HS-SPME-GC-MS法分析鸡蛋花不同产地挥发性成分*

陈柳生，王如意，林晓璇，周伟明，王丽凡

(广东食品药品职业学院，广东 广州 510520)

鸡蛋花，又名缅栀子，蛋黄花，擂捶花，是夹竹桃科植物鸡蛋花PlumeriarubraL.cv.Acutifolia的干燥花朵。它原产于热带美洲，现广泛栽种于全球热带地区，在我国则主产于广东、福建、广西、海南等地。其味甘、淡，性凉，具有清热利湿止痢，润肺止咳解毒之功效，临床上可用于湿热下痢，里急后重，肺热咳嗽等症，疗效确切[1-2]。鸡蛋花是岭南地区习用草药，也是广东凉茶中的主要原料药材之一，如市场销售的著名品牌凉茶“王老吉凉茶”、“五花茶”、“夏桑菊”等都以鸡蛋花为主要组成原料。另其鲜花浸膏亦可用于食品香精和化妆品[3]。基于鸡蛋花的上述药用价值，近年来国内外学者对鸡蛋花其化学成分及药理活性方面开展了较为系统的研究，梁静等[4]用气相色谱法、李颖等[5]及黄美燕等[6]用GC-MS方法对鸡蛋花提取物的挥发油化学成分进行了研究，分离鉴定出数十种挥发油成分。Brigitta E和Karsten K等[7]从干燥的鸡蛋花树皮中分离出鸡蛋花素plumericin，异鸡蛋花素Isoplumericin。关晔等[8]从鸡蛋花的花中分离到两个新环烯醚萜类化合物以及鸡蛋花苷。从鸡蛋花的叶、树皮、茎等非药用部位分离得到香豆素鸡蛋花苷、黄婵花素等环烯醚萜类成分，从鸡蛋花的花中分离到山萘酸，阿亚黄素和pilloin等黄酮醇类成分。Bina S S等[9]从鸡蛋花叶中分离出1α-鸡蛋花苷。在2001年，Kavita V和Sanjay G[10]发现鸡蛋花中的黄鸡蛋花素对HIV病毒逆转录过程有抑制作用。Egwaikhide P A等[11]发现鸡蛋花的花和叶的甲醇提取物对化脓棒杆菌、粪链球菌、芽孢杆菌属等都有很强的抑制作用。Elfahmi和Komar R等[12]发现鸡蛋花的甲醇提取物鸡蛋花苷对纤维肉瘤细胞有抑制作用。但有关鸡蛋花挥发性成分的含量分析药材产地大多数来自国内的不同省份，国外产的鸡蛋花挥发油成分的含量分析研究报道得较少，特别是来自产地印度尼西亚巴厘岛和爪哇岛的鸡蛋花的挥发油成分分析还未见报道。

本试验采用顶空固相微萃取-气相-质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS)分析来自巴厘岛和爪哇岛两个不同产地的鸡蛋花中的挥发性成分及含量差异，为进一步研究和利用鸡蛋花提供研究基础。

1 仪器与材料

QP2010型气相-质谱仪，日本Shimadzu公司；DK-3001N顶空进样器，北京中兴分析仪器；手动固相微萃取装置，美国Supelco公司；50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取纤维头，美国Supelco公司；10 mL顶空瓶，美国Supelco公司。

实验用鸡蛋花由广州市食安科技有限公司从印度尼西亚进口采购，自然阴干，经广东省中药研究所郑海博士鉴定为鸡蛋花PlumeriarubraL.cv.Acutifolia的干燥花朵。

2 方法与结果

2.1 GC-MS 分析条件

2.1.1 色谱条件

TG-5 MS石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.50 μm，Thermo公司)；载气为高纯度氦气(99.999%)；体积流量1.0 mL/min；不分流进样；进样口温度250 ℃；接口温度280 ℃；程序升温：50 ℃保持5 min，6 ℃/min升到120 ℃保持5 min，3 ℃/min升到160 ℃保持3 min，10 ℃/min升到220 ℃保持10 min，总程序时间54 min。

2.1.2 质谱条件

离子源：电子轰击源(EI)；电子能量：70 eV；离子源温度：230.0 ℃；扫描方式：Scan；扫描范围：45～450 m/z。

2.1.3 图谱检索

采用NIST 17-1、NIST 17-2、NIST 17-S质谱库进行数据检索及分析。

2.2 鸡蛋花药材的预处理

将来自巴厘岛和爪哇岛的鸡蛋花自然晾干，分别粉碎，过24目筛，备用。

2.3 HS-SPME方法

取经处理过的来自巴厘岛和爪哇岛的鸡蛋花各0.5 g，置于10 mL顶空瓶中，80 ℃下平衡40 min，将装有50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取纤维头的手动进样器插入瓶中，推出萃取头萃取30 min，取出立即插入色谱仪进样口中，解吸附5 min。

2.4 挥发油的化学成分分析

取经“2.3”项下处理所得的挥发物，按“2.1”项下条件用GC-MS联用仪进行分析鉴定。数据处理时，设定积分参数初始斜率为5000，得总离子流图见图1和图2。采用NIST 17-1、NIST 17-2、NIST 17-S质谱库进行检索，并结合标准质谱图和相关文献鉴定各挥发成分，采用色谱峰面积归一化法进行定量分析，得出各挥发成分在总挥发性组分中的相对含量，结果如表1所示。

