土壤质地对山银花灰毡毛忍冬质量的影响研究

陈仕高 张苏杭 杨美森 李红梅

（1重庆市秀山县农业农村委员会，重庆秀山 409900；2云南楚雄医药高等专科学校，云南楚雄 675000；3重庆市农业技术推广总站，重庆 401121）

山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬（Lonicera ma⁃cranthoidesHand.-Mazz.）、红腺忍冬（Lonicera hypo⁃glaucaMiq.）、华南忍冬［Lonicera confusa（Sweet）DC.］或黄褐毛忍冬(Lonicera fulvotomentosaHsu et S.C. Cheng）的干燥花蕾或带初开的花，具有清热解毒、疏散风热等功效，用于治疗痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热，是一种药用价值很高的中药材。山银花常以绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙药效物质指标，作为其质量评价指标[1]。我国土壤质地分为黏土、壤土和砂土3 类[2]，山银花主要种植在旱地土壤和荒地山坡上，土壤质地以黏土和砂土类型为主。土壤对中药材的质量影响较大[3]，有研究者从土壤机械组成的黏砂粒含量上对山银花质量的影响进行了一些研究[4-5]，而从黏土和砂土土质上对山银花药效物质影响的研究尚未见报道。为更全面地了解黏土和砂土对山银花质量的影响，笔者开展了黏土和砂土对山银花灰毡毛忍冬的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙和木犀草苷4 个药效物质指标的影响研究，以期为山银花产业发展规划布局和中药材高质量发展提供理论依据。

1 研究区概况

秀山县地处重庆市东南、渝黔湘鄂接合部、武陵山区腹部地区（108°43′~109°18′E，28°09′~28°53′N），为中亚热带湿润季风气候区，四季分明，降水充沛，日照偏少，年均气温16 ℃，年均降水量1 341.1 mm，年日照时数1 213.7 h，海拔245.7～1 631.4 m，平坝、丘陵和低中山区各占1/3。全县面积246 000 hm2，耕地面积57 333 hm2，土壤类型主要有黄壤、红壤、紫色土、石灰岩土、潮土和水稻土。

秀山县山银花现有种植面积15 067 hm2，是全国山银花主产区之一[6-7]，以灰毡毛忍冬和“渝蕾1 号”为主[8]。作为重庆市中药材“渝十味”品种之一，秀山县乡村振兴产业中药材“秀五味”品种之一，山银花为秀山县农民脱贫增收作出了重要贡献，也必将为秀山县乡村振兴发挥积极作用。山银花在秀山全境均有分布，主要种植在400～1 100 m丘陵和山区，即“一山两盖”示范带的太阳山示范带、平阳盖示范带和川河盖示范带，土壤主要由砂页岩和石灰岩母质发育而来，砂页岩母质发育的土壤主要为砂性土壤，石灰岩母质发育的土壤主要为黏性土壤。

2 材料与方法

2.1 样品材料

以灰毡毛忍冬为亲本选育的“渝蕾1 号”（Lonicera macranthoidesHand. -Mazz.“Yulei1”）（渝S-SV-LM-005-2008）山银花花蕾作为样本材料。

2.2 样品采集

2022 年6 月下旬至7 月上旬，于山银花花蕾青白期，选择秀山县山银花主要种植区有代表性的山银花种植基地，采集10 个山银花样品，其中黏土土质5 个，砂土土质5 个；每块地采用梅花型5 个点位取样，每个点位采1 蔸，每蔸选3 枝（上、中、下各1 枝），共采摘15 枝的花蕾为1 个样品；样品采集后置于干燥箱内，恒温60 ℃烘烤至干燥待检测。

2.3 样品检测

本研究山银花样品检测项目为绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙和木犀草苷4 个药效指标。药效指标检测方法参照《中华人民共和国药典》（2020 年版一部）山银花和金银花[1]。检测单位是西安国联质量检测技术股份有限公司，检测时间为2022 年8 月。

2.3.1 绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙测定参照高效液相色谱法（通则0512）测定。

（1）色谱条件与系统适用性试验。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.4%醋酸溶液为流动相B，梯度洗脱（0～10 min、11.5%～15%A、88.5%～85%B；10～12 min、15%～29%A、85%～71%B；12～18 min、29%～33%A、71%～67%B；18～30 min、33%～45%A、67%～55%B）；绿原酸检测波长为330 nm；皂苷用蒸发光散射检测器检测。理论板数按绿原酸峰计算不低于1 000。

（2）对照样品溶液的制备。分别取绿原酸对照品、灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、川续断皂苷乙对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL 含绿原酸0.5 mg、灰毡毛忍冬皂苷乙0.6 mg、川续断皂苷乙0.2 mg的混合溶液，即得。

（3）供试样品溶液的制备。取供试样品粉末（过四号筛）0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）40 min，放冷后再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀、滤过，取续滤液，即得。

（4）测定法。分别精密吸取对照品溶液2、10 µL，供试品溶液5～10 µL，注入液相色谱仪测定，以外标两点法计算绿原酸的含量，以外标两点法对数方程计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量。

2.3.2 木犀草苷测定参照高效液相色谱法（通则0512）测定。

（1）色谱条件与系统适用性试验。用苯基硅烷键合硅胶为填充剂（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6 mm×250 mm，5 µm），以乙腈为流动相A，以0.5%冰醋酸溶液为流动相B，梯度洗脱（0～15 min，10%～20%A、90%～80%B；15～30 min，20%A、80%B；30～40 min，20%～30%A、80%～70%B）；检测波长为350 nm。理论板数按木犀草苷峰计算不低于20 000。

（2）对照样品溶液的制备。取木犀草苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1 mL 含40 µg的溶液。

