复方氨酚溴敏胶囊中对氨基酚的检查

曾金亮，周雅丽，庞发根，梁智渊，刘 敏，殷 果，李玉兰，王晓炜

(深圳市药品检验研究院，广东 深圳 518057)

复方氨酚溴敏胶囊由马来酸氯苯那敏、盐酸溴己新、咖啡因、对乙酰氨基酚和盐酸去氧肾上腺素组成，主要缓解因普通流感引起的感冒症状。对氨基酚为合成过程中乙酰化不完全或储存过程受潮水解产生[1]，毒性大，可引起肾损伤，且具有基因毒性，可致畸[2]，本研究旨在建立HPLC法对复方氨酚溴敏胶囊中对氨基酚进行检查。

1 仪器与试药

Waters e2695-2998高效液相色谱仪，梅特勒XSE205DU电子天平，默克Purospher RP8(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱。对氨基酚、盐酸溴己新、马来酸溴苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因和盐酸去氧肾上腺素和N-(2琥珀酰)-去氧肾上腺素等对照品。默克的色谱纯甲醇和乙腈，上海凌峰的高氯酸钠试剂，实验室超纯水。样品为某厂家成品制剂。

2 方法与结果

2.1 色谱方法与系统适用性

C8柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，100 mmol/L高氯酸钠(含0.1%高氯酸)作A相，乙腈作B相，1.0 mL/min流速，230 nm波长，20 μL进样量，甲醇-水(4∶6)作溶剂。梯度方法如表1所示。

表1 液相梯度方法Table 1 The liquid-phase gradient method

取对氨基酚对照品 4.88 mg→50.00 mL，精取2 mL→20.00 mL(含0.3032 g胶囊内容物)，作为系统适用性溶液，色谱分析得理论板数按对氨基酚峰计算为7709，与前后相邻杂质峰分离度分别为14.8和7.2，系统适用性良好，见图1。

图1 系统适用性图谱Fig.1 System suitability chromatogram

2.2 线性与范围

取对氨基酚对照品49.70 mg→500.00 mL，按表2配制得到相当于100%，50%，10%，5%，1%浓度的对氨基酚线性溶液，进行分析，详见表2、图2。

图2 线性拟合图Fig.2 Linear fit to fig

表2 线性溶液配制及色谱分析结果Table 2 Results of linear solution preparation and chromatographic analysis

图2可见，线性拟合方程为y=66077x-27765，r2=0.999，表明在该色谱条件下，对氨基酚的浓度在0.994～99.4 μg/mL范围内线性关系良好。

2.3 专属性试验

分别配制下列溶液，稀释剂：甲醇-水(4∶6)；酸破坏样品：0.3040 g胶囊内容物→25.00 mL，加0.1 mol/L盐酸溶液5 mL，室温下放置1 h，再加0.1 mol/L氢氧化钠溶液5 mL；碱破坏样品：0.3068 g胶囊内容物→25.00 mL棕色容量瓶中，加0.1 mol/L氢氧化钠溶液5 mL，室温下放至1 h，再加0.1 mol/L盐酸溶液5 mL；氧化破坏样品：0.3060 g胶囊内容物→25.00 mL，加30%过氧化氢溶液5 mL，在室温放置1 h；高温破坏样品：0.3065 g胶囊内容物→25.00 mL容量瓶，加稀释剂5.00 mL溶解，于105 ℃烘箱中放置24 h，上述破坏溶液最后均需加稀释剂稀释至刻度，色谱分析结果见图3～图7。

图3 稀释剂图谱Fig.3 Diluent chromatogram

图4 酸破坏图谱Fig.4 Acid damage chromatogram

图5 碱破坏图谱Fig.5 Alkadli damage chromatogram

图6 氧化破坏图谱Fig.6 Oxidative damage chromatogram

图7 高温破坏图谱Fig.7 High temperature damage chromatogram

经酸、碱、高温和氧化破坏样品，色谱分析结果显示对氨基酚出峰位置两边均无明显杂质峰，对对氨基酚检测均无影响，表明该方法专属性好。

2.4 检测限和定量限

取浓度为0.994 μg/mL的线性对照品溶液5.00 mL→200 mL(浓度约为0.025 μg/mL)，作为检测限溶液，色谱分析结果S/N=3，故检测限为0.025 μg/mL；在药品检验色谱分析中，将信噪比S/N=10作为定量限的量度，S/N=3作为检测限的量度，故由检测限浓度折算定量限为0.025÷3×10=0.083 μg/mL。色谱图详见图8。

