提取方法对库拉索芦荟多糖的抗氧化活性影响研究
2023-11-02曾小彤陶洪坤石丽平林劲松
曾小彤，陶洪坤，2，石丽平，3，王 怡，林劲松，魏 伟
1.四川文理学院，四川 达州 635000；2.成都大学，四川 成都 610106；3.西南医科大学，四川 泸州 646099
芦荟为百合科多年生肉质草本植物。库拉索芦荟是保健常用芦荟，也是世界上销量最高的芦荟[1]。芦荟多糖作为药用的有效成分之一，有关其功效的研究非常广泛，众多学者对其抗氧化、抗溃疡、抗肿瘤、护肤美容等多种功效进行了研究[2]。蒋文明等[3]采用水提法提取芦荟多糖并制备其衍生物，证实了芦荟多糖具有较高的抗氧化活性。为比较不同的提取方法，本研究将采用两种不同方法提取库拉索芦荟多糖，并对其进行抗氧化活性评价，以期为库拉索芦荟多糖作为药用植物资源的进一步开发与研究提供一定的理论参考。
1 材料与方法
1.1 实验材料
新鲜库拉索芦荟购自壹朵舒园艺；2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、纤维素酶、果胶酶购自合肥博美生物科技有限公司；1，1-二苯基-2-苦味基肼（DPPH）、D-葡萄糖等购自成都科隆化学品有限公司；所使用的水为蒸馏水。
PS-60A 超声清洗机，深圳市洁康洗净电器有限公司；Varioskan LUX 多功能酶标仪，赛默飞世尔科技（中国）。
1.2 实验方法
1.2.1 提取实验
水提法：参考吴广枫等[4]的研究方法，得到芦荟多糖提取物ABP-W。
超声波辅助复合酶法：参考马丽媛等[5]的研究方法，得到提取芦荟多糖提取物ABP-U。
1.2.2 多糖提取率及含量测定
1.2.2.1 多糖提取率测定
式中：m1为多糖提取物粉末的质量，mg；m0为芦荟凝胶的质量，mg。
1.2.2.2 多糖含量测定
参考韩秋菊等[6]的标准曲线制定方法，绘制标准曲线。以葡萄糖质量浓度（μg/mL）C 为横坐标，以吸光度A 为纵坐标，得到回归方程，即得线性方程Y=0.010 76X-0.074 9，相关系数R2=0.99 364，可知在此浓度范围内线性关系良好。
1.2.3 芦荟多糖抗氧化能力评价
1.2.3.1 评价羟基自由基清除率
参考蒋文明等[3]的方法评价羟基自由基清除率。以VC 作为阳性标准，根据式（2）计算芦荟多糖的羟基自由基清除率。
式中：A0为等体积蒸馏水代替样品溶液的吸光度；A1为样品溶液的吸光度；A2为等体积蒸馏水代替H2O2溶液的吸光度。
1.2.3.2 评价DPPH 自由基清除率
参考Tan 等[7]方法评价DPPH 自由基清除率。以VC 作为阳性标准，根据式（3）计算芦荟多糖DPPH自由基清除率。
式中：A0为1.0 mL DPPH 溶液和1.0 mL 蒸馏水混合后的吸光度；A1为1.0 mL DPPH 溶液加入1.0 mL样品溶液中混合后的吸光度；A2为1.0 mL 无水乙醇和1.0 mL 样品溶液混合后的吸光度。
1.2.3.3 评价ABTS 自由基清除率
参考Teng 等[8]方法评价ABTS 自由基清除率。以VC 作为阳性标准，根据式（4）计算芦荟多糖ABTS 自由基清除率。
式中：A0为等体积蒸馏水代替样品溶液的吸光度；A1为1.0 mL 样品溶液与5.0 mL ABTS 工作液混合后的吸光度；A2为等体积蒸馏水代替ABTS 工作液和1.0 mL 样品溶液混合液的吸光度。
2 结果与分析
2.1 不同提取方法对多糖提取率和含量的影响
水提法与超声波辅助复合酶法的多糖提取率和含量如表1 所示。评价结果表明，提取方法的不同会对多糖提取率和含量产生影响，就本研究的两种提取方法而言，超声波辅助复合酶法要优于水提法。
表1 不同提取方法的提取率和多糖含量
2.2 抗氧化活性评价
2.2.1 羟基自由基清除能力
不同样品对羟基自由基的清除效果如图1A 所示。VC、ABP-U 和ABP-W 的EC50 分别为0.54 mg/mL、0.58 mg/mL、0.79 mg/mL。ABP-U 和ABP-W 的清除DPPH 自由基活性均略低于VC，但ABP-U 的清除率均高于ABP-W 的清除率，意味着超声波辅助复合酶法更适合用于芦荟多糖提取。
图1 不同样品的抗氧化活性
2.2.2 DPPH 自由基清除能力
图1B 呈现了不同样品对DPPH 自由基的清除能力。VC、ABP-U 和ABP-W 的EC50 分别为0.78 mg/mL、0.86 mg/mL、0.99 mg/mL。ABP-U 和ABP-W的清除DPPH 自由基活性均略低于VC，但ABP-U的清除率均高于ABP-W 的清除率，说明超声波辅助复合酶法提取的芦荟多糖DPPH 自由基清除能力比水提法强。
2.2.3 ABTS 自由基清除能力
如图1C 所示，不同样品的ABTS 自由基清除能力与浓度呈正相关。VC、ABP-U 和ABP-W 的EC50分别为0.65 mg/mL、0.74 mg/mL、0.76 mg/mL。两种提取方法得到的产物清除ABTS 自由基的能力均弱于VC，但差别不明显，总体上都表现出较强的清除能力。
3 结语
本文对库拉索芦荟的抗氧化活性进行了研究，采用两种不同的提取方法提取芦荟多糖，通过抗氧化活性评价发现，ABP-U 的羟基自由基、DPPH 自由基清除率要优于ABP-W。不同的提取方法会对芦荟多糖的抗氧化活性产生不同程度的影响。本文对芦荟多糖的提取方法和抗氧化活性进行了初步研究，为库拉索芦荟资源的深入研究提供了实验基础。
