银杏叶渣中多糖和黄酮的综合提取及其抗氧化活性研究

王敬赫，胡庆丰，刘 婕，程耀波，严雪溶，王 健，惠爱玲，张文成

（1.合肥工业大学食品与生物工程学院，安徽 合肥 230601；2.邳州恒翔生物制品有限公司，江苏 邳州 221332）

银杏叶中含有黄酮、多糖、内酯、有机酸等多种活性物质，以银杏叶提取物（GBE）为主要成分的银杏叶片、“金纳多”注射液、“悦康通”注射液等广泛用于心脑血管疾病的临床治疗[1-2]。GBE 制备过程中产生大量银杏叶渣，约占银杏叶原料的60%～70%。目前，大多数银杏叶渣或丢弃，或焚烧，或烘干晒干、粉碎处理作为饲料、肥料（或添加剂）低价出售[3]，这在一定程度上造成环境污染和资源浪费。

银杏叶渣除含有粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、叶绿素等物质外，也残存多糖、黄酮、内酯等活性成分。对于银杏叶渣的二次利用，多以微生物菌种发酵提高其蛋白质、纤维素等利用率，其发酵产物可作为蛋白质饲料或微生物菌剂[4-5]。高树峰等[6]以地衣芽孢杆菌-纳豆芽孢杆菌或产朊假丝酵母-黑曲霉为菌种对银杏叶渣进行双菌株混合发酵，发酵产物在肉仔鸡上具有较好的抗氧化作用。ZHOU 等[7]以银杏叶渣为底物，利用热带假丝酵母和米曲霉进行固态发酵，发酵后基质中银杏酸含量由14.8 mg∕g 降至1.5 mg∕g。此外，也有采用溶剂提取法从废弃叶渣中获取活性成分的报道，如邵金华等[3]通过超声波-微波辅助法获得提取率为5.07%的银杏多糖；唐仕荣等[8]以纯水回流提取银杏叶渣中多糖，浓缩去蛋白质后，银杏叶渣多糖纯度可达51.42%；高坤等[9]用银杏叶下脚料制备叶绿素铜钠盐；吴巧攀等[10]采用水提醇沉法从银杏叶渣提取多糖；李明飞[11]采用有机溶剂提取法从银杏叶渣获取抗氧化物质；闫精杨等[12]以水煎煮后的银杏叶废渣为原料，分别以石油醚、95%乙醇得到聚戊烯醇和总黄酮提取物；简悦[13]采用高速匀质-超声辅助提取法从银杏叶渣中提取双黄酮。以上研究针对银杏叶渣中活性物质提取和利用进行了探索，有利于实现活性物质利用，可在一定程度避免资源浪费，但仍存在活性物质提取效率不佳、利用率以及经济效益低等问题。

银杏多糖、黄酮均具有抗氧化等活性[14-16]，可作为功能性食品以及医药用品原料，常规提取得到的银杏黄酮仍多以黄酮糖苷形式存在[17]，其生物利用率低，在动物体内的吸收远不及槲皮素、山奈酚、异鼠李素等游离苷元[18]。且有研究表明，游离苷元的抗氧化活性高于黄酮糖苷[19]，当前多采用生物酶将糖苷转化为苷元的方法实现苷元含量的提升与利用[20]。结合生物酶转化的方法开发一种综合提取银杏叶渣中多糖、黄酮活性成分的工艺，尤其是获得富含游离苷元的高效价黄酮提取工艺，可以提升银杏叶渣的利用率，改善当前存在的环境和资源问题。为此，采用复合酶辅助醇水溶剂提取法提取银杏叶渣多糖和总黄酮，并研究其抗氧化活性，旨在为银杏叶废弃物的进一步高效利用提供参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

银杏叶渣来自邳州恒翔生物制品有限公司，为银杏叶提取内酯和黄酮后的残渣，经干燥，适当粉碎至约5 mm大小，备用。

1.2 试验试剂

芦丁、水仙苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素标准品（上海源叶生物科技有限公司）；葡萄糖标准品（国药化学试剂公司）；95 %乙醇（江苏强盛功能化学公司）；无水乙醇（国药化学试剂公司）；5%NaNO2（国药化学试剂公司）；10%NaOH（国药化学试剂公司）；10% Al（NO3）3（国药化学试剂公司）；硫酸（国药化学试剂公司）；果胶酶（国药化学试剂公司）；纤维素酶（上海源叶生物科技有限公司）；β-葡萄糖苷酶（上海源叶生物科技有限公司）；一水合柠檬酸（国药化学试剂公司）；十二水合磷酸氢二钠（国药化学试剂公司）；抗坏血酸（国药化学试剂公司）；DPPH（国药化学试剂公司）；ABTS 二铵盐（国药化学试剂公司）；过二硫酸钾（国药化学试剂公司）；七水合硫酸亚铁（国药化学试剂公司）；水杨酸（国药化学试剂公司）；30%过氧化氢（国药化学试剂公司）。

