海桐皮质量标准优化研究

王 烨，刘梓煜，刘 伟，王梦桐，杨济菲，刘思佳，杨锦祥，丁禹伶，李 勇

（长春中医药大学药学院，长春 130117）

据吉林省1986 年《吉林省中药饮片炮制规范》记载，海桐皮来源为五加科植物刺楸Kalopanax septemlobus（Thunb.）Nakai.、豆科植物刺桐Erythrina variegata L. var. orie. taLis（L.）、 乔 木刺桐E. arborescens Roxb.、或芸香科植物樗叶花椒ZanthoxyLum aiLanthoides. Sieb et Zucc.的干燥树皮。刺楸，是五加科刺楸属植物。其树皮具有祛风、除湿、通络、止痛、杀虫之功效[1]。化学研究主要涵盖三萜及其皂苷和苯丙素类化合物，已从刺楸中分离出122 种化合物，包括三萜类（7 个）及三萜皂苷类（79个）、苯丙素类（26 个）、其他类（10 个）（甾醇类、苯酚类、苯甲酸类）化合物。其中三萜皂苷是K. septemlobus 最主要的化学成分。药理研究表明，从刺楸不同部位分离出的各种提取物和单体化合物具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗真菌等。其中，三萜皂苷在抗炎、抗肿瘤等方面已被深入研究[2-3]。刺桐或乔木刺桐，为豆科刺桐属植物。其树皮具有镇静[4]、平喘[5]祛风除湿，驱虫之功效。化学研究主要涵盖生物碱和黄酮类化合物。药理作用包括抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗菌、预防龋齿、镇痛、抗风湿、抗病毒等作用[4-6]。樗叶花椒，为芸香科花椒属植物，其树皮具有祛风通络、活血散瘀、温中健胃等诸多功效[7]化学研究主要涵盖挥发油类、生物碱类、酰胺类、黄酮类、香豆素类和木脂素类等化合物[8-12]，药理作用包括镇静镇痛、抗菌、抗病毒、抗氧化等方作用[13-14]。

由以上信息可知四种海桐皮在功能主治、化学成分和药理作用方面存在异同。但是它们却都作为海桐皮使用，这使得混用药材可能带来安全隐患，因此有必要针对每种植物做不同的显微和薄层对其定性鉴别，加以区分。本研究采用显微和薄层色谱法对刺楸、刺桐或乔木刺桐以及樗叶花椒三味中药进行定性鉴别研究，进一步完善海桐皮的质量标准。

1 仪器材料

1.1 试剂与试药

见表1。

表1 试剂与试药

1.2 实验仪器

见表2。

表2 实验仪器

2 实验方法

2.1 标本制作

准备出采集的标本，剪去茎上残叶或者一些过密的叶子，留下叶柄，将根修剪，压平，整体修剪，确定标本大致形状，标本夹的一面放在桌上，上铺几层吸水性好的草纸，将之前处理的标本放在纸上，加以整理，再盖上几层草纸，最后将标本夹另一面也压上，用绳缚紧，1 ～2 d 后标本夹打开，换草纸，将标本翻面，直至标本完全干燥，将干燥的标本贴于台纸上，分别在左上角和右下角贴标签，进而制作成植物标本。

2.2 海桐皮饮片制备

本研究中所有样品均按1986 年《吉林省中药饮片炮制规范》炮制方法加工而成，取海桐皮鲜品，清洗干净，闷润，切制，干燥。

2.3 显微鉴别

2.3.1 粉末鉴别 将药材粉碎，粉末过四号筛，取少许置于载玻片上，滴加水合氯醛试液1 ～2 滴，盖上盖玻片，置于显微镜（10×40）下观察。

2.4 薄层鉴别

除了对薄层色谱方法进行专项考察外，本研究均按照2020 年版中国药典四部通则0502 法试验操作。2.4.1 刺楸（川桐皮）薄层鉴别

2.4.1.1 供试品溶液的制备 取刺楸粉末 1.0 g，加20 mL 甲醇超声处理 30 min，抽滤，将滤液放入蒸发皿用水浴锅蒸干，残渣加水 15 mL 使其溶解，用水饱和正丁醇振摇提取 2 次，每次 15 mL，合并正丁醇提取液，蒸干。残渣加甲醇 20 mL 溶解，再加入 75%盐酸 2 mL，加热回流水解 2 h，水解物加水适量，用三氯甲烷振摇提取 2 次，每次 20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇 2 mL 使溶解，作为供试品溶液。

2.4.1.2 对照品溶液的制备 另取 1 mg 常春藤皂苷元对照品，加甲醇1 mL 使其配制为每 1mL 含 1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4.1.3 实验方法 按照《四川省中药饮片炮制规范》（2015 年版）川桐皮项下薄层方法进行试验[15-17]：斑点专属性不好，Rf 值较低，故设定正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.3、正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.4 和正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.5三个展开系统进行考察。

2.4.2 刺桐或乔木刺桐（海桐皮）薄层鉴别

2.4.2.1 供试品溶液的制备 取刺桐或乔木刺桐粉末 1.0 g，加 30 mL 乙醇，超声处理 30 min，抽滤，将滤液放入蒸发皿用水浴锅蒸干，残渣加水15 mL 使溶解，浓氨试液调 pH 值至10 ～12，用三氯甲烷振摇提取 2 次，每次 15 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇 2 mL 使溶解，作为供试品溶液。

