某院肺炎克雷伯菌的临床分布及其耐药性分析

吴亮

【摘要】  目的    探讨上饶卫校附属医院肺炎克雷伯菌（klebsiella pneumoniae，KPN）的临床分布及其耐药性。方法    选择上饶卫校附属医院检验科2018年3月—2020年7月各类临床样本中分离培养获得的782株KPN，分析KPN样本来源、科室分布情况及其耐药性。结果    KPN样本来源主要为尿液，占比55.37%，其次为血液、痰液，分别占比32.61%、9.72%；KPN样本来源科室主要为重症医学科，占比50.51%，其次为呼吸内科、神经外科，分别占比20.97%、13.94%；KPN样本中耐药率最高的为氨苄西林，耐药率为100.00%，其次为复方新诺明、头孢唑林，耐药率为52.05%、46.55%，敏感度最高的为阿米卡星，敏感度为93.22%，其次为亚胺培南、美罗培南，敏感度为89.26%、89.51%。结论    KPN主要来源于重症医学科、神经外科、神经内科，主要源自血液、尿液和痰液样本，对氨苄西林、复方新诺明、头孢唑林耐药率较高。

【关键词】  肺炎克雷伯菌； 临床分布； 耐药性； 药敏试验

中图分类号：R446.5        文献标识码：A

文章编号：1672-1721（2023）25-0098-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.25.032

目前，全球范围内细菌耐药情况已日趋严重，既会威胁人类健康，还会影响生态环境。因抗生素种类繁多或长期大剂量使用广谱抗生素，使得部分人体内菌群失调，正常菌群数量减少，增加条件致病菌侵袭风险，增加了耐药发生率[1-2]。肺炎克雷伯菌

（KPN）属于革兰阴性菌，是院内感染常见的条件致病菌之一，具有易形成耐藥、广泛的环境适应性、较强的致病性等特征，常存在于人体的呼吸道、肠道内，可诱发泌尿系感染、肺部感染、败血症、肝脓肿和胆囊炎等疾病[3-4]。一般KPN感染早期无典型性特征，易被临床低估其严重程度。本研究选择上饶卫校附属医院检验科2018年3月—2020年7月各类临床样本中分离培养获得的782株KPN，分析KPN的临床分布及其耐药性，为尽早控制KPN在院内传播提供参考依据。现报告如下。

1    资料与方法

1.1    菌株来源    选择上饶卫校附属医院检验科2018年3月—2020年7月各类临床样本中分离培养获得的782株KPN，排除同一患者相同部位分离的重复菌株。

1.2    主要仪器和试剂    主要仪器和试剂包括：珠海迪尔生物有限公司的药敏检测试剂卡和肠杆菌科细菌鉴定卡、全自动细菌鉴定仪及药敏分析系统；江苏常州朗越公司的CHA-SA型恒温振荡器；湖南湘仪公司生产的台式高速离心机（CTG16-WS型）；上海福玛实验设备有限公司生产的恒温培养箱；赛多利科学仪器（北京）有限公司生产的电子天平；美国Millipore公司的超纯水系统；广东环凯微生物科技有限公司的胰蛋白胨、酵母粉；广州市鸿洲实验器材科技有限公司提供的0.9%氯化钠注射液；天津市福晨化学试剂厂提供的氯化钠；南京茂捷生物科技有限公司生产的营养琼脂粉；艾拓思公司的鼓风干燥箱；江苏常州朗越公司恒温振荡器（CHA-SA型）；质控菌株由上海市临床检验中心提供，即肺炎克雷伯菌ATCC 70063、大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853、金黄色葡萄球菌ATCC 25923。

1.3    方法    研究方法具体如下。

1.3.1    培养基及主要溶液配制    （1）LB固体培养基。称取蛋白胨10 g、酵母粉5 g、氯化钠10 g和琼脂粉16 g，置于烧杯内，加入超纯水900 mL，搅拌至完全溶解，用浓度为1 mmol/L的NaOH将溶液pH值调节至7.0，随后用超纯水定容至1 L，放入温度为

121 ℃的高压灭菌锅（1.034×105 Pa）内灭菌20 min。取出，冷却至50～60 ℃，倒入无菌平板，凝固后放置在4 ℃冰箱内保存备用。（2）LB液体培养基。称取蛋白胨10 g、酵母粉5 g、氯化钠10 g，置于烧杯内，加入超纯水900 mL，搅拌至完全溶解，用浓度为1 mmol/L的NaOH将溶液pH值调节至7.0，随后用超纯水定容至1 L，分装至试管中，每支试管分装3 mL，放入温度为121℃的高压灭菌锅（1.034×105 Pa）内灭菌20 min。取出，冷却后放置在4℃冰箱内保存备用。（3）浓度为1 mmol/L的NaOH溶液配制。在烧杯中加入NaOH固体40 g，加入超纯水，使其完全溶解，并定容成1 L的NaOH溶液。