图8 检测限图谱Fig.8 Detection limit chromatogram

2.5 回收率试验

分别精取对氨基酚对照品18.08 mg、18.55 mg→100.00 mL(储备液)，分别精取2 mL→20.00 mL(作为对照品溶液)，并按表3精取第一份储备液置含约0.3032 g辅料棕色容量瓶中，浓度相当于上述溶液的80%，100%，120%的回收率溶液，分析及计算结果见表3、表4。

表3 回收率溶液配配制表Table 3 Distribution list of recovery solutions

表4 对氨基酚回收率结果Table 4 Parataminophen recovery results

回收率色谱分析计算结果显示，对氨基酚的低、中、高三个水平浓度的平均回收率(n=9)为101.2%，RSD为0.6%，表明回收率试验结果良好，方法准确度良好。

2.6 精密度试验

取10%线性溶液连续6次进样，结果见表5，RSD为0.3%，说明仪器精密度良好。

表5 精密度结果Table 5 Precision results

2.7 重复性试验

精取20.60 mg对氨基酚对照品→200.00 mL，分别精密量取2 mL→20.00 mL(6份，每份约含0.3050 g内容物)，试验结果如表6所示，试验结果表明重复性实验结果良好。

表6 重复性结果Table 6 Repeatability results

2.8 稳定性试验

取对氨基酚对照品9.97 mg→100.00 mL(储备液1)，精取2 mL储备液1→20.00 mL，在室温环境中，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、16 h、20 h、24 h进样；结果如表7所示，试验结果表明对氨基酚在24 h内基本稳定。

表7 稳定性结果Table 7 Stability results

2.9 滤膜相容性试验

取稳定性试验项下储备液1，按稳定性项下方法配制加标样品溶液，在其他条件不变情况下，分别弃去0 mL，1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL后滤液作为供试品溶液；同时，在其他条件不变情况下，制备经离心10000 r 15 min所得上清液作为对照供试品溶液，结果如表8所示，试验结果表明方法滤膜相容性良好。

表8 滤膜相容性结果Table 8 Filter membrane compatibility results

表9 对氨基酚测定结果Table 9 Results of p-aminophen determination

2.10 样品测定

取复方氨酚秀敏胶囊20粒，精密称定，计算平均装量，取内容物混匀，分别精密称取0.3056 g、0.3068 g(含对乙酰氨基酚约250 mg)→25.00 mL；同法制备0.01 mg/mL对氨基酚的对照品溶液；依法测定，记录谱图，结果见9。

检测结果显示，样品均未检出对氨基酚杂质，说明样品中对氨基酚含量极低，作为参考，远低于药典对乙酰氨基酚片剂项下规定的0.1%。

3 结 论

通过沃特世高效液相色谱仪扫3D图谱(200～300 nm)，发现对氨基酚最大吸收在230 nm波长处，故选定230 nm作为此次研究的检测波长，根据药典要求对该方法进行方法学验证，考察系统适用性，结果显示对氨基酚与相邻杂质峰分离效果好；考察酸、碱、高温和氧化等对样品进行破坏，均未有明显影响对氨基酚检测的杂质峰，各破坏均对对氨基酚的检测无干扰，表明方法专属性强；且方法仪器精密度良好，重复性测定结果良好，说明该方法可用于复方氨酚溴敏胶囊中的杂质对氨基酚的检测，高效可行。对氨基酚作为对人有影响的毒性物质[3]，在生产过程中难以避免地产生，有研究表明，对水生环境也有长远的影响[4]，在药检领域当予以关注[5-7]，因此建立方法对该杂质的检测是非常必要的，药典2020年版[8]对乙酰氨基酚片中也对该杂质进行了控制，本文参考各研究[9-12]，建立HPLC法检测复方氨酚溴敏胶囊中的对氨基酚，为复方氨酚溴敏胶囊质量控制的研究提供参考。