HPLC-MS/MS法测定猪肉中噻虫胺残留量的不确定度评定

陈琳涵，陈慧冰

（广州南沙明曦检测服务有限公司，广东广州 511400）

噻虫胺是高效、高选择性的新烟碱类杀虫剂，主要用于水稻、蔬菜、水果等作物的害虫防治[1-2]。目前，分析噻虫胺的检测方法主要有液相色谱法[3]、液相色谱-串联质谱法[4]和气质联用法[5]等，研究对象包括植物源性样品基质和动物源性样品基质。我国GB 2763—2021中规定噻虫胺在谷物和蔬菜等植物源性食品中的最大残留限量在0.01～10.00 mg·kg-1，在肉、蛋、乳等动物源性食品中的最大残留限量在0.01～0.20 mg·kg-1。目前，对猪肉中噻虫胺残留的不确定度分析鲜有报道。因此，本文采用高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中的噻虫胺，参照现行不确定度分析方法及要求，对其结果进行不确定度评估计算，找出影响检测结果的主要因素，为保证检测结果的准确性提供理论依据[6-8]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

市售猪肉；噻虫胺标准品（农业农村部环境保护科研监测所，100 μg·mL-1，扩展不确定度为0.12 μg·mL-1）；乙腈、甲醇（默克公司，色谱级）；乙腈、无水硫酸镁、氯化钠（分析纯）。

1.2 仪器与设备

1290-6460液相色谱-质谱联用仪及色谱柱InfinityLab Poroshell 120 EC-C18（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）（安捷伦公司）；Centrifuge 5810 R冷冻离心机（艾本德公司）；N-EVAP 32氮吹仪（Organomation公司）；JJ500电子天平（双杰公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液的配制

（1）噻虫胺标准中间液的配制。用1 mL移液管移取1.00 mL噻虫胺标准储备液至50 mL容量瓶中，加乙腈定容至刻度，得到噻虫胺标准中间液的浓度为2 mg·L-1。

（2）噻虫胺标准系列溶液的配制。分别移取不同体积的噻虫胺标准中间液至100 mL容量瓶中，加乙腈定容至刻度，得到浓度为0.000 5 mg·L-1、0.001 0 mg·L-1、0.002 0 mg·L-1、0.005 0 mg·L-1、0.010 0 mg·L-1、0.020 0 mg·L-1、0.050 0 mg·L-1和0.100 0 mg·L-1的系列标准工作溶液。

1.3.2 样品前处理

准确称取5.00 g试样于50 mL离心管中，加入3 g无水硫酸钠，混匀，加入10 mL乙酸-乙腈溶液、10 mL正己烷，均质3 min，4 000 r·min-1离心10 min，提取液全部移至分液漏斗中，手摇1 min后静置分层，收集乙腈层，按同样操作重复提取一次。用10 mL乙腈洗涤正己烷层，手摇1 min后静置分层，收集乙腈层。合并3次收集的乙腈层，在40℃下旋蒸至近干，用乙酸-乙腈溶液定容到20 mL，取1.0 mL加适量分散固相萃取剂净化，剧烈振摇1 min，4 000 r·min-1离心10 min，取上清液用0.22 μm滤膜过滤，测定。

1.3.3 仪器条件

（1）色谱条件。色谱柱：InfinityLab Poroshell 120 EC-C18（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）；柱温：40 ℃；进样量：2 μL；流动相A：5 mmol·L-1乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）；流动相B：甲醇；流速：0.3 mL·min-1；洗脱条件见表1。

表1 洗脱条件

（2）质谱条件。电喷雾离子源：ESI+；干燥气温度：250 ℃；干燥气流量：7 L·min-1；雾化气压力：30 psi；鞘气温度：350 ℃；鞘气流量：11 L·min-1；毛细管电压：4 500 V；监测模式：多反应监测，母离子为250.2，监测离子对为169.1/132；碎裂电压：80 V；碰撞电压：10/15 V。

2 结果与分析

2.1 数学模型

噻虫胺药物含量计算公式为

式中：X为样品中噻虫胺的含量，mg·kg-1；C为样品溶液中噻虫胺的浓度，mg·L-1；V为样品定容体积，mL；m为称样质量，g。

2.2 不确定度来源分析

根据样品检测的药物含量计算公式，得到不确定度来源，见图1。

图1 猪肉样品中噻虫胺测定的不确定度来源

2.3 不确定度分量计算

2.3.1 试样溶液重复性测定引入的不确定度urel(A)

预评估时，在统计控制状态下，按照GB 23200.39—2016进行测量，对处理好的样品独立测量7次，样品含量平均值为0.003 59 mg·kg-1，单次测量标准偏差为