1.3 试验仪器

F-020SD 型超声清洗机（福洋科技集团有限公司）；SHZ-DⅢ型循环水真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；W205B 型数控恒温水浴锅（申胜生物技术有限公司）；UV-1800PC 型紫外可见分光光度计（翱义仪器有限公司）；TDZ5-WS 型低速离心机（湘仪仪器有限公司）；1260 型高效液相色谱仪（Agilent Technologies）；Eclipse Plus C18（Agilent Technologies）；PHS-3C 型pH 计（上海仪电科学仪器股份有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 银杏叶渣多糖提取 以纯水为溶剂、85°C左右加热3 h[18，21-22]，对叶渣与水的不同料液比（1∶7、1∶8、1∶9、1∶10）进行优化探究。待提取结束，趁热抽滤得到残渣（待下一步提取银杏叶渣总黄酮或黄酮苷元）和水提液。水提液减压浓缩至1∕3，加95%乙醇，调整乙醇含量至75%，过夜醇沉；收集不溶物，冷冻干燥，即得粗多糖，称质量，计算粗多糖得率；以葡萄糖作为对照，采用苯酚-硫酸法测多糖含量，并计算粗多糖提取率。

1.4.2 银杏叶渣总黄酮提取

1.4.2.1 醇水溶剂法提取总黄酮 醇水热提法是获取银杏总黄酮的通用方法，普遍认为乙醇含量对总黄酮提取效果至关重要。参考有关研究[23]，将料液比设为1∶8，于80 ℃加热提取4 h，研究不同乙醇含量（50%、60%、70%、80%、90%）对叶渣中总黄酮得率的影响。提取结束，趁热过滤叶渣得醇水粗提液，将粗提液减压浓缩、冷冻干燥得到总黄酮，称质量，计算得率；以芦丁为对照，Al（NO3）3显色法测总黄酮含量，高效液相色谱法（HPLC）测槲皮素、山奈酚及异鼠李素3 种游离黄酮苷元含量，并以此计算银杏叶渣总黄酮和游离苷元的提取率。

1.4.2.2 酶辅助醇水溶剂法提取总黄酮 酶辅助溶剂提取法是获取黄酮苷元的常用方法[21，24]。以上述醇水热提法确立的较优乙醇含量为参照，分别采用单一β-葡萄糖苷酶及复合酶（β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、果胶酶）辅助醇水热浸提法获取银杏总黄酮，以HPLC 法检测的游离黄酮苷元含量为考查指标，确立酶辅助醇水提取的较优条件。

单一酶：将β-葡萄糖苷酶（0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 g）溶于50.0 mL 柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液（pH 值为5），加入10 g银杏叶渣中并于50 ℃酶法提取2.5 h；高温灭酶，将酶解液减压浓缩并调整醇含量至80%，料液比1∶8，于80 ℃加热提取4 h，减压浓缩至干，检测黄酮苷元含量。

复合酶：将β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、果胶酶2种或3 种酶组合，溶于50.0 mL 柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液（pH 值为5），其余操作与单一酶提取银杏叶渣总黄酮方法相同。

1.4.3 银杏多糖含量测定 标准曲线绘制：配制0.8 mg∕mL 葡萄糖母液，取0.2、0.5、1.0、1.5、2.5 mL母液分别置于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度；取上述稀释液1.0 mL 置于比色管中，加5%重蒸苯酚溶液1.0 mL，摇匀后迅速加入浓硫酸5.0 mL，加水定容至25.0 mL，静置30 min，于490 nm 波长处测吸光度。以葡萄糖标准品质量浓度X为横坐标，吸光度Y为纵坐标，建立线性回归方程。

样品测定：取5 mg 粗多糖样品，加水定容至25.0 mL；取样品稀释液1.0 mL 置于比色管，其余操作同标准曲线制作。以测得的吸光度计算多糖质量浓度，并折算叶渣中多糖提取率。

