微柱凝胶技术在ABO血型不合新生儿溶血病诊断及输血前检验中的应用分析

蒋金燕 杨媛媛

（中国人民解放军陆军第八十集团军医院输血科，山东 潍坊，261000）

母体、新生儿的血型融合度低或不融合，是导致ABO血型不合新生儿溶血病（ABO-HDN）发生的主要原因，本病为血型免疫反应疾病[1]。母体在孕育胎儿的过程中产生的血型抗体无法与胎儿抗原相匹配，但血型抗体随胎盘进入胎儿体内，导致同族免疫性溶血[2]。这类患儿的母亲多为O型血，新生儿多为A/B型血，O型血母体内部会产生大量的抗A、抗B免疫球蛋白，拮抗A型血与B型血，当母体血液从胎盘进入胎儿体内，极易使其发生溶血。产前IgG抗体的降低，也是导致ABO-HDN发生的关键原因[3]。新生儿出生后尚未完全适应外在环境，抗A、抗B型抗体并未产生，与成人相比，新生儿红细胞表面血型抗原的表达能力弱，因此无法利用成人血型鉴定方式对新生儿血型进行鉴定[4]。新生儿有ABO血型不合新生儿溶血病（ABO-hemolytic disease of the newborn，ABO-HDN）倾向时需尽早诊断，确诊后要做好输血前检验工作，通过交叉配血选择与患儿血液相容度较高的同型血液。在交叉配血筛查中，重点筛查抗A、抗B的存在，以提升临床检验结果的精确性，避免误诊，为后续临床制订相应的治疗方案奠定基础[5]。在众多检验方法中，大量学者认为微柱凝胶技术（microbubes gel technology，MGT）在ABO-HDN诊断中具有较大优势，且用于输血前检验的安全性高。微柱凝胶法的基本原理是将生物分子放入一种叫作凝胶的特殊介质中，然后用电流将它们分离出来。凝胶是一种半固体、稠厚的物质，它可以将生物分子分离出来，并且可以控制分子的运动方向。凝胶的结构可以由电流控制，从而使生物分子在凝胶中沿着一定的方向移动，从而实现分离。因此本研究以2021年2月—2023年2月收治的58例ABO-HDN新生儿为对象，分析MGT技术优势，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021年2月—2023年2月中国人民解放军陆军第八十集团军医院收治的58例ABO-HDN新生儿为研究对象。新生儿中男、女患儿分别为30例、28例；日龄2～12 d，平均日龄（6.15±0.25）d；体质量4687.58～6584.56 g，平均体质量（5964.45±25.13）g；分娩方式：自然分娩、剖宫产分别40例、18例；HDN分型：轻型、中型、重型分别24例、25例、9例。胎龄38～41周，平均胎龄（39.45±1.23）周；血型：A型、B型分别30例、28例；网织红细胞计数范围为21.56×109/L～89.65×109/L。患儿资料完整，可进行后续报道。本研究所纳入患儿的家长对研究内容知情同意，并签署知情同意书。本研究经中国人民解放军陆军第八十集团军医院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①符合ABO-HDN的诊断标准[6]；②足月新生儿；③生长发育正常。

排除标准：①无恶性肿瘤等合并症；合并先天性心脏病等先天疾病；②新生儿家族存在精神病史；③对药物过敏；④生存时间＜3个月。⑤合并先天性畸形；⑥合并肝肾功能异常。

1.3 方法

对58例ABO-HDN患儿分别进行MGT和MPT检验，同时与5份ABO同型红细胞制剂进行急性交叉配血试验。

样本采集：取患儿空腹静脉血6 mL，分为两份。正定、反定凝集强度分别达到3+、2+，且正反定型血型复查一致，即样本质量符合检测要求。

MPT检验过程：取一支干净空试管，滴入2滴ABO-HDN患儿的红细胞放散液/血浆，同时加入同型ABO-HDN红细胞悬液（3%～5%），再加入低离子介质（0.7 mL），所有液体加入完成后完全混合，再加入凝聚胺溶液。利用离心机（生产企业：长春博迅生物技术有限责任公司，型号：TD-3A）高速离心处理，静置10 min后去掉上清液，对红细胞凝聚状况进行评估，存在凝集状态需重新进行上述操作。