1.3.2    菌株活化    取出放置在冰箱中的菌株，置于超净工作台，先接种到3 mL的无菌LB液体培养基中，放置在恒温振荡器内振摇24 h，180 r/min，37 ℃，用接种环蘸取过夜培养的菌液在LB固体培养基上划线，培养16～24 h（37 ℃）。隔夜，挑取培养基上的单菌落，随后接种于LB液体培养基（3 mL）中，振摇24 h，180 r/min，37 ℃，完成后取出备用。

1.3.3    药敏试验    从LB固体培养基上用无菌棉签挑取单菌落，放置在无菌0.9%氯化钠溶液的试管内，倾斜试管，浸湿棉签头，将菌落在液面上轻轻研磨成菌悬液，将棉签头旋转，反复挤压、研磨，随后均匀混匀，与比浊仪对比，待浊度为0.5～0.6 MCF为止。在上述混匀的60 μL菌悬液中加入AST Broth药敏培养液12 mL，反复抽吸使液体混匀，分别在药敏板的小孔内加入100 μL的混合液。设置阴性对照和阳性对照，前者是将AST Broth 100 μL药敏培养液加入不含抗生素的孔内，后者是将含有菌悬液的药敏培养液100 μL加入不含抗生素的孔内。做好标记，37 ℃培养24 h后取出，参考美国临床实验室标准化研究所（clinical and laboratory standards institute，CLSI）标准对结果进行判读[5]。

1.4    观察指标    （1）分析KPN样本来源、科室分布情况。（2）分析KPN耐药性。

2    结果

2.1    KPN样本来源    KPN样本来源主要为尿液，其次为血液、痰液，见表1。

2.2    KPN样本来源科室分布    KPN样本来源科室主要为重症医学科，其次为呼吸内科、神经外科，见表2。

2.3    KPN耐药性分析    782份KPN样本中耐药率最高的为氨苄西林，其次为复方新诺明、头孢唑林，敏感度最高的为阿米卡星，其次为亚胺培南、美罗培南，见表3。

3    讨论

KPN为短粗杆菌，属于肠杆菌科，可生存于人类和动物的肠道内，对外界抵抗力较强，当宿主存在诱发因素或免疫功能低下时，易引起KPN感染[6]。KPN属于条件致病菌，对人体的影响程度仅次于大肠杆菌。KPN致病的毒力因子主要有脂多糖（lipopolysac-charide，LPS）、荚膜多糖（capsularpolysaccharide，CPS）、菌毛（fimbriae）、外膜蛋白A（outer membrane protein A，Omp A）、铁载体及外排泵等。其中荚膜多糖可抑制与逃避宿主巨噬细胞的吞噬，促使树状细胞成熟，对宿主防御的抗菌活性起中和作用；脂多糖的最外层成分是由寡糖重复单元聚合体组成的O抗原，可抵抗补体系统对细菌的杀伤作用，两者是激活天然免疫系统的2种重要毒力因子[7-8]。Omp A是肠杆菌科许多成员外膜中的主要蛋白质之一，属于多功能的Omp，能够参与细胞识别、细胞黏附以及宿主的免疫反应，使KPN的致病能力进一步增强，还能介导真核细胞的侵袭或黏附以及血清抗性，也能保护细菌免受肺集合蛋白的侵害；Omp A能在有细菌情况下对细胞因子的产生形成抑制，亦可使细菌对抗菌肽的活性增加；Omp A能够被血清淀粉样蛋白A和天然免疫系统内的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶所靶向，增加细菌吞噬作用，促使细胞死亡。KPN也是人兽共患致病菌，猪、鸡、羊、马等牲畜和野生动物均可感染，能够经食物链传播给人类，同时是社区感染和院内感染的主要条件致病菌之一，可引起泌尿系统、呼吸系统等多系统感染，诱发肝脓肿、肺炎、尿路感染等疾病，威胁患者生命安全[9-10]。充分了解KPN的临床分布特征和耐药情况，对于临床合理使用抗生素具有积极意义。