1.4.4 银杏叶渣总黄酮及其苷元含量测定

1.4.4.1 银杏叶渣总黄酮含量测定 标准曲线绘制：配制2 mg∕mL 芦丁母液，取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL 分别置于10.0 mL 比色管中，补加95%乙醇至10.0 mL；取2.0 mL样品溶液，随后加入5%NaNO2水溶液0.3 mL，摇匀静置6 min，再加10% Al（NO3）3水溶液0.3 mL，摇匀静置6 min，最后加10% NaOH水溶液3.0 mL，摇匀静置15 min，于510 nm 波长处测吸光度。以芦丁质量浓度X为横坐标，吸光度Y为纵坐标，建立线性回归方程。

样品测定：取20 mg粗黄酮样品，加95%乙醇定容至10.0 mL；取2.0 mL 样品溶液，其后NaNO2、Al（NO3）3、NaOH 等加入量与操作同标准曲线制作。以测得的吸光度数值计算芦丁质量浓度，并折算叶渣中总黄酮提取率。

1.4.4.2 游离黄酮苷元含量测定 色谱条件：Eclipse Plus C18（4.6 mm×250 mm，5 µm），柱温35 ℃；甲醇（A）-0.4%磷酸水（B）二元流动相（0～15 min，35%～40% A；15～30 min，40%～45% A；45～70 min，50%～55%A），0.7 mL∕min；检测波长360 nm。

取芦丁、水仙苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素对照品少许，混标20µL 注入HPLC 检测；在上述色谱条件下，银杏黄酮提取物中主要的黄酮苷（芦丁、水仙苷）及其典型的3种苷元（槲皮素、山奈酚、异鼠李素）基线分离或完全分离。

槲皮素标准曲线绘制：首先配制80µg∕mL 槲皮素储备液，精密取储备液0.25、1.0、3.0、6.0、10.0 mL，补加70%甲醇定容至10.0 mL；过滤后取20µL注入HPLC，按上述色谱条件进行检测。以峰面积A为纵坐标，槲皮素质量浓度C为横坐标，建立线性回归方程。

样品测定：取银杏叶渣黄酮粗提物样品0.8 mg，加70%甲醇稀释到10.0 mL；取20µL注入HPLC，从色谱图上得出槲皮素、山奈酚和异鼠李素的峰面积，依据槲皮素校正因子法[25]折算银杏叶渣中黄酮苷元（以槲皮素、山奈素、异鼠李素三者含量之和）提取率。

1.4.5 银杏多糖、总黄酮抗氧化活性测定

1.4.5.1 DPPH 自由基清除能力测定 参考张康逸等[26]的方法，精密移取0.018 mmol∕L DPPH-乙醇溶液2.0 mL，分别加入至含1.0 mL 不同梯度质量浓度的抗坏血酸、多糖以及总黄酮样品溶液的比色管中，避光反应30 min，作为试验组；另精密移取无水乙醇2.0 mL，分别加入至含有1.0 mL 不同梯度质量浓度的抗坏血酸、多糖以及总黄酮样品溶液的比色管中，作为对照组；精密移取0.018 mmol∕L DPPH-乙醇溶液2.0 mL，加入至含1.0 mL 对应样品溶液的溶剂的比色管中，作为空白组。各组均在517 nm 波长处测定吸光度，每组进行3次平行试验。

DPPH自由基清除率=[1-（A1-A0）∕A]×100%

其中，A1为试验组的吸光度，A0为对照组的吸光度，A为空白组的吸光度。

1.4.5.2 ABTS+自由基清除能力测定 参考程鹏等[27]的方法，将7 mmol∕L ABTS 二铵盐与140 mmol∕L的过硫酸钾溶液按比例混合，室温下避光反应12 h，用无水乙醇稀释30～50 倍，保证所配ABTS 工作液在734 nm波长下吸光度范围在0.68～0.72。

精密移取1.0 mL 不同梯度质量浓度的抗坏血酸、多糖以及总黄酮样品溶液至比色管中，分别加入ABTS 工作液3.0 mL，混合均匀，避光反应6 min，作为试验组；精密移取1.0 mL 不同梯度质量浓度的抗坏血酸、多糖以及总黄酮样品溶液至比色管中，加无水乙醇3.0 mL，混合均匀，作为对照组；精密移取1.0 mL 对应样品溶液的溶剂至比色管中，分别加入ABTS 工作液3.0 mL，混合均匀，作为空白组。各组均在734 nm 波长处测定吸光度，每组进行3 次平行试验。

