2021年四川省兽医系统实验室检测能力比对结果分析

邓 飞,陈 斌,邵 靓,邱明双,裴超信,陈弟诗,李 丽,周莉媛

(四川省动物疫病预防控制中心,成都 武侯 610041)

兽医系统实验室的有效建设,能为我国动物疫情防控工作提供重要的技术支持[1]。为保证实验室检测结果准确、可靠,需对实验室检测能力进行评估,即能力验证。开展实验室间检测能力比对试验是当前兽医实验室常用的能力验证方法之一[2],通过实验室间比对,可以发现检测过程中存在的隐患,促进检测能力提升。按照农业农村部畜牧兽医局和四川省农业农村厅对该项工作的要求[3,4],四川省动物疫病预防控制中心于2020年9月组织开展了全省市、县两级兽医系统实验室检测能力比对工作。通过比对,对我省市、县两级兽医系统实验室的检测能力进行了评估,比对结果真实客观地反映出部分实验室存在的问题,对存在问题的实验室,四川省动物疫病预防控制中心指导其及时进行整改,保证了兽医系统实验室检测质量的提高,达到了预期的比对效果和目的。

1 材料与方法

1.1 比对项目设计 市级兽医系统实验室共设置3个检测比对项目,包括非洲猪瘟病毒核酸检测、口蹄疫病毒O型抗体检测、禽流感病毒H5亚型抗体检测。县级兽医系统实验室比对项目包括非洲猪瘟病毒核酸检测、口蹄疫病毒O型抗体检测、禽流感病毒H5亚型抗体检测、禽流感病毒H7亚型核酸检测、猪瘟抗体检测、布鲁氏菌病抗体检测、包虫病抗原检测,由各市动物疫病预防控制机构自行确定不少于3个检测项目,对辖区内县级兽医系统实验室开展比对。

1.2 比对盲样和试剂 市级兽医系统实验室比对项目中非洲猪瘟病毒核酸检测盲样和试剂由青岛立见生物科技有限公司提供;口蹄疫病毒O型抗体检测盲样和试剂由兰州兽研生物科技有限公司提供;禽流感病毒 H5亚型抗体检测盲样由四川省动物疫病预防控制中心制备,试剂由哈尔滨国生生物科技股份有限公司提供。各项目针对每个比对实验室设置6份盲样,各项目提供的检测试剂为同一批次,盲样和试剂经四川省动物疫病预防控制中心测试后统一发放。

县级兽医系统实验室比对盲样和试剂由各市动物疫病预防控制机构自行准备和发放,各比对项目针对每个比对实验室盲样设置不少于5份,各项目试剂为同一批次。

1.3 比对方法 所有比对项目均采用相应的国家现行标准规定的检测方法进行,包括实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,qRT-PCR)、实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、血凝和血凝抑制试验(Hemagglutination test/Hemagglutination inhibition test,HA/HI)、酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)(表1)。

表1 2021年四川省兽医系统实验室检测能力比对项目

1.4 比对结果判定标准 口蹄疫病毒O型抗体检测、禽流感病毒H5亚型抗体检测项目的判定标准为:盲样检测结果与参考值相差不超过1个滴度,判为正确,否则判为错误;其余项目判定标准为:盲样检测结果与参考值完全相同判为正确,否则判为错误。

2 结果

2.1 市级兽医系统实验室比对结果 全省21个市级系统兽医实验室参与了检测能力比对,结果显示,非洲猪瘟病毒核酸检测项目、口蹄疫病毒O型抗体检测项目和禽流感病毒H5亚型抗体检测项目结果正确率分别为100%、92.06%和93.65%;其中,口蹄疫病毒O型抗体检测项目中,有1个实验室有4份盲样检测结果错误,1个实验室6份盲样检测结果均错误;禽流感病毒H5 亚型抗体检测项目中,有2个实验室各有2份盲样检测结果错误,另有1个实验室有4份盲样检测结果错误(表2)。

