高效液相色谱法测定婴幼儿辅食（米粉）中维生素B2的不确定度评定

◎ 钟 雪，邹 璐，孟春杨，周贻兵，刘利亚

（贵州省疾病预防控制中心，贵州 贵阳 550004）

维生素B2是一种水溶性维生素，若人体内缺乏可导致代谢受阻。由于婴幼儿辅食米粉中维生素B2含量少，往往需要添加维生素B2成品[1]。

目前，测定维生素B2的方法包括HPLC-荧光检测法[2]、HPLC-紫外检测法[3]、HPLC-MS/MS法[4-5]，通过不确定度的评定，可以明确对测试结果有重要影响的分量，提高测定数据的准确性。本文采用高效液相色谱-荧光检测法，对婴幼儿辅食米粉中维生素B2的含量进行了测定，对结果进行不确定度评估。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器

维生素B2标准品（纯度99.3%）；高效液相色谱仪（美国Waters公司）；BP211D型电子天平（德国Satorius公司）。

1.2 试验方法

按照《食品安全国家标准食品中维生素B2的测定》（GB 5009.85—2016）中第一法：高效液相色谱法测定。

1.3 不确定度来源分析

①测量重复性。②标准溶液配制。③标准曲线的拟合。④样品称量和定容。⑤前处理过程。

2 结果讨论

2.1 不确定度评定

2.1.1 重复测量引入的不确定度

样品重复称量6次进行测定，维生素B2含量分别为0.510、0.522、0.470、0.531、0.521、0.476 mg/100 g，平均含量为0.505 mg/100 g，单次测量的标准不确定度为重复测量引入的相对标准不确定度为

2.1.2 标准品引入的不确定度

（1）称量引入的不确定度。称量10.1 mg维生素B2标准物质，根据天平检定证书，最大允许误差为0.05 mg不确定度，相对标准不确定度0.002 48。

（2）定容储备液引入的不确定度。该过程的不确定度主要来源于容量瓶（V=100 mL）的允差和温度变化。采用100 mL容量瓶（A级），20 ℃时容量允差为±0.10 mL，定容引入的不确定度温度校正引入的不确定为0.0606mL。标准不确定度为0.07307。相对标准不确定度0.0007307。

（3）标准溶液配制引入不确定度。玻璃量器的相对标准不确定度如表1所示。容量器具引入的不确定度=0.006 48；温度校正引入的不确定度=0.001 5；配制过程引入的相对标准不确定度=0.006 65。

表1 各玻璃量器的容量允差表

（4）标准品纯度引入的不确定度。根据标准品证书，标准物质纯度为99.3%，U=1.0%，k=2，标准不确定度为，相对标准不确定度为。标准品引入的相对合成标准不确定度

2.1.3 标准曲线拟合引入的不确定度

标准工作液重复测定3次，对应峰面积见表2。

表2 维生素B2标准曲线表

标准曲线的标准偏差用贝塞尔公式进行计算：

将表2数据代入式（1），计算得SR≈109 108。

标准工作曲线用线性最小二乘法拟合，不确定度计算如下：

式中：

p ——重复测定次数；

——维生素B2含量的算术平均值；

xi——标准曲线各点的质量浓度；

——系列标准工作溶液质量浓度的平均值。

上述各值代入式（2）可得u2=0.004 652，相对标准不确定度为：

2.1.4 样品称量和定容引入的不确定度

准确称量3g平行样，平均称样量：

天平检定证书给出的最大允许误差为0.000 5 g，标准不确定度为：

相对标准不确定度为：

试样酶解后，将酶解液转移至100 mL容量瓶中，其中温度校正引入的标准不确定度为：

100 mL容量瓶（A级）的容量允差为±0.10 mL，则：

不确定度为：

相对标准不确定度为：

2.1.5 前处理过程引入的不确定度

采用加标回收评估前处理过程引入的不确定度，回收率分别为84.4%、82.8%、79.6%、80.2%、84.1%、81.5%，平均值为82.1%，SW=0.02，相对标准不确定度

2.2 合成不确定度

合成标准不确定度为：

2.3 扩展不确定度

取置信概率p=95%，置信因子k=2，则扩展不确定度为U=u×k=0.019 3×2=0.038 6 mg/100 g，婴幼儿辅食（米粉）中维生素B2结果为（0.505±0.038 6）mg/100 g。

3 结语

通过高效液相色谱法，本文对婴幼儿辅食（米粉）中所含维生素B2的检测不确定度进行分析，结果显示，标准曲线的拟合对结果的影响最为显著，其次是标准溶液的配制，样品的称量和定容对结果影响最小。