外周血miR-126在呼吸道合胞病毒感染毛细支气管炎进展为支气管哮喘中的意义

王珺 张广超 陈丹 孙晓敏

郑州大学附属儿童医院 河南省儿童医院 郑州儿童医院普内一病区，郑州 450000

毛细支气管炎是一种发生于婴幼儿时期的下呼吸道感染性疾病，引发毛细支气管炎最主要的病原体是呼吸道合胞病毒（RSV）［1］。RSV感染后，患儿容易出现呼吸急促、咳嗽、气喘等症状，反复发作后可能进展为支气管哮喘［2-3］。哮喘主要是由嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、炎性因子等多种细胞参与呼吸道变态反应炎性疾病［4-5］。研究发现，早期RSV反复感染与哮喘发作及恶化之间存在相关性，是非特应性哮喘的一个重要危险因素［6］，因此，早期及时干预治疗有助于改善患儿预后。目前，临床尚未有特异性评估RSV毛细支气管炎发展为支气管哮喘的有效指标。有研究显示，miR-126与多种炎症疾病的发生发展相关，且在支气管哮喘患儿外周血中的表达增加，并随着病情的加重而逐渐升高［7］。因此推测，miR-126是否与RSV毛细支气管炎进展为哮喘的病理过程相关。但目前关于miR-126与RSV毛细支气管炎及支气管哮喘的关系尚未见相关研究结论。本研究旨在探讨miR-126在RSV毛细支气管炎患儿中的表达及对进展为支气管哮喘风险的评估价值。

资料与方法

1.一般及临床资料

收集2018年6月至2019年6月河南省儿童医院收治的RSV毛细支气管炎患儿共126例。纳入标准：（1）符合《诸福棠实用儿科学》［8］中关于毛细支气管炎的相关诊断标准；（2）0～2周岁；（3）首次感染和发病。排除标准：（1）临床资料不完整；（2）伴有其他免疫缺陷疾病；（3）合并有其他病原菌感染。对所有RSV毛细支气管炎患儿进行2年随访，按照《支气管哮喘防治指南》［9］中支气管哮喘的诊断标准，将所随访的RSV毛细支气管炎患儿分为非哮喘组94例和哮喘组32例。本研究经郑州大学附属儿童医院伦理委员会批准，并经患儿家属同意。

2.观察指标

统计患儿一般及临床资料包含：年龄、性别、是否接触过敏原、家族过敏史、父母吸烟史、入院时氧饱和度、呼吸频率等，并参照Gentile等［10］对RSV毛细支气管炎患儿入院时的病情进行评分，评分越高病情越严重。

入组时采集所有患儿指腹血5 ml，其中3 ml抗凝采集后送检验科采用全自动细胞生化分析仪进行血常规分析，统计其中的白细胞（WBC）、中性粒细胞、淋巴细胞计数及比例；另2 ml血液样品置于非抗凝管中静止2 h，3 000 r/min离心30 min（离心半径13.5 cm），取上清，采用放射免疫法检测血清中C反应蛋白（CRP）的含量，采用RT-PCR法检测miR-126的相对表达量。

3.统计学分析

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析。计数资料采用比例（%）表示，组间比较行χ2检验；计量资料符合正态分布，采用均数±标准差（）表示，行独立样本t检验；受试者工作特征曲线（ROC）分析miR-126对RSV毛细支气管炎患儿的诊断以及预测其发展为支气管哮喘的作用价值；多因素logistic回归分析RSV毛细支气管炎患儿进展为支气管哮喘的危险因素。P＜0.05表示差异有统计学意义。

结果

1.外周血miR-126与RSV毛细支气管炎发展为哮喘的关系

对126例RSV毛细支气管炎患儿进行随访，其中32例患儿发展成为支气管哮喘，约占总患儿的25.4%。非哮喘组与哮喘组一般及临床资料比较如表1所示，从表中可以看出，两组在接触过敏原、临床评分和miR-126指标上差异均有统计学意义（均P＜0.05），且哮喘组miR-126的水平显著高于非哮喘组（P＜0.001）。

