.1.2中医诊断标准 参照《中药新药临床研究指导原则》[4]、《中医男科学》[5]男性不育症所述肾虚血瘀证相关内容,主症:婚久精冷不育,性欲减退,房事不举或早泄,腰膝酸软,畏寒肢冷;次症:头晕耳鸣,失眠健忘,潮热盗汗,遗精滑精,神疲乏力,肌肤甲错,小便拘急疼痛,舌暗红或有瘀斑瘀点,苔白或少苔,脉沉细或沉涩。凡符合主症,同时兼有次症2项或2项以上者可辨证为肾虚血瘀证。

1.2纳入标准 无生殖道感染;无外伤及遗传性疾病家族史;无睾丸、附睾、输精管及精索静脉异常;精子浓度>5×106/mL;夫妇双方签署自愿接受该治疗方案的知情同意书;女方无不孕因素。

1.3一般资料 选择2019年9月—2020年8月在邯郸市妇幼保健院生殖医学科就诊的伴有精子DNA损伤的肾虚血瘀型男性不育患者98例,随机分为治疗组49例和对照组49例,治疗组46例和对照组47例完成研究,2组患者年龄、女方年龄、结婚年限、不育时间、既往病史等一般情况比较差异均无统计学意义(P均>0.05),见表1。

1.4干预方法 对照组口服维生素E胶丸(山东威高药业股份有限公司,国药准字H20103380),每次0.1g,每日3次,3个月为1个疗程,治疗1个疗程。治疗组采用强精汤(方剂组成:柴胡10 g、枳实10 g、丹参15 g、菟丝子15 g、枸杞子15 g、沙苑子15 g、熟地黄15 g、荔枝核15 g、怀牛膝15 g、五味子6 g、车前子15 g、生白术15 g)治疗,水煎温服,每次200 mL,早晚各1次,3个月为1个疗程,治疗1个疗程。2组均同时调整生活方式,包括多摄入高蛋白和富有营养的食物;戒烟戒酒,作息规律;避免久坐,每天坚持锻炼1 h。

1.5观察指标

1.5.1精液质量 治疗前及停药后5 d,采用清华同方精子、微生物动(静)态图像分析系统,由专人负责进行精液质量分析检测:受试者禁欲2～7 d,手淫法采集精液到采样杯中,置于37 ℃恒温箱,标本完全液化后检测,每次禁欲时间尽量一致,分别记录精液体积、精子浓度、精子总数、PR、精子正常形态百分率、精子DFI。采用Diff-Quik染色法进行精子形态染色,试剂盒购于深圳华康生物医学工程有限公司,精子正常形态百分率参考值范围及精子正常形态的判读参考《人类精液检查与处理实验室手册》(WHO第5版)[3]标准。精子DFI检测采用精子染色质扩散法(SCD),试剂盒购于安徽安科生物工程(集团)股份有限公司。正常精子的染色质结构松散,染色后形成大晕环和中晕环,精子DNA损伤后只产生小晕环或者不产生晕环,根据晕环宽度与精子头部直径的比例评判精子DNA的完整性。晕环宽度/精子头直径≤1/4判读为小晕环,无晕环指观察不到晕环。精子DFI为小晕环和无晕环精子占计数精子总数的百分率。

1.5.2临床疗效 参照以下标准评估2组临床疗效。治愈:女方受孕;显效:女方未受孕,但精液参数(包括精子浓度、精子总数、PR)、精子正常形态百分率、精子DFI均已正常;有效:精子浓度、精子总数、PR、精子DFI和精子正常形态百分率尚未全部正常,但精子浓度、精子总数、PR和精子正常形态百分率最少有一项提高>30%或精子DFI降低>30%;无效:精液各项指标无明显变化或精液参数、精子正常形态百分率降低,精子DFI升高。

1.5.3不良反应 记录2组在治疗过程中是否有不良反应发生及其发生情况。

2 结 果

2.12组患者治疗前后精液质量相关参数比较 2组患者治疗前精液体积、精子浓度、精子总数、PR、精子正常形态百分率、精子DFI比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗组治疗后精液体积、精子浓度、精子总数、PR、精子正常形态百分率均显著高于治疗前(P均<0.05),精子DFI显著低于治疗前(P<0.05);对照组治疗后精液体积、精子浓度、精子总数无明显变化(P均>0.05),PR、精子正常形态百分率均显著高于治疗前(P均<0.05),精子DFI显著低于治疗前(P<0.05)。治疗后,治疗组的精子浓度、精子总数、精子正常形态百分率均显著高于对照组(P均<0.05),精子DFI显著低于对照组(P<0.05);2组精液体积和前向运动精子百分率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2 2组伴精子DNA损伤的肾虚血瘀型男性不育患者治疗前后精液质量相关参数、精子DFI比较