表1 巴厘岛鸡蛋花和爪哇岛鸡蛋花中挥发物的化学成分Table 1 Chemical constituents of volatiles from Plumeria rubra L. cv. Acutifolia (Bali Island and Java Island)

图1 巴厘岛鸡蛋花挥发物总离子流图Fig.1 Total ion current of volatile matter from Plumeria rubra L. cv. Acutifolia (Bali Island)

图2 爪哇岛鸡蛋花挥发物总离子流图Fig.2 Total ion current of volatile matter from Plumeria rubra L. cv. Acutifolia (Java Island)

巴厘岛鸡蛋花挥发物中鉴定出41个化合物，占挥发物总量的78.63%，其中含量较高的化合物为反式-橙花叔醇(8.20%)、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯(9.05%)、苯甲醛(5.31%)、芳樟醇(1.42%)、氧化芳樟醇(1.48%)、1-十九碳烯(3.80%)、正十九烷(3.44%)、正十七烷(2.16%)、香叶醇(1.29%)、香叶醛(4.80%)、橙花醛(2.40%)、香茅醇(1.96%)、金合欢醇(2.52%)，这13种成分共占挥发性组分的45.31%。

爪哇岛鸡蛋花挥发物中鉴定出47个化合物，占挥发物总量的81.87%，其中含量较高的化合物为反式-橙花叔醇(5.87%)、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯(4.84%)、苯甲醛(4.79%)、α-松油醇(3.64%)、芳樟醇(2.34%)、氧化芳樟醇(2.61%)、1-十九碳烯(3.80%)、正十九烷(3.44%)、正十七烷(2.38%)、棕榈酸甲酯(2.90%)、香叶醇(2.33%)、香叶醛(5.90%)、橙花醛(3.49%)、香茅醇(2.58%)。这14种成分共占挥发性组分的50.91%。

3 分析与讨论

从巴厘岛鸡蛋花和爪哇岛鸡蛋花中共鉴定出54个化合物，其中有34个化合物是两个产地共有的，其中反式-橙花叔醇、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯、苯甲醛、芳樟醇、氧化芳樟醇、1-十九碳烯、正十九烷、正十七烷、香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇等化合物的含量在两个产地鸡蛋花中均较高。鉴定得到的挥发物成分数量丰富，已有文献报道过的挥发物成分有37个，其它13个化合物为首次发现，未见其它文献报道过。

通过气质联用研究国产的鸡蛋花中挥发性成分的文献有很多报道。黄美燕[6]对来自广东暨南大学的鸡蛋花品种进行分析，共鉴定出22种化学成分，其中β-芳香醇(20.67%)、顺-香叶醇(16.19%)、反-苦橙油醇(14.06%)为主要成分。韩明[13]对采自广东华南农业大学的鸡蛋花品种进行分析，共鉴定出16种成分，其中苦橙油醇(20.25%)、香叶基芳樟醇(10.11%)、二十七烷(7.65%)、肉豆蔻酸(6.73%)为主要成分。张丽霞等[14]从采自广西南宁的品种中分离鉴定出20种成分，其中香叶酯类含量较高达到了40%，苦橙醇等萜类化合物约占28%，脂肪酸约占17%，烷烃约占2.6%。程必强等[15]分析云南西双版纳的品种的主要成分为芳樟醇、氧化芳樟醇、苯甲酸甲酯、橙花醇、香叶醇、橙花叔醇、金合欢醇、苯甲酸苄酯、水杨酸苄酯和松油醇等。从表1中可知，巴厘岛鸡蛋花和爪哇岛鸡蛋花中挥发物的化学成分有萜类、醇类、醛类、酮类、酯类、脂肪酸、烷烃、烯烃及烃类衍生物等。与上述国内几个产地的化学成分对比发现，本研究所用鸡蛋花其挥发物主要化学成分除了与云南西双版纳品种有些相似外，与国内产地的鸡蛋花在化学成分上的差异较大，这说明鸡蛋花的化学成分与产地有一定的关系，不同产地的化学成分各异。但来自印尼巴厘岛和爪哇岛的两个品种在化学成分上极其相似，相同化学成分数量达到34个，可能是地域上比较接近的缘故。它们的主要化学成分为反式-橙花叔醇、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯、苯甲醛、香叶醛，(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯在鸡蛋花中作为挥发油主要化学成分还是首次发现。通过研究比较，发现巴厘岛鸡蛋花和爪哇岛鸡蛋花的成分基本一致，本法可以作为来自印尼这两地的鸡蛋花挥发油成分的指纹图谱，对于区分不同品种或产地的鸡蛋花具有一定的意义。

本研究采用顶空固相微萃取技术采集挥发性成分，通过合理优化气相色谱柱箱升温程序，化合物得到充分采集、分离、鉴定，从中分离得到的化合物较多，是一种快捷、高效的挥发性成分处理方法。

4 结 论

从巴厘岛鸡蛋花中鉴定出41个化合物，占挥发物总量的78.63%；从爪哇岛鸡蛋花中鉴定出47个化合物，占挥发物总量的81.87%。有34个化合物是两个产地共有的，其中反式-橙花叔醇、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯、苯甲醛、芳樟醇、氧化芳樟醇、1-十九碳烯、正十九烷、正十七烷、香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇等化合物的含量均较高。本研究首次发现鸡蛋花挥发物中一些新的化学成分，能为鸡蛋花的药用、质量标准的建立等多方面的研究提供一定实验依据和参考。