MGT检验：取微柱凝胶卡，将红细胞放散液/血浆滴入2滴，然后将血样加入凝胶卡中，持续离心处理5 min，转速1500 r/min，观测最终结果。

溶血试验：（1）游离抗体试验：准备三支试管，分别标号A、B、O，在各试管中加入50 μL红细胞悬液（浓度0.8%），再加入血清25 μL，置于孵育器中快速处理，等待15 min，然后高速离心10 min，离心速度2500 r/min。（2）直接抗球蛋白试验：取一张抗人球蛋白卡，将A、B与O三孔标记出来，加入浓度为0.8%的红细胞悬液，剂量50 μL，持续离心1 min，观察离心结果。（3）抗体释放试验：取一张空白的抗人球蛋白卡，将A、B与O三孔标记出来，加入浓度为0.8%的红细胞悬液，剂量50 μL，滴入放散液后持续孵育15～20 min，离心10 min后观察结果。

1.4 观察指标

（1）统计不同溶血检验下，ABO-HDN的诊断结果。（2）记录MGT与MPT检验方式下，直抗与血清交叉配血的结果。（3）记录MGT与MPT检验方式下，直抗与放散液交叉配血的结果。（4）统计血清MGT与MPT配血的结果。（5）统计放散液MGT与MPT配血的结果。

1.5 统计学分析

采用SPSS 25.0统计软件进行数据分析，计数资料[n（%）]表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。一致性检验利用Kappa检验，Kappa值大小与一致性程度成正比。K为0～1。

2 结果

2.1 直抗、游离及放散诊断结果

三种溶血试验结果显示，直抗、游离及放散检验为阳性分别为29例（50.00%）、44例（75.86%）、58例（100.00%），见表1。

表1 直抗、游离及放散诊断结果 [n（%）]

2.2 直抗与血清交叉配血

58例ABO-HDN患儿共进行290次交叉配血试验，MGT试验显示不合格率为173/290次（59.66%），MPT不合格率为82次（28.78%），MGT检出不合格率显著高于MPT试验（χ2=57.955，P=0.001）。直抗+与直抗-交叉配血的不合格率分别为137/290（47.24%）、118/290（40.69%），阳性高于阴性，差异有统计学意义（χ2=18.239，P=0.001＜0.05），见表2。

表2 直抗与血清交叉配血 [n（%）]

2.3 直抗与放散液交叉配血

58例ABO-HDN患儿共进行290次交叉配血试验，MGT试验显示不合格率为155次（53.45%），MPT不合格率为73次（25.17%），MGT检出不合格率显著高于MPT试验（χ2=48.594，P=0.001）。直抗+与直抗-交叉配血的不合格率分别为120/290（41.38%）、108/290（37.24%），阳性高于阴性，差异有统计学意义（χ2=1.041，P=0.037＜0.05），见表3。

表3 直抗与放散液交叉配血 [n（%）]

2.4 配血结果（血清MGT与MPT）

血清MGT与MPT配血结果显示，MPT检出阳性的MGT也全部为阳性。Kappa检验显示MGT与MPT一致性较差（Kappa值=0.215，P=0.002），见表4。

表4 配血结果（血清MGT与MPT） [n（%）]

2.5 配血结果（放散液MGT与MPT）

放散液MGT与MPT配血结果显示，MPT检出阳性的MGT也全部为阳性。Kappa检验显示MGT与MPT一致性较差（Kappa值=0.185，P=0.001），见表5。

表5 配血结果（放散液MGT与MPT） [n（%）]