表1 是否进展为哮喘的RSV毛细支气管炎患儿的一般及临床资料的比较

2.外周血miR-126的ROC分析

以是否进展为支气管哮喘为因变量，以miR-126水平为自变量进行ROC分析，结果显示，外周血miR-126预测RSV毛细支气管炎进展为哮喘的曲线下面积为0.691，灵敏度为88.30%，特异度为59.38%，最佳截断值为7.78，见图1。

图1 miR-126预测126例RSV毛细支气管炎患儿进展为哮喘的ROC分析

3.RSV毛细支气管炎发展为哮喘的logistic回归分析

为排除混杂因素的干扰，对非哮喘组与哮喘组间P＜0.1的指标（年龄、接触过敏原、临床评分和miR-126）进行多因素logistic回归分析。其中，定义年龄＜6岁、未接触过敏原、临床评分（1～2分）、miR-126 ＜7.78为0，年龄≥6岁、接触过敏原、临床评分（3～4分）、miR-126 ≥7.78为1。表2结果显示，临床评分和miR-126水平较高是RSV毛细支气管炎发展为哮喘的独立危险因素（均P＜0.05）。

表2 126例RSV毛细支气管炎患儿进展为哮喘危险因素的logistic回归分析

讨论

毛细支气管炎多是由病毒感染引起的急性下呼吸道感染性疾病，RSV是其主要病原体［11］。RSV毛细支气管炎是婴幼儿中最常见的一种下呼吸道感染性疾病，部分患儿未经及时干预有进展为支气管哮喘的风险。Jartti等［12］研究发现RSV是支气管哮喘发作的重要诱因，抗RSV单克隆抗体可降低严重性RSV感染疾病及支气管哮喘发生的可能。有研究对RSV毛细支气管炎婴幼儿随访5年后，发现48%的患儿诊断为支气管哮喘，提示婴幼儿阶段RSV毛细支气管炎是儿童支气管哮喘发生的重要危险因素，并且具有较高的哮喘发病率［13］。但目前RSV毛细支气管炎进展为支气管哮喘的分子调控机制尚不明确，多项研究认为RSV毛细支气管炎与哮喘的病理机制都涉及了炎性反应和变态免疫调控，且具有多个相同指标的改变［14-16］，推测炎症相关指标可能在这一过程中发挥重要作用。

miR-126是一个高度保守的miRNA，多项研究报道miR-126参与多种炎症和免疫应答反应，其在肠炎、肺炎支原体肺炎等感染性疾病患者中的表达均显著增加［17-18］。有研究显示，在哮喘大鼠及小鼠模型中，miR-126的表达均显著高于对照组，且通过调节白细胞介素（IL）-6及Th2等细胞炎性因子参与免疫应答反应［19-20］。此外，有文献报道，在支气管哮喘患儿中，miR-126表达增加，并通过调节T淋巴细胞亚群型及Th2细胞因子水平参与支气管哮喘的进展［21］。邬超等［22］采用荧光定量PCR法检测了哮喘患者的miR-126水平，发现随着患者哮喘程度越严重，血浆中miR-126的表达水平越高。吴挺实［7］也研究发现外周血miR-126水平可能是评估支气管哮喘患儿严重程度的重要参考指标。但目前关于miR-126与毛细支气管炎及进展为哮喘的相关性尚未见相关研究。本研究结果显示，毛细支气管炎进展为哮喘组患儿的miR-126水平明显高于非哮喘组，提示该指标可能对RSV毛细支气管炎进展为支气管哮喘有一定的预测作用，与现有研究结论一致。多因素logistic回归分析结果显示，miR-126是RSV毛细支气管炎进展为支气管哮喘的一个独立危险因素，且预测灵敏度达88.30%。推测miR-126由于参与炎症和免疫反应的发生发展，因此介导RSV感染后向支气管哮喘进展的病理过程，但其深层次机制仍需进一步研究才能明确。

综上所述，本研究认为，miR-126水平升高可能是RSV毛细支气管炎进展为支气管哮喘的危险因素，可作为临床评估RSV毛细支气管炎患儿预后的参考指标。