实际测量时将在重复性试验条件下独立测定样品2次（2个平行样）的平均值作为检测结果，平行测定的结果为0.020 44 mg·kg-1和0.019 74 mg·kg-1，平均值为0.020 1 mg·kg-1，因此测量重复性引入的标准不确定度为

测量重复性引入的相对标准不确定度为

2.3.2 称量样品质量时电子天平引入的不确定度urel(B1)

称量使用的电子分析天平（精度为0.01 g），查电子天平检定证书，U=0.02 g，k=2，因此单次称量标准不确定度为u1==0.01 g。样品称量m=5.00 g，因此相对标准不确定度为urel=×100%=0.200%。由于称量时采用差减法，一次作为空盘，另一次作为称重，每一次称重均为独立的观测结果，互不相关，由此得到称量样品质量时电子天平引入的合成相对标准不确定度为

2.3.3 标准物质浓度引入的不确定度urel(B2)

根据标准物质证书提供的信息，噻虫胺标准物质的扩展不确定度为0.12 μg·mL-1，k=2，标准值为100 μg·mL-1，则标准物质浓度引入的相对扩展不确定度为

相对标准不确定度为

2.3.4 标准溶液配制引入的不确定度urel(B3)

（1）移取1 mL噻虫胺标准储备液引入的不确定度urel(V1)。该步骤使用的是经检定合格的1 mL A类分度吸量管，经查检定证书，U=0.003 5 mL，k=2，因此单次移取溶液的标准不确定度为

移取1 mL液体引入的相对标准不确定度为

（2）噻虫胺中间液定容50 mL体积引入的不确定度urel(V2)。该步骤使用的是经检定合格的50 mL A类单标线容量瓶，经查检定证书，U=0.030 mL，k=2，因此容量瓶引入的标准不确定度为

50 mL容量瓶引入的相对标准不确定度为

（3）移取0.5 mL噻虫胺中间液引入的不确定度urel(V3)。该步骤使用的是经检定合格的0.5 mL A类分度吸量管，经查检定证书，U=0.002 5 mL，k=2，因此单次移取溶液引入的标准不确定度为

移取0.5 mL液体引入的相对标准不确度为

（4）噻虫胺上机液定容至100 mL引入的不确定度urel(V4)。该步骤使用的是经检定合格的100 mL A类单标线容量瓶，经查检定证书，U=0.050 mL，k=2，因此容量瓶引入的标准不确定度为

100 mL容量瓶引入的相对标准不确定度为

故标准溶液配制引入的相对标准不确定度为

2.3.5 试样溶液制备引入的相对不确定度urel(B4)

移取提取溶液20 mL使用的是经检定合格的20 mL A类分度吸量管，经查检定证书，U=0.050 mL，k=2，因此单次移取的标准不确定度为

移取1 mL液体引入的相对标准不确定度为

故试样溶液制备引入的相对不确定度为

2.3.6 标准物质校准曲线引入的不确定度urel(B5)

对系列标准工作溶液分别进行1次测定，峰面积响应值分别为862、1 757、3 057、6 537、14 765、28 284、68 697和143 851。以溶液浓度为横坐标（x），峰面积响应值为纵坐标（y）进行曲线拟合，得到校正曲线方程为y=1 412.895 693x+184.983 460，R2=0.999 130 34。校准曲线引入的标准不确定度为

式中：SR为残差标准差，SR=0.674 7；b为回归方程中的斜率，b=184.983 460；P为样品测定次数，P=7；n为拟合工作曲线时的测定次数，n=1；C为预评估时由线性方程计算所得浓度，C=0.000 897 mg·L-1；Ci为标准工作溶液浓度，mg·L-1；为标准工作溶液浓度的平均值，mg·L-1。

经计算，样品测定引入的标准不确定度u(B5)为0.000 024 7 mg·L-1，因此校准曲线引入的相对标准不确定度为

2.4 合成标准不确定度

测定噻虫胺含量的相对合成不确定度为

合成标准不确定度u=X×ucrel=0.020 1×3.05%=0.000 61 mg·kg-1，扩展不确定度为U=k×u=2×0.000 61=0.001 2 mg·kg-1，试样中噻虫胺含量的检测结果报告为X=（0.020 1±0.001 2）mg·kg-1，k=2。

3 结论

通过对猪肉中噻虫胺残留量测定过程进行不确定度分析，得出试样中噻虫胺含量的检测结果为（0.020 1±0.001 2）mg·kg-1，k=2。在各不确定度分量中，标准曲线拟合对噻虫胺含量测定的不确定度影响较大。实验室要加强检测人员培训，提高检测人员的技术水平，在样品处理和检测过程中，严格按照标准方法进行操作，定期维护仪器，保证仪器的稳定性，减少检测过程中的不确定度。