表2 市级兽医系统实验室比对结果

2.2 县级兽医系统实验室比对结果 全省共148个县级兽医系统实验室参与比对,各实验室比对项目不完全相同。禽流感病毒H7亚型核酸检测和布鲁氏菌抗体检测项目结果正确率均为100%,非洲猪瘟病毒核酸检测、口蹄疫病毒O型抗体检测、包虫病抗原检测、猪瘟抗体检测、禽流感病毒H5亚型抗体检测项目结果正确率依次为99.19%、98.11%、97.50%、96.99%、96.68%;其中,非洲猪瘟病毒核酸检测项目中,有1个实验室2份盲样检测结果错误,4个实验室各有1份盲样检测结果错误;口蹄疫病毒O型抗体检测项目中,有1个实验室2份盲样检测结果错误,8个实验室各有1份盲样检测结果错误;包虫病抗原检测项目中,有1个实验室1份盲样检测结果错误;猪瘟抗体检测项目中,有1个实验室2份盲样检测结果错误,8个实验室各有1份盲样检测结果错误;禽流感病毒H5 亚型抗体检测项目中,有1个实验室3份盲样检测结果错误,6个实验室各有2份盲样检测结果错误,10个实验室各有1份盲样检测结果错误(表3)。

表3 县级兽医系统实验室比对结果

3 分析

盲样检测结果错误最多的项目为禽流感病毒H5亚型抗体检测,市级有3个实验室共8份盲样检测结果错误,县级有17个实验室共25份盲样检测结果错误,可能原因有:个别实验室未严格按照国家现行标准要求进行检测,使用生理盐水代替PBS缓冲液;1%红细胞配置过程中红细胞破裂,未严格量取沉积红细胞体积等导致红细胞悬液配置不准确;4单位抗原配置后未进行抗原回溯,抗原效价测定不准确,影响HI结果;结果判定中主观因素影响。

口蹄疫病毒O型抗体检测项目中,市级有2个实验室共10份盲样检测结果错误,县级有9个实验室共10份盲样检测结果错误;猪瘟抗体检测项目也有9个县级实验室共10份盲样检测结果错误,原因可能有:口蹄疫病毒O型抗体使用固相竞争ELISA进行检测,部分实验室检测人员对该方法不熟悉,操作失误或结果判定错误;酶标仪未定期检定,影响检测结果的读取和判定。

非洲猪瘟病毒核酸检测项目市级实验室正确率均为100%,这与近几年各地对非洲猪瘟的重视和检测强度增加分不开;县级有5个实验室共6份盲样检测结果错误,可能原因有:县级实验室中部分实验室无自动核酸提取设备,手动提取影响结果稳定性;部分实验室的分子生物学检测室为新建,检测人员操作不够熟练;检测过程中存在污染等,导致结果出现偏差。

4 讨论

实验室检测能力比对就像是实验室质量体系的“体检医师”,通过比对能检查出实验室质量体系在运行中存在的问题,加以整改并制定改进和预防措施,可显著降低实验室检测结果的偏离率。本次四川省兽医系统实验室检测能力比对结果,真实客观地反映出一些实验室存在的问题:一是人员方面,部分实验室专职人员不足,尤其是县级实验室人员岗位调动频繁,新进人员未得到有效的培训,操作不熟练,大大增加检测错误的概率;二是设施设备方面,个别实验室设施达不到生物安全要求,缺少设备或部分设备陈旧老化,未定期检定或校准,影响检测结果。

兽医实验室是动物疫病防控体系的重要组成部分,兽医实验室检测能力的提升,对于充分发挥其在动物疫病防控工作中的技术支撑作用具有重要意义。各级兽医主管部门应高度重视实验室建设工作,稳定兽医实验室人员队伍,强化实验室能力建设,加强兽医系统实验室在基础设施设备、质量管理体系、生物安全管理体系方面的建设,强化实验室专项资金保障力度,保证兽医实验室有序、有效运行。