鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株)灭活疫苗保存期试验研究

张俊平，蒋凤英，张春玲，王瑞阳，赵本进，丁卫星，杨惠萍，李春华*

(1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海 201106；2.上海佳牧生物制品有限公司，上海 201403)

鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus 1，PPMV-Ⅰ)病俗称鸽瘟或鸽新城疫，是一种由禽Ⅰ型副黏病毒引起的、流行于鸽群的急性、热性、高度接触性传染病，以肠炎、严重腹泻和神经症状为特征，迄今为止，鸽新城疫仍然是严重危害养鸽业的主要病毒性传染病之一[1-4]。Dortmans 等[5]认为，PPMV-Ⅰ是适应了宿主鸽的新城疫病毒(Newcastle disease viruse，NDV) 变异株。PPMV-Ⅰ与鸡的NDV具有一定的同源性，也有一定的血清学交叉反应，但PPMV-Ⅰ经在鸽体内传代，已适应鸽体内寄生和增殖，使PPMV-Ⅰ与鸡NDV 在抗原性上有了很大差异，因此在使用新城疫疫苗免疫鸽群后，出现抗体水平不高，保护率低，免疫期短，不能完全抵抗强毒的攻击[6]。因此，分离、培育出免疫原性良好的毒株，研制出具有良好免疫原性的鸽Ⅰ型副黏病毒灭活疫苗，对预防该病至关重要[7]。本实验室在分离鉴定的基础上研制了鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株)灭活疫苗，并对疫苗进行了前期研究，现对该疫苗进行不同保存条件、不同保存时间的物理性状、安全性和免疫效力的测定，为鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗的保存期提供科学的理论依据。

1 试验材料

1.1 试验疫苗

鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株) 灭活疫苗的批号分别为20200801、20200802 和20200803，均由上海佳牧生物制品有限公司制备。按照《鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株) 灭活疫苗制造及检验试行规程》制造和检验，符合要求。

1.2 试验仪器

TDZ4-WS 低速自动平衡离心机购自上海卢湘仪离心机仪器有限公司；DVNXLVCJC 黏度计购自美国博勒飞公司；DNP-9272 电热恒温培养箱购自上海精宏实验设备有限公司；BPC-250F 生化培养箱购自上海一恒科学仪器有限公司；SPF 鸡隔离器购自苏州市冯氏实验动物设备有限公司。

1.3 培养基

硫乙醇酸盐流体培养基(fluid thioglycollate medium，TG)、胰酪大豆胨液体培养基(tryplic soy broth，TSB)、酪胨琼脂培养基(casein peptone agar medium，GA)均购自北京中海生物科技有限公司。

1.4 试验动物

30 日龄非免疫银王幼鸽(HI 抗体水平≤2log2)由上海申裕鸽业养殖专业合作社提供。

1.5 攻毒毒株

鸽Ⅰ型副黏病毒强毒株(川沙株E5 代)由上海市农业科学院畜牧兽医研究所分离、鉴定和保存，病毒含量为107.5ELD50/0.1 mL。

2 试验方法

2.1 试验方案设计

将鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株) 灭活疫苗样本分别保存在冷藏(2～8 ℃)、室温(25 ℃左右)温度条件下，按以下时间点检测物理性状、安全性和免疫效力。

冷藏保存，分别在保存3、6、9、12、15个月后抽取样本进行检测；室温保存，分别在保存1、2、3、6、9 个月后抽取样本进行检测。

2.2 疫苗物理性状检验

按现行《中华人民共和国兽药典》三部[8]中常规油乳剂灭活疫苗检验方法进行。

2.3 疫苗安全性检验

给10 羽试验幼鸽分别接种在不同温度下保存不同时间的疫苗，每羽肌内注射疫苗1.0 mL，观察14 d，记录试验鸽的临床反应情况。

2.4 疫苗免疫效力检验

给10 羽试验幼鸽分别接种下不同温度下保存不同时间的疫苗，每羽肌内注射疫苗50 μL。接种后28 d，每羽采血，分离血清，进行HI 抗体效价测定，统计抗体效价的几何平均值。

3 试验结果

3.1 鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株)灭活疫苗冷藏保存试验结果

实验室试制的3 批(生产批号分别为：20200801、20200802、20200803) 鸽Ⅰ型 副黏病毒(S-1 株)灭活疫苗冷藏保存12 个月，疫苗的物理性状、安全性和免疫效力检验均合格；保存15 个月，生产批号为20200802 的疫苗免疫效力检验不合格。根据试验结果确定鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株) 灭活疫苗冷藏保存期为12 个月。具体试验结果见表1。

3.2 鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株)灭活疫苗室温保存试验结果

实验室试制的3 批鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗室温保存6 个月，疫苗的物理性状、安全性和免疫效力检验均合格，保存9 个月的生产批号为20200802 的疫苗经物理性状和免疫效力检验均不合格，根据试验结果确定鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株) 灭活疫苗室温保存期为6 个月。具体试验结果见表2。

4 分析与讨论

鸽Ⅰ型副黏病毒病是危害养鸽业的主要疾病之一，迄今尚无有效治疗药物，接种疫苗是预防该病的关键。尽管鸽副黏病毒与鸡新城疫病毒为同一属，但两种病毒在抗原性上有一定差异，在致病性上也有一定区别，许多报道表明，用现有的鸡新城疫疫苗接种鸽子虽具有一定的效果，但保护率并不理想[9-10]。因此，研制一种安全有效的鸽Ⅰ型副黏病毒灭活疫苗迫在眉睫。疫苗研制过程中疫苗保存期的确定是必不可少的环节。

本研究是在鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株) 灭活疫苗前期研究的基础上，进行的不同保存条件、不同保存时间的鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株) 灭活疫苗的物理性状、安全性和免疫效力检测，根据试验结果判定，疫苗冷藏(2～8 ℃)可保存12 个月，室温(25 ℃左右)可保存6 个月。考虑到实际生产及疫苗运输过程中存在很多影响因素，并且目前绝大部分生产、经营、使用单位都具备冷藏(2～8 ℃)保存条件。因此，将鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1 株)灭活疫苗保存期定为：冷藏(2～8 ℃)保存，保存期为12 个月。