本研究结果显示，KPN样本来源主要为尿液，其次为血液、痰液，提示KPN易引起泌尿系统、呼吸系统疾病，需警惕菌血症的出现。本研究中，KPN样本来源科室主要为重症医学科，其次为呼吸内科、神经外科，提示重症医学科易出现KPN感染，可能与重症医学科患者病情严重且复杂，免疫力下降明显，且常接受有创机械通气等侵入性治疗，呼吸道局部黏膜屏障受损，明显增加下呼吸道和全身感染等感染风险，同时抗生素使用频率相对较高且使用时间相应较长有关。临床需重视重症医学科病房管理，及时清洁消毒科室环境、医疗设备，最大程度减少侵入性操作，尽可能减少诱发院内感染因素。合理、正确地使用抗生素是世界范围内公认的防治病原菌传播的有效手段，病原菌对抗生素产生的耐药性是病原菌在抗生素选择性压力下的变异求生能力，而同时使用多种抗生素或长期大剂量使用广谱抗生素，会减少正常菌群数量，增加条件致病菌侵袭性，易引起病原菌耐药性[11-12]。抗生素的不合理与广泛使用，造成KPN对常见抗生素的多重耐药问题日趋严重，成为医院抗生素使用和院内感染控制所面临的严峻问题之一，受到临床各界重视。药敏试验是指在体外测定病原菌对抗生素的敏感度，以便准确有效地指导临床合理用药的微生物学试验。本研究中，KPN耐药率最高的为氨苄西林，其次为复方新诺明、头孢唑林，敏感度最高的为阿米卡星，其次为亚胺培南、美罗培南，提示KPN的耐药机制复杂，包括生物被膜的形成、产生β-内酰胺酶、9yr At par C基因突变、外膜孔蛋白的缺失、抗生素的主动外排等。KPN是耐药质粒的“收藏家”，既会使自身的生存能力提升，还会将耐药质粒传播给其他菌种，进而引起耐药基因的播散，对多种抗生素易产生耐药性，影响治疗效果。临床在使用抗生素治疗前，需实施病原菌检测和药敏试验，根据试验结果合理使用抗生素，避免因经验性用药所致的耐药，提高临床抗感染治疗的有效性。

综上所述，尿液是KPN的主要来源，多来源于重症医学科，KPN对氨苄西林、复方新诺明、头孢唑林耐药率较高，临床治疗时需合理使用。

参考文献

[1] 徐红云，余林，刘畅，等.2010—2016年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌临床分布及其耐药特征[J].中国感染控制杂志，2018，17（8）：688-692.

[2] 吴波，周昕，王芳，等.2015—2016年肺炎克雷伯菌临床分布及耐药变迁性分析[J].成都中医药大学学报，2017，40（3）：94-97.

[3] 韩竖霞，周立勤，倪维.2014—2016年某医院肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性变迁[J].中国消毒学杂志，2018，35（3）：192-195.

[4] 张爱荣，许青霞.2011—2015年商丘市肺炎克雷伯菌临床分布及其耐药性研究[J].中国卫生检验杂志，2017，27（9）：1344-1346，1350.

[5] KAHLMETER G，GISKE C G，KIRN T J，et al. Point-counter-point：differences between the european committee on antimi-crobial susceptibility testing and clinical and laboratory standards institute recommendations for reporting antimicrobial suscepti-bility results[J].J Clin Microbiol，2019，57（9）：e01129-19.

[6] 鄒洁，葛称.2012—2015年昆山市某医院ICU患者肺炎克雷伯菌临床分布及耐药性分析[J].医学临床研究，2018，35（1）：129-131.

[7] 杜伟勤，薛婷，王桂琴.肺炎克雷伯菌感染的临床分布及耐药分析[J].中国药物与临床，2019，19（6）：991-992.

[8] FERGADAKI S，RENIERIS G，MACHAIRAS N，et al.Efficacy of tigecycline alone or in combination for experimental infections by kpc carbapenemase-producing klebsiella pneumoniae[J].Int J Antimicrob Agents，2021，58（3）：106384.

[9] MIKE L A，STARK A J，FORSYTH V S，et al.A systematic analysis of hypermucoviscosity and capsule reveals distinct and overlapping genes that impact klebsiella pneumoniae fitness[J].PLoS Pathogens，2021，17（3）：e1009376.

[10] 侯正利，张毕明，张冉，等.长沙某院分离592株肺炎克雷伯菌的临床特征及耐药分析[J].湖南师范大学学报（医学版），2020，17（2）：18-20.

[11] 谭福燕，庞载元，胡雪飞.1 084株肺炎克雷伯菌的临床分布特点及耐药性变迁[J].重庆医学，2019，48（11）：1948-1951，1955.

[12] 卢峰，卜素，张昌峰，等.肺炎克雷伯菌的临床分布特征及耐药性分析[J].临床肺科杂志，2020，25（9）：1329-1332.

（收稿日期：2023-06-10）