高效液相色谱法测定化妆品中7种防腐剂

2023-07-26程红新王福鑫

品牌与标准化 2023年3期

程红新王福鑫

【摘要】为扩大检验范围，优化化妆品检验能力，本研究建立了高效液相色谱法同时测定化妆品中己脒定二盐等7种防腐剂的含量。对不同基质类型的化妆品样品加入提取溶剂超声提取，提取液经高速离心处理，上清液以正己烷脱脂，经0.45微孔滤膜过滤后取续滤液测定。色谱柱为C18（4.6 mm×250 mm，5μm），以0.1%三氟乙酸水溶液和乙腈为流动相梯度洗脱，检测器为二极管阵列检测器（DAD），采用外标法定量。在该条件下，7种防腐剂均在其线性范围内，线性相关系数≥0.997。三种不同剂型空白基质在低、中、高3个质量浓度加标水平下，方法的平均回收率为99.6%～111.1%，相对标准偏差（n=6）≤2.9%。该测定方法具有特异性显著，灵敏度、准确度高，适用于化妆品中该类防腐剂的检测。

【关键词】高效液相色谱法；化妆品；防腐剂；己脒定二盐；氯己定；苯扎氯铵；苄索氯铵

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.03.032

Determination of 7 Kinds of Preservatives in Cosmetics by HPLC

CHENG Hongxin，WANG Fuxin

（Liaoning Institute for Drug Control，Shenyang 110036，China）

Abstract：To expand detection range and modify the needs of inspection in cosmetics，the determination of hexamidine and other 6 kinds of preservatives was established by performance liquid chromatography .Different forms of cosmetic samples were treated by ultrasonic extration，the extration solution was obtained by high-speed centrifugation，the supernatant was degreased by hexane and then filtered by 0.45μm millipore filter. Chromatographic operation was conducted on C18 column（4.6 mm×250 mm，5μm）by a gradient elution of 0.1% aqueous trifluoroacetic acid solution and acetonitrile. The detection was completed using a diode array detector（DAD）. The external standard method was used for quantitation. Under the optimum conditions，good linearity was observed over a certain range of concentration，the results showed that their linear ranges were above 0.997，the mean recoveries were 99.6% to 111.1%，relative standard deviation was below 2.9%（n=6）at three mass concentration gradients of low，medium and high for three different types of matrixes. The method was proved to be high specified，sensitive and accurate，it could be used in the practical determination of commercial cosmetics.

Key words：HPLC；preservatives；cosmetics；hexamidine；chlorhexidine；benzalkonium chloride；benzethonium chloride

己脒定二（羥乙基磺酸）盐是一种针对细菌、霉菌和酵母的广谱水溶性阳离子抗微生物剂，可被用作多效防腐剂、皮肤灭菌剂等，在化妆品工业中应用广泛。其具有很好的抗痘、控油、抗刺激、抗头皮屑作用。氯己定及其盐是一类常用的皮肤黏膜消毒剂，其具有腐蚀低、杀菌效果好、使用方便等优点，被广泛应用于化妆品配方中。苯扎氯铵主要由十二烷基二甲基苄基氯化铵（劳拉氯铵）、十四烷基二甲基苄基氯化铵十六烷基二甲基苄基氯化铵（西他氯铵）3种同系物组成。苯扎氯铵、十二烷基三甲基溴化铵及苄索氯铵均为季铵盐型阳离子表面活性剂。该类产品具有高效、低毒的特点，对人体器官、皮肤无腐蚀、无刺激。作为阳离子表面活性剂，季铵盐除具有杀菌作用外，还兼有防腐作用，已广泛应用于日化领域。

《化妆品安全技术规范》（2015年版）以下简称《规范》，将己脒定二（羟乙基磺酸）盐、氯己定、十二烷基三甲基溴化铵、十二烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、苄索氯铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵均列为化妆品限用物质。为了防止生产厂家在化妆品中违规超量添加此类限用物质，有必要建立对此类限用物质的检验方法。

1实验部分

1.1仪器、材料与试剂

1.1.1仪器

L-2000高效液相色谱仪，二极管阵列检测器（日本Hitachi公司）、高速离心机（美国BECKMAN COULTER公司）、XS105型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、VORTEX3涡旋混合器（德国IKA公司）；As3120超声清洗仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；Milli-Q超纯水机（美国Millipore公司）；0.45μm滤膜。