2.22组患者临床疗效比较 治疗组治疗后总有效率为86.96%,对照组治疗后总有效率为53.19%,治疗组显著高于对照组(P<0.05)。见表3。

2.32组不良反应发生情况 2组患者在治疗过程中均未发生不良反应。

3 讨 论

人类精子分为头和尾两部分,精子DNA主要位于精子头部,是父源遗传信息的携带者。精子DNA完整性受到损伤后直接影响精子顶体酶的活性,进而影响到精子的功能[6],从而降低精子受精能力。精子DNA损伤程度与IVF及ICSI治疗结局密切相关,梁泳娜等[7]研究显示精子DNA碎片化程度与体外受精-胚胎移植及卵泡质内单精子显微注射(IVF-ET /ICSI)的受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎着床率及临床妊娠率等有关,高水平的精子DFI是降低IVF-ET/ICSI临床妊娠率的主要因素之一。

造成精子DNA损伤的原因较多,包括年龄较大、自身患有疾病、环境污染、接触重金属或致癌物等[8]。引起精子DNA损伤的机制主要有:①精子形成过程中,异常的程序性细胞死亡过程的启动激活了半胱天冬酶(easpase 3、8和9),引起精子DNA双链断裂[9];②精原细胞和精母细胞的核蛋白主要是组蛋白,精子的核蛋白以鱼精蛋白为主,在精子形成过程中核蛋白经历了鱼精蛋白取代组蛋白的过程,该过程异常可导致精子DNA完整性受损[10];③机体在遭受体内外各种有害刺激时,产生大量氧自由基,超过了机体抗氧化体系的还原能力,过多的氧自由基可将精子DNA碱基氧化或通过脂质过氧化产生脂质醛类代谢产物丙二醛(MDA)与精子DNA结合,造成精子DNA链损伤或断裂[11]。其中氧自由基产生过多或机体抗氧化体系的还原能力下降产生的氧化应激反应对精子DNA完整性造成的损伤受到男科及生殖医学界的普遍关注。临床主要采取抗氧化治疗来降低精子DFI,代表药物有左旋肉碱、维生素E[12]。因此,本研究对照组用药为维生素E胶丸。目前精子DFI的检测方法主要有精子染色质结构分析试验、末端转移酶介导的dUTP末端标记法、彗星试验、染色质扩散试验等几种方法[13],精子染色质扩散法检测DFI的准确性和可靠性较高,操作简单,不需要昂贵的设备,该法较适于基层临床应用。

传统的中医学在治疗男性不育优势明显,中医将男性不育归为“无子”“无嗣”范畴。中医认为肾藏精,主生殖,肾的精气盛衰直接关系到人的生长发育和生殖功能,肾精受损是男性不育的主要病机之一;另外气血相依,精血同源,气血充盛则精得化生,而肾阳亏虚,无力推动血液运行则致血瘀,故肾虚血瘀型男性不育症的治疗重点在于补肾、填精、活血、化瘀。《素问·上古天真论》中的天癸学说认为肾是五脏之根基,是精盛衰变之根本,男性不育症病位在肾,治疗男性不育的重要途径是补肾填精固精[14]。强精汤方中熟地黄、枸杞子、五味子滋阴填精;菟丝子益肾气以生精;沙苑子性甘温,温补肝肾,固精;柴胡、枳实、荔枝核疏肝理气,气通血行;丹参、怀牛膝活血、祛瘀;车前子、生白术能利尿通淋固精。现代药理研究表明菟丝子、枸杞子均可以通过调节下丘脑-垂体-性腺轴来维持生殖激素的释放,提高血清睾酮含量,从而改善性功能,促进精子生成[15-16],适量的菟丝子水提物通过提高精子混悬液中超氧化物歧化物酶的活力,降低MDA含量和干预精子膜脂质过氧化反应来保护精子膜结构和功能的稳定性[17];从车前子中提取到提取物不仅能清除堆积在体内过量的氧自由基,还可以增强SOD活性,从而发挥其抗氧化作用[18]。强精汤重用多种对精子膜结构和功能氧化损伤具有保护作用的药物,这可能是增加精子浓度和精子总数的同时还能降低精子DFI的原因之一。

本研究结果显示,强精汤能显著提高患者的精液量、精子浓度、精子总数、正常形态精子百分率和前向运动精子百分率,降低精子DFI,从而提高男性患者的生育能力,这与组方中多味中药具有抗氧化作用及提高雄激素水平关系密切。与西药维生素E比较,强精汤在提高精子浓度、增加精子总数和正常形态精子百分率、降低精子DFI方面有明显优势,取得较好治疗效果,但强精汤的具体作用机制仍需进一步研究和探讨。

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。