ABTS+自由基清除率=[1-（A1-A0）∕A]×100%

其中，A1为试验组的吸光度，A0为对照组的吸光度，A为空白组的吸光度。

1.4.5.3 羟自由基清除能力测定 参考赵丛丛等[28]的方法，在比色管中依次加入9 mmol 硫酸亚铁溶液、9 mmol 水杨酸-乙醇溶液各1.0 mL，精密移取1.0 mL 不同梯度质量浓度的抗坏血酸、多糖以及总黄酮样品溶液至比色管，试验组加入8.8 mmol 过氧化氢1.0 mL，对照组加入蒸馏水1.0 mL 代替过氧化氢，分别用蒸馏水补足至15.0 mL；在比色管中依次加入9 mmol 硫酸亚铁溶液、9 mmol 水杨酸-乙醇溶液各1.0 mL，加入8.8 mmol过氧化氢1.0 mL，蒸馏水补至15.0 mL，作为空白组。各组均在510 nm 波长处测定吸光度，每组进行3次平行试验。

羟自自由基清除率=[1-（A1-A0）∕A]×100%

其中，A1为试验组的吸光度，A0为对照组的吸光度，A为空白组的吸光度。

2 结果与分析

2.1 银杏多糖、总黄酮及其苷元含量分析

依据1.4.2、1.4.3 和1.4.4 所述检测方法及处理条件，多糖、总黄酮及黄酮苷元含量测定的线性回归方程如表1所示，粗多糖、总黄酮和黄酮苷元含量测定方法在一定质量浓度范围内线性良好（R2≥0.992），证明本研究中测定粗多糖、总黄酮和黄酮苷元含量的方法可靠。

表1 银杏多糖、总黄酮及苷元含量测定的线性回归方程Tab.1 Linear regression equation for the content determination of ginkgo polysaccharide，total flavonoids and aglycones

2.2 银杏叶渣中多糖的提取

对于银杏叶渣中多糖提取，借鉴银杏叶多糖提取的较优工艺进行微调，即以纯水为溶剂，85 ℃提取3 h，仅就料液比对多糖得率、提取率的影响进行考察，结果列于图1 中。由图1 可知，随着料液比由1∶7逐渐增至1∶9，多糖得率和提取率呈现逐步上升趋势。当料液比1∶9 时，其多糖得率和提取率分别达到17.90%和3.03%，相比料液比1∶7 时分别增加26.1%和73.1%；若继续增大提取水量至料液比1∶10时，则粗多糖得率下降至14.0%，这时多糖提取率也有小幅度降低。因此，将银杏叶渣与纯水料液比控制在1∶9，在85 ℃加热提取3 h，其银杏叶渣中多糖提取率可达3.03%。

图1 料液比对银杏叶渣中粗多糖提取效果的影响Fig.1 Effect of solid-liquid ratio on extraction effect of crude polysaccharide from Ginkgo biloba residue

2.3 银杏叶渣中总黄酮和黄酮苷元的提取

2.3.1 银杏叶渣中总黄酮的提取 不同含量乙醇对银杏叶渣中总黄酮提取效果的影响列于图2 中。由图2 可知，当乙醇含量在50%～80%依次增加时，其总黄酮得率随之升高，相应的提取率也增加。若继续增大乙醇含量至90%，此时总黄酮得率较乙醇含量为80%时下降，而提取率也随之降低。结果表明，当银杏叶渣与80%乙醇在料液比1∶8、80 ℃加热提取4 h，其银杏叶渣总黄酮提取率达最大为0.25‰。

图2 乙醇含量对银杏叶渣中总黄酮提取效果的影响Fig.2 Effect of ethanol concentration on extraction ecfect of total flavonoids from Ginkgo biloba residue

2.3.2 银杏叶渣中黄酮苷元的提取 上述80%乙醇热提法所得的银杏总黄酮提取物，仍含有较多以芦丁、水仙苷为代表的黄酮苷（图3），经复合酶辅助提取后，黄酮苷元含量增加（图4），以槲皮素、山奈酚、异鼠李素3 类苷元之和计算的苷元提取率为0.46‰（表2）。

图3 HPLC法测定溶剂提取法所得银杏叶渣中总黄酮Fig.3 Determination of total flavonoids in Ginkgo biloba residue obtained by solvent extraction method by HPLC

图4 HPLC法测定酶辅助溶剂提取法所得银杏叶渣中总黄酮Fig.4 Determination of total flavonoids from Ginkgo biloba residue obtained by enzyme-assisted solvent extraction by HPLC