3 讨论

临床常采用抗体释放、游离血清等方法对ABO-HDN进行检测，确诊后需根据患儿状况给予输血治疗[7]。先进行交叉配血再输血，能摒除与患儿血液相容性较差的血型，通过对放散液和游离血清同时进行交叉配血，能保证交叉配血全面性[8-9]。采用放散液交叉配血，能有效评估细胞溶血性抗体、红细胞的不相容程度。采用游离血清交叉配血，能评估血液溶血抗体、红细胞的不相容程度，细胞和血液兼顾，有效提升交叉配血精度[10]。在众多检测技术中，MGT技术的应用效果较为理想。

本研究先对ABO-HDN患儿进行溶血检验，结果显示：放散检验的阳性率为100%，可见放散检验在是ABO-HDN患儿的首选方法，配合游离与直抗试验能够获得更加精确的诊断结果。在确定所有患儿都为ABO-HDN类型后，给予MGT检验，获得良好效果。MGT与MPT配血结果也显示，MPT检出阳性的MGT也全部为阳性，且两者一致性差，MGT检验不合格率较高。由统计学结果可知，MGT技术在ABO-HDN新生儿诊断中具有明显优势，其诊断精确率明显高于MPT，能够更加准确地检验出不合格交叉配血情况，提高输血安全性。

本次获得上述良好结果，与MGT的实施有密切关系。与其他检验技术相比，MGT技术在诊断ABO-HDN中优势突出，兼具可重复、诊断结果准确、无创等优势，在检验的同时保证患儿安全性，避免对患儿造成二次损伤[11]。同时在交叉配血过程中应用MGT技术，能有效提升检验敏感度，减少假阴性可能[12]。但MGT技术无法完全避免假阴性结果，因此在临床检验过程中，需配合放散液、血清两种交叉配血方式，提高不合格交叉配血检出率，进而降低漏检、误检风险[13]。由于ABO-HDN患儿的个体化差异，身体的抗体数量、红细胞血型抗原表达强度等都存在差异性，加上胎儿时期被动接收的溶血性抗体数量不同，都会对交叉配血灵敏度产生不同程度的影响，因此在利用MGT技术进行交叉配血试验时，要合理把控灵敏度的弹性范围[14]。

直接抗人球蛋白检测，是当前ABO-HDN广泛应用的方法，但受到多种因素的限制，应用MPT技术所获得的诊断结果仍存在较大争议性[15]。与MPT技术相比，MGT技术是近年来临床认可度较高的诊断技术，总结该项技术优势主要包括：操作过程简单，检验人员只需按照特定程序，依次完成各个检测步骤，就能获得相应结果，且检测过程无需洗涤，检验时间短，满足患者即时查看结果的需求；MGT检验的判读方式简单，可通过存盘、拍照方式进行检验，结果清晰且稳定；检验过程自动化程度高，有效避免人工检验导致的误差；MGT技术具有较高的灵敏度，结合条形码技术进行上机检测，有利于降低检测错误率，保证交叉配血检验的精准度。但需要注意的是，MGT技术并不是十全十美的，交叉配血检验过程中仍存在误诊风险，因此临床检验过程中，仍需注意规避相关的风险点[16-17]。

杨鑫等[18]的报道中，对MGT技术的临床应用价值进行评价，收治284例ABO-HDN新生儿，分别进行MGT检验及MPT检验，结果显示：直抗、血清、放散试验阳性率分别为53.1%、85.2%、100.00%，MGT检出不合格率均显著高于MPT试验（P＜0.05），直抗+与直抗-交叉配血的不合格率相比，“+”均高于“-”（P＜0.05），本研究结果与上述报道具有一致性，可见本次结果具有较高的可信度。尽管本次研究初步取得成效，但仍存在漏诊、样本量少、健康教育不到位等问题[19-20]。

综上所述，ABO-HDN患儿诊断及输血前检验中，MGT技术的血液检验不合格率较高，且阳性检出高于MPT。