Neuroligin2及GAP-43变化在先天性巨结肠症并发小肠结肠炎中的临床意义

施玉成 张旭营 秦道峰 王向华

1周口市中心医院检验科，周口 466000；2周口市中心医院儿科，周口 466000

先天性巨结肠症为临床常见的小儿先天性消化道疾病，多发于新生儿出生后几个月内，与肠神经系统发育缺陷密切相关［1］。临床对于小儿先天性巨结肠症主要通过巨结肠切除手术进行治疗，可有效提升患儿术后生存率及生活质量，但部分患儿可并发小肠结肠炎（HAEC），影响后续治疗及预后，对患儿生命安全造成严重威胁［2-3］。部分与肠神经系统有关的蛋白在先天性巨结肠症病变肠组织中异常表达，其中Neuroligin2为一种突触后跨膜蛋白，与突触的形成、发育及功能循环均相关，而生长相关蛋白43（GAP-43）为突触前末端蛋白，与神经系统发育、突触生长关系密切［4-7］。本研究分析Neuroligin2、GAP-43与小儿先天性巨结肠症术后并发HAEC的关系及联合预测价值。

资料与方法

1.一般资料

选取2020年7月至2022年7月于周口市中心医院接受巨结肠切除手术的79例先天性巨结肠症患儿为研究组，另选取2020年7月至2022年7月于周口市中心医院健康体检儿童79例作为对照组。研究组男43例、女36例，月龄6～14（8.92±0.84）个月，体质量指数（BMI）14.1～20.3（16.45±1.38）kg/m2；对照组男45例、女34例，月龄5～14（8.84±0.88）个月，BMI 13.9～20.1（16.27±1.46）kg/m2。（1）纳入标准：均经钡剂灌肠、临床症状诊断、查体及术后病理证实为小儿先天性巨结肠症；家属知晓本研究并签订同意书。（2）排除标准：合并消化系统肿瘤及其他消化系统疾病；合并肝、肾等重大脏器功能障碍者；合并全身性感染、循环系统疾病者；入组前已接受相关治疗者。两组基线资料比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），具有可比性。

本研究经周口市中心医院伦理委员会审批通过（201909021）。

2.方法

（1）HAEC评估：术后随访6个月，通过临床病史、体格检查、影像学检查（腹部立位X线片）、食盐水检查、白细胞数目、有无核转移等评估术后是否并发HAEC。（2）血清蛋白检测：采集所有患者入院后次日晨起空腹状态下外周静脉血5 ml，37 ℃条件下经离心半径8 cm、3 500 r/min离心10 min后，分离血清于-20 ℃冰箱保存待测。采用酶联免疫吸附法测定血清GAP-43、Neuroligin2相对表达量，仪器选用HED-SY96S型酶标仪，试剂盒购于武汉生源科技公司。所有操作均严格按照仪器及试剂盒相关说明进行。

3.观察指标

（1）对比两组血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量。（2）对比HAEC组和非HAEC组血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量。（3）分析血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量与并发HACE的相关性。（4）分析血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量对先天性巨结肠症患儿术后并发HAEC的预测价值。

4.统计学方法

采用SPSS 23.0软件进行相关数据处理分析，计数资料采用χ2检验，符合正态分布的计量资料采用（）表示，两组间比较采用独立样本t检验，行Spearman相关性分析，logistic回归方程分析相关影响因素，预测价值分析采用受试者工作特征曲线（ROC），默认双侧检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

1.两组血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量比较（表1）

表1 先天性巨结肠症患儿及健康体检儿童血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量比较（）

表1 先天性巨结肠症患儿及健康体检儿童血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量比较（）

注：GAP-43为生长相关蛋白43

GAP-43 1.52±0.31 2.47±0.39 16.949＜0.001组别研究组对照组t值P值例数79 79 Neuroligin2 0.35±0.03 0.79±0.07 51.351＜0.001

研究组血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

2.HAEC组和非HAEC组血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量比较（表2）

表2 先天性巨结肠症患儿血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量比较（）

表2 先天性巨结肠症患儿血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量比较（）

注：HAEC为小肠结肠炎，GAP-43为生长相关蛋白43

组别HAEC组非HAEC组t值P值Neuroligin2 0.12±0.03 0.44±0.05 28.587＜0.001例数23 56 GAP-43 0.74±0.06 1.84±0.12 41.756＜0.001