表2 不同提取方法的总黄酮及其黄酮苷元含量Tab.2 Contents of total flavonoids and flavonoid aglycones obtained by different extraction methods

当加入1.0%～3.0%β-葡萄糖苷酶时，其黄酮苷元含量仅有少量增加（表2）；当以β-葡萄糖苷酶中复配纤维素酶，其对苷元增幅甚微。因此，考虑将果胶酶、纤维素酶与β-葡萄糖苷酶三者复配使用，随着果胶酶的加入，苷元提取率有相对明显的增长，当三者以8.0%添加时，其总苷元提取率达到0.93‰（表2），这一结果相较溶剂提取法提高102.2%，与此同时，银杏叶渣总黄酮含量也提高近1.3倍。

2.4 多糖、总黄酮抗氧化活性测定

2.4.1 DPPH 自由基清除能力测定结果 图5 为银杏叶渣多糖、总黄酮对DPPH 自由基清除结果，银杏叶渣多糖、溶剂提取法所得银杏叶渣总黄酮以及复合酶辅助醇水溶剂提取法所得银杏叶渣总黄酮对DPPH 自由基清除能力呈现剂量依赖性，但三者的变化趋势略有不同。当银杏叶渣多糖质量浓度在2.0～3.0 mg∕mL 时，其清除率基本维持在67%左右，此质量浓度范围内2种总黄酮的清除率却呈现稳步增加的趋势，溶剂提取法所得银杏叶渣总黄酮清除率由78.57%增至84.53%，增加了5.96 个百分点，而质量浓度在2.0～3.0 mg∕mL时，复合酶辅助醇水溶剂提取法所得银杏叶渣总黄酮的清除率则增加10.36个百分点。另外，在所测试的范围内，银杏叶渣多糖及2 种银杏叶渣总黄酮对DPPH 自由基清除能力次序基本一致：复合酶辅助醇水溶剂提取法所得银杏叶渣总黄酮＞溶剂提取银杏叶渣总黄酮＞银杏叶渣多糖，IC50值分别为0.63、0.88、0.99 mg∕mL。它们三者均不及对照物抗坏血酸（IC50=0.14 mg∕mL）。

图5 银杏多糖、总黄酮对DPPH自由基清除能力的影响Fig.5 Effects of Ginkgo biloba polysaccharides and total flavonoids on DPPH free radical scavenging ability

2.4.2 ABTS+自由基清除能力测定结果 银杏叶渣多糖、总黄酮对ABTS+自由基清除试验结果列于图6中，3 种测试物在0.2～3.0 mg∕mL 时，其清除ABTS+自由基能力与质量浓度呈现正相关；三者的清除曲线几乎一致，其清除能力次序与DPPH 自由基类似：复合酶辅助醇水溶剂提取法提取银杏叶渣总黄酮＞溶剂提取银杏叶渣总黄酮＞银杏叶渣多糖。当测试物质量浓度达到3.0 mg∕mL 时，三者的清除率分别达到68.82%、63.38%、52.56%，ABTS+自由基清除率均低于同浓度下DPPH 自由基清除率。另外，抗坏血酸、复合酶辅助醇水溶剂提取法提取银杏叶渣总黄酮、溶剂提取银杏叶渣总黄酮、银杏叶渣多糖的IC50分别为0.14、1.08、1.44、2.14 mg∕mL。由此推知，银杏叶渣多糖、总黄酮对ABTS+自由基具有中等清除能力，而对DPPH具有较强的清除能力。

图6 银杏多糖、总黄酮对ABTS+自由基清除能力的影响Fig.6 Effects of Ginkgo biloba polysaccharides and total flavonoids on ABTS+free radical scavenging ability