（3）供试样品溶液的制备。取供试样品粉末（过四号筛）2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）1 h，放冷后再称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀、滤过。精密量取续滤液10 mL，回收溶剂至干，残渣用70%乙醇溶解，转移至5 mL 容量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。

（4）测定法。分别精密吸取对照样品溶液与供试品溶液各10 µL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.4 数据处理

采用WPS软件进行数据统计和分析。

3 结果与分析

3.1 黏土和砂土对山银花绿原酸的影响

由表1 可以看出，黏土和砂土中山银花灰毡毛忍冬的绿原酸平均含量分别为3.414%、2.967%，黏土中山银花的绿原酸含量比砂土中高，差异达显著水平；黏土和砂土中山银花绿原酸的变异系数分别为16.3%、18.6%，变异系数均较小。说明黏土中山银花灰毡毛忍冬的绿原酸含量更高，黏土与砂土差异明显。

表1 土壤质地对山银花绿原酸和灰毡毛忍冬皂苷乙的影响 单位：%

3.2 黏土和砂土对山银花灰毡毛忍冬皂苷乙的影响

由表1 可看出，黏土和砂土中山银花的灰毡毛忍冬皂苷乙平均含量分别为5.843%、5.300%，黏土中山银花的灰毡毛忍冬皂苷乙含量比砂土中高，差异达极显著水平；黏土和砂土中山银花灰毡毛忍冬皂苷乙的变异系数分别为7.8%、16.1%，变异系数均较小。说明黏土中山银花灰毡毛忍冬的灰毡毛忍冬皂苷乙含量更高，黏土与砂土差异非常明显。

3.3 黏土和砂土对山银花川续断皂苷乙的影响

由表2 可知，黏土和砂土中山银花灰毡毛忍冬川续断皂苷乙平均含量分别为0.471%、0.400%，黏土中山银花的川续断皂苷乙含量比砂土中高，差异达极显著水平；黏土和砂土中山银花川续断皂苷乙的变异系数分别为16.0%、25.0%，变异系数均较小。说明黏土中山银花灰毡毛忍冬的川续断皂苷乙含量更高，黏土与砂土差异非常明显。

表2 土壤质地对山银花川续断皂苷乙和木犀草苷的影响 单位：%

3.4 黏土和砂土对山银花木犀草苷的影响

由表2 可知，黏土和砂土中山银花灰毡毛忍冬的木犀草苷平均含量分别为0.073%、0.093%，砂土中山银花的木犀草苷含量比黏土中高，差异达显著水平；黏土和砂土中山银花木犀草苷的变异系数分别为35.7%、34.9%，变异系数均较小。说明砂土中山银花灰毡毛忍冬的木犀草苷的含量更高，砂土和黏土差异明显。

4 讨论与结论

根据《中国药典》2020年版药物质量控制标准，山银花，绿原酸≥2.0%，灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总量≥5.0%；金银花，绿原酸≥1.5%，木犀草苷≥0.050%。本研究表明，重庆市秀山地区山银花灰毡毛忍冬的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙和木犀草苷各药效物质含量，均比《中国药典》2020年版山银花和金银花的标准高10%以上，特别是绿原酸和木犀草苷高45%以上，说明该地区山银花灰毡毛忍冬品质较好，这也说明该地为道地中药材山银花的优势产区之一。

土壤质地简单来讲就是土壤的黏砂程度，是土壤的重要自然属性之一，其土壤颗粒组成特征能够反映成土母质的来源和状况，影响土壤的保水保肥能力、土壤透气性、土壤养分和土壤耕作性等。土壤质地分为黏土、壤土和砂土3 类，山银花主要种植在旱地土壤和荒地山坡上，土壤质地以黏土和砂土类型为主。砂土颗粒粗糙、渗水速度快、通气性能好、保水保肥性能略差，而黏土颗粒细腻、保水保肥性能好、渗水速度慢、通气性能略差。土壤质地不同则肥料转化供应和根系活力就不同，影响山银花生长和养分吸收，最终影响山银花品质。本研究结果表明，黏土利于山银花灰毡毛忍冬的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的合成，其山银花的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量更高，与砂土比较，差异显著或极显著；而砂土利于山银花灰毡毛忍冬的木犀草苷的合成，其山银花的木犀草苷含量更高，与黏土比较，差异显著。本研究结果表明土壤质地对山银花品质影响很大，这与柳小兰等[4]研究发现土粒细利于灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙合成，陈乔乔等[5]研究得出土壤粉粒与绿原酸呈显著正相关的结果相似；与北方砂土道地产区金银花的木犀草苷含量相对较高[9]结果相似。山银花产区主要分布在重庆、湖南、贵州等南方地区[6～7]，种植区域以山地为主，种植区黏土和砂土同时存在，实际生产中黏土和砂土分类种植更方便，可参照本研究结果，即黏土山银花的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量更高，砂土山银花的木犀草苷含量更高来进行规划种植山银花。以绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量或提取物为主要目标时，选择黏土种植最好，以木犀草苷的含量或提取物为主要目标时，选择砂土种植最好。根据山银花种植规划选用黏土或砂土土质，对山银花产业高质量发展意义重大。也有研究认为，金银花比山银花的木犀草苷含量高[10]，但其所选用比较的山银花可能是黏土上种植的，而南方砂土种植的山银花灰毡毛忍冬与北方砂土道地金银花的木犀草苷含量是否真正存在明显差异，有待进一步研究。

综上所述，土壤质地对山银花质量的影响较大，黏土利于山银花的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙合成，含量更高，砂土利于山银花的木犀草苷合成，含量更高。本研究结果对于砂土和黏土并存地区的山银花规划种植及提升品质具有一定的参考意义。