1.1.2材料与试剂

标准品：己脒定二（羟乙基磺酸）盐、氯己定、十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵购于BePure公司；十二烷基二甲基、苄基氯化铵、苄索氯铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵购于Otric公司，标准品纯度均大于97%。试剂：甲醇、乙腈、甲酸、正己烷、三氟乙酸（色谱纯）购于美国Merk公司；乙二胺四乙酸二钠（分析纯）购于国药集团化学试剂有限公司。样品：膏霜、爽身粉和唇膏3种不同剂型的化妆品样品共20批，均购于商场和化妆品专卖店。

1.1.3试液配制

0.1%三氟乙酸溶液：准确称取乙二胺四乙酸二钠0.0067 g，溶解于水，加入1.00 mL三氟乙酸，用水稀释至1000 mL，混匀。提取溶剂：准确量取甲酸溶液5 mL，用水稀释至500 mL，再准确加入500 mL甲醇，混匀。

1.2试验方法

1.2.1混合标准系列溶液的配制

准确称取己脒定二（羟乙基磺酸）盐等7种标准物质适量至同一10 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容，配制成标准储备溶液；再分别精密移取适量标准储备溶液于10 mL容量瓶中，用提取溶剂稀释并定容，配制成混合标准系列溶液（见表1）。

1.2.2样品前处理

称取样品1.0 g（精确到0.001 g）于15 mL具塞离心管中，加入提取溶剂8 mL，涡旋振荡30 s，使试样与提取剂充分混匀，超声提取30 min，用提取溶剂定容至10 mL，再加正己烷2 mL，涡旋振荡60 s，以10000 rpm离心5 min，取下层溶液，经0.45μm滤膜过滤后，滤液作为待测溶液。

化妆水、膏霜、乳液可以直接加入提取溶剂；粉类基质样品先加1 mL水，蜡基样品先加入1 mL～2 mL四氢呋喃，使样品均匀分散，再加入提取溶剂超声提取。

1.3液相色谱分离条件

色谱柱：C18，4.6 mm×250 mm 5μm；流动相：溶液A为0.1%三氟乙酸水溶液；溶液B为乙腈；梯度洗脱程序：（0～2 min：10%B；2～2.1 min：10%～30%B；2.1～45 min：30%～ 59.6%B；45～45.1 min：59.6%～10%B；45.1～52 min：10%B）；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；柱温：30℃；进样量：10μL。在该色谱条件下，取混合标准系列溶液分别进样，进行色谱分析。混合标准溶液色谱图见图1。

2结果与讨论

2.1不同基质化妆品前处理方法的选择

不同基质的化妆品基质差异很大。化妆水、膏霜、乳液等属于水包油剂型，易溶于水，可以直接加入提取溶剂；粉类基质样品主要成分为滑石粉、膨润土等，先加1 mL水可以避免粉尘外溢被人体吸入；蜡基样品属于油溶性物质，先加1～2 mL四氢呋喃，使样品处于均匀的液态，利于待测物质提取。

2.2检测波长的选择

实验表明，7种防腐剂在210 nm处都有较大的紫外吸收。选择此波长作为检测波长，即能够满足检出限需求，又能简化实验操作步骤。

2.3流动相比例的调整

由于十二烷基二甲基苄基氯化铵和苄索氯铵出峰时间非常接近，故采用梯度洗脱程序，流动相溶液A配制应尽可能保持一致，避免因重复调整流动相比例而导致工作量增加。

2.4线性范围、检出限（LOD）与定量限（LQD）

取标准溶液按浓度从低到高顺序经液相色谱测定，以标准使用液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归分析。同时，试验采用膏霜空白样品中添加混合标准溶液，逐级稀释，测定方法的检出限和定量限，以S/N=3和S/N=10质量浓度作为方法检出限（LOD）和定量限（LQD），结果见表2。由表2可知，7种防腐剂在质量浓度范围内，各化合物线性相关系数均≥0.997，线性关系良好，LOD和LQD满足方法要求。

2.5方法回收率与精密度

称取膏霜、爽身粉及唇膏空白化妆品样品1 g（精确至0.001 g），分别添加低、中、高浓度3个水平的混合标准溶液，低、高浓度各取3份，中浓度各取6份，按照本方法进行分析测定，以随行标准曲线定量，得到3种剂型低、中、高浓度的回收率及精密度，测得结果均具有良好的回收率及重现性，测定结果见表3、表4、表5。