2.4.3 羟自由基清除能力测定结果 在机体氧化过程中，羟自由基与抗氧化活性关系密切[29-30]，银杏叶渣多糖、总黄酮对羟自由基的清除试验结果（图7）表明，当测试物质量浓度在0.2～1.0 mg∕mL 时，其羟自由基清除能力随质量浓度增加呈现快速增长趋势，银杏叶渣多糖清除率增至50%～60%，银杏叶渣总黄酮清除率普遍增至80%～90%；若继续增加测试物质量浓度至3.0 mg∕mL，其清除率较1.0 mg∕mL时增长不超过5%。对比3 种测试物对羟自由基清除能力，以复合酶辅助醇水溶剂提取法提取银杏叶渣总黄酮最优（IC50=0.35 mg∕mL），溶剂提取银杏叶渣总黄酮居中（IC50=0.42 mg∕mL），而银杏叶渣多糖清除能力最弱（IC50=1.33 mg∕mL），这一结果与DPPH 自由基、ABTS+自由基均类似。但是，银杏叶渣多糖与复合酶辅助醇水溶剂提取法提取银杏叶渣总黄酮对羟自由基清除率差值高达33.67%，而它们二者对DPPH 自由基、ABTS+自由基清除率差值均不高于20%，这说明与银杏叶渣多糖相比，银杏叶渣总黄酮对羟自由基清除具有更明显的优势。

图7 银杏多糖、总黄酮对羟自由基清除能力的影响Fig.7 Effects of Ginkgo biloba polysaccharides and total flavonoids on hydroxyl radical scavenging ability

3 结论与讨论

对于银杏叶渣多糖、总黄酮提取的研究报道较多，徐红欣等[31]、何康[32]研究中通过调整提取时间、提取次数、提取温度以及料液比等影响因素，对多糖、总黄酮等的提取进行工艺优化。本研究设计了水提醇沉获取多糖、复合酶辅助醇水溶剂提取法提取银杏叶渣总黄酮的分步提取方案。考虑银杏叶渣来源的特定性，仅就多糖提取时料液比、总黄酮提取时醇水比例这2 个关键因素进行深入研究，初步确立了从银杏叶渣中提取多糖和总黄酮的适宜条件；在此基础上，采取生物酶辅助醇水提取法以期提高总黄酮中游离苷元含量，最终提升总黄酮抗氧化效能。然而，单用β-葡萄糖苷酶提取黄酮的效果并不理想，这可能与银杏叶渣中黄酮苷及其相对组成有联系，陈春[33]研究提示，复合酶较单一酶辅助溶剂提取能够产生协同作用，其提取效果更优。据此，本研究选择将β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、果胶酶以1∶1∶2 复配加入提取多糖后的银杏叶渣中，当复合酶添加量8.0%，在pH 值为5、50 ℃下酶解2.5 h，酶灭活、浓缩提取液后，再按料液比1∶8 比例加入80%乙醇，于80 ℃提取4 h，其总黄酮和游离苷元提取率分别达0.59‰和0.93‰，与仅用80%乙醇提取相比，其总黄酮及其游离苷元提取率分别提高126.9%和102.2%。以上结果表明，本研究通过对水提醇沉、复合酶辅助醇水溶剂提取法的改进实现了对银杏叶渣中多糖、总黄酮的综合提取，且游离苷元含量也得以提升。

当银杏叶渣中多糖、总黄酮两类物质得以富集后，本研究对其抗氧化性能进行了测试。3.0 mg∕mL的银杏叶渣多糖对DPPH 自由基、ABTS+自由基及羟自由基清除率均在50%～70%，其对应的IC50值分别为0.99、2.14、1.33 mg∕mL。相比而言，银杏叶渣总黄酮对3 种自由基的清除效果普遍优于多糖，3.0 mg∕mL 银杏叶渣总黄酮的清除率介于60%～100%。进一步地，对溶剂提银杏叶渣总黄酮和复合酶提银杏叶渣总黄酮的抗氧化性能也做一对比。复合酶辅助醇水溶剂提取法提取银杏叶渣总黄酮对DPPH 自由基、ABTS+自由基及羟自由基的IC50值分别为0.63、1.08、0.35 mg∕mL，较溶剂提取银杏叶渣总黄酮的IC50值（0.88、1.44、0.42 mg∕mL）则降低17%～28%，这提示复合酶辅助醇水溶剂提取法所得总黄酮的清除能力较溶剂提取法更优，该结果与游离苷元提取率大小基本一致。

本研究实现了银杏叶渣中多糖和总黄酮两类活性成分的综合提取，且复合酶辅助醇水溶剂提取法所得银杏叶渣总黄酮及游离苷元提取率较溶剂提取法分别提升1 倍以上，其对DPPH 自由基、ABTS+自由基及羟自由基清除的IC50值也有明显降低，均证实了复合酶辅助醇水溶剂提取法提升了游离黄酮苷元含量，最终增强了自由基清除能力。本研究针对银杏叶渣资源利用性与其功能性两方面进行了探究，其研究结果为银杏叶废弃物的高值化利用提供了有益参考，具有重要的经济和理论价值。