2.4.2.2 对照药材溶液的制备 另取海桐皮对照药材 1.0 g，按照相同方法制成对照药材溶液。

2.4.2.3 实验方法 按照《山东省中药饮片炮制规范》（2012 年版）海桐皮项下薄层方法进行试验[16-17]：斑点拖尾，重现性不好，故设定三氯甲烷-甲醇 =4:1 和正丁醇-冰醋酸-水 = 4:1:5 上层溶液展开剂两个展开系统进行考察。

2.4.3 樗叶花椒（浙桐皮）薄层鉴别

2.4.3.1 供试品溶液的制备 取樗叶花椒粉末 1.0 g，用 10 mL 乙醇超声 30 min，过滤，滤液挥干，用甲醇定容至2 mL，作为供试品溶液[15，17]。

2.4.3.2 对照品溶液的制备 另取 1 mg 木兰花碱对照品，加甲醇1 mL 使其配制为每 1 mL 含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。

2.4.3.3 实验方法 按照薄层色谱法（中国药典2010 年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5 uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水 = 7:2:2:1 为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 254 nm 下检视。斑点专属性不好，故设定氯仿-甲醇 = 4:1、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水 = 7:2:2:1、正丁醇-乙酸-水 = 4:1:5 三个展开系统进行展开剂考察。

3 结果

3.1 植物标本

见图1、图2、图3。

图1 刺楸标本

图2 刺桐或乔木刺桐标本

图3 樗叶花椒标本

3.2 海桐皮饮片性状

见图4。角宽大或带方形。纤维及晶纤维较多，成束或单个散在，壁极厚，木化，孔沟明显，胞腔狭细，直径10 ～33 μm。石细胞呈类长圆形、类长方形或纺锤形直径33 ～56 μm。木栓细胞无色或淡棕色，表面观类长方形或类多角形。筛管极少见。

图4 海桐皮饮片性状图

3.3.2 刺桐或乔木刺桐 本品粉末黄白色至灰色。木栓细胞多角形，常多层重叠，壁菲薄，非木化或微木化。胞腔内含草酸钙方晶，方晶较多，单个或成群存在。纤维及晶纤维成束或散在，纤维直径9 ～30 μm，壁极厚，胞腔线形，木化或微木化，纤维束周围细胞中含有草酸钙方晶，形成晶纤维。筛管较少，不太容易找到。

3.3.3 樗叶花椒 本品粉末黄棕色。草酸钙方晶众多，有的棱角宽大或带方形。纤维及晶纤维较多，成束或单个散在，壁极厚，木化，孔沟明显，胞腔狭细，直径10 ～33 μm。木栓石细胞呈类长圆形、类长方形或纺锤形，多为两个以上细胞链接在一起，单个直径在33 ～56 μm。木栓细胞成群存在，无色或淡棕色，表面观类长方形或类多角形。

3.4 薄层鉴别

3.4.1 刺楸（川桐皮）薄层鉴别 根据图5 可知，正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.3 或7:3:0.4 都能使刺楸显现出清晰可见的斑点，但其Rf 值较低，而正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.5 作为展开剂的薄层色谱图Rf 值最好，综合考虑正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 = 7:3:0.5，可作为本鉴别实验的展开剂。本实验选取10 批样品按本法检验，均符合规定，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。且薄层色谱分离效果好，斑点圆整清晰，比移值适中，重现性较好。

图5 刺楸薄层色谱图

3.4.2 刺桐或乔木刺桐（海桐皮）薄层鉴别 根据图6 可知，当展开剂为三氯甲烷-甲醇 = 4:1 时，能显现出斑点，但不够清晰，表现出拖尾、比移值很低且分离度不好的缺点，而当展开剂为正丁醇-乙酸-水 = 4:1:5 上层溶液为展开剂的薄层色谱斑点清晰圆整，Rf 值最好，故其可作为本鉴别实验的展开剂。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。本实验选取10 批样品按本法检验，均符合规定，且薄层色谱分离效果好，斑点圆整清晰，比移值适中，重现性较好。

图6 刺桐或乔木刺桐薄层色谱图

3.4.3 樗叶花椒（浙桐皮）薄层鉴别 根据图7 可知，氯仿:甲醇 = 4:1 和乙酸乙酯-丙酮-甲酸:水= 7:2:2:1 作为展开剂时不能显现出清晰的斑点，而正丁醇-乙酸-水 = 4:1:5 上层溶液为展开剂的薄层色谱斑点清晰，Rf 值较好，故可作为本鉴别实验的展开剂。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。10 批样品按本法检验，均符合规定，且薄层色谱分离效果好，斑点圆整清晰，比移值适中，重现性较好。

图7 樗叶花椒薄层色谱图

4 讨论

海桐皮作为常见中药，分为多基源药材，如刺楸、刺桐或乔木刺桐以及樗叶花椒，目前有关于其有效质量控制的文献和相关报道相对很少，三种海桐皮的功能主治、化学成分及药理活性各不相同。按照现有标准对其进行标本制作、饮片加工、显微和薄层色谱定性鉴别，日常检测工作中发现两个问题：1）各基源海桐皮的性状和显微特征等相差较大，如刺楸中存在较多蔟晶，然而其他两种药材包含很多方晶并且筛管较少，很难在其中找到。2）现存薄层色谱方法主要存在专属性和重复性不好的问题。为了提高海桐皮个混用品的鉴别效率，本研究分别对其展开剂进行优化，最终确定了三种海桐皮药材薄层色谱鉴定的新方法。研究表明，各基源海桐皮的显微特征和薄层条件也相差很多，可以单独作为中药材使用。并且本实验方法与现行标准及文献中记载的方法相比，优化后的薄层色谱斑点更清晰，且分离度较好，专属性更强。新方法操作简单，重复性和耐用性良好，可全面有效的控制海桐皮的质量，为该药品质量标准提供依据和参考。