HAEC组血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量均低于非HAEC组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

3.相关性分析

相关性分析结果显示，血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量与并发HACE均呈负相关（并发HAEC赋值：未并发=1，并发=2；r1=-0.571，P1＜0.001；r2=-0.679，P2＜0.001）。

4.偏回归分析（表3）

表3 79例先天性巨结肠症患儿术后并发HAEC的危险因素的偏回归分析

以先天性巨结肠症患儿术后是否并发HAEC为因变量，将患儿血清Neuroligin2、GAP-43表达水平作为自变量，对自变量进行赋值（以79例患儿平均值为界：≤平均值=1，＞平均值=2）；logistic回归分析显示，血清Neuroligin2相对表达量（＞0.35）、GAP-43相对表达量（＞1.52）是先天性巨结肠症患儿术后并发HAEC的保护因素。

5.ROC分析（表4）

表4 79例先天性巨结肠症患儿术后并发HAEC的ROC分析

以术后并发HAEC的先天性巨结肠症患儿为阳性样本，以术后未并发HAEC的先天性巨结肠症患儿为阴性样本绘制ROC。结果显示，血清Neuroligin2、GAP-43联合预测先天性巨结肠症患儿术后并发HAEC的曲线下面积（AUC）为0.802，最佳预测灵敏度、特异度分别为86.96%、73.21%。

讨论

先天性巨结肠症为肠神经系统发育畸形疾病，新生儿发病率约为0.05%，巨结肠切除手术为先天性巨结肠症的主要治疗方案，但患儿术后存在HAEC发生风险，对后续治疗及预后恢复均造成严重影响［8-9］。因此，积极探讨先天性巨结肠症患儿术后HAEC评估诊断方案具有重大意义。

中枢神经系统中突触前膜与突触后膜间的联系对神经可塑性机制的调节具有关键作用，可促进精神障碍性疾病、感染性疾病的发生及发展等［10-11］。本研究结果显示，HAEC组与非HAEC血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量比较存在显著差异，据此可推测Neuroligin2、GAP-43与先天性巨结肠症及HAEC的发生密切相关。Neuroligin2为Neuroligin超家族中的一个亚型，多表达于抑制性突触后膜，其缺失或突变均可影响ENS中突触形成及突触信息传递，从而影响先天性巨结肠症狭窄段及移行段的蠕动功能［12-13］。许耀威等［14］通过免疫组织化学染色法观察先天性巨结肠症患者各肠段Neuroligin2表达情况，发现正常节段的成熟神经节细胞呈强阳性表达，在移行段的肌间存在不规则形神经节细胞中呈弱阳性表达，而狭窄段无神经节细胞，呈阴性表达。先天性巨结肠症并发HAEC与肠神经系统密切相关，而Neuroligin2基因缺失或突变均可影响肠神经系统突触的形成及信息传递，从而影响HAEC患儿病变肠段蠕动功能［15-16］。

本研究进一步行相关性分析发现，先天性巨结肠症患儿血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量与并发HACE均呈负相关，这提示临床可通过其表达情况初步评估HACE。GAP-43为一种神经营养因子，与神经突触生长、神经再生、发育均存在紧密联系［17-18］。GAP-43在肠神经系统中表达下降后，传递的肠神经系统神经递质减少，可导致兴奋性神经增强、抑制性神经减弱，加强肠管收缩，促进HACE发生。有研究显示，肠道蠕动依赖平滑肌细胞、神经细胞连接，而突触为其连接结构，肠神经系统中存在大量突触。因此，当GAP-43异常表达时，肠道功能发生障碍，进而诱发HACE［19-20］。冉茂花等［21］发现，通过上调GAP-43表达，可激活AKT信号途径，修复肠道突触，而低表达可减少抑制性神经递质，从而影响神经与肠壁连接，导致HACE的发生。基于上述研究结果，本研究初次采用ROC分析血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量对先天性巨结肠症患儿并发HACE的预测价值，发现二者联合预测AUC为0.802，具有较高预测价值。

综上所述，先天性巨结肠症患儿血清Neuroligin2、GAP-43相对表达量与并发HACE密切相关，临床可通过其早期预测HACE，以给予相应措施。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明施玉成：酝酿和设计试验，对文章的知识性内容作批评性审阅，指导；张旭营：实施研究，起草文章，支持性贡献；秦道峰、王向华：支持性贡献