院内制剂丹芍清胃颗粒中芍药苷含量的HPLC 测定
2023-07-15李淑玲成光宇杨丽华
陈 珍，何 蕊，李淑玲，成光宇，位 鸿，杨丽华*
（1.长春中医药大学，长春 130117；2.长春中医药大学附属医院，长春 130021）
慢性胃炎是临床常见慢性疾病，其病因和发病机制多样、复杂，病程较长[1-2]。“丹芍清胃方”来源于长春中医药大学杨丽华教授的经验方，具有清肝泄热，和胃止痛的功能，用于肝胃郁热证所致的慢性胃炎、胃溃疡的治疗，经临床反复验证，行之有效，故将其开发成院内制剂“丹芍清胃颗粒”。本方主要由牡丹皮、白芍、海螵蛸、白术等10 味药组成。牡丹皮是处方中的君药，牡丹皮、白芍均含有芍药苷，芍药苷是处方中较稳定的有效成分[3-7]。本试验以芍药苷为对照，通过方法学考察，建立了含量测定方法。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
1.1.1 仪器 高效液相色谱仪Waters e2695，PDA 检测器，CP225D 型电子天平（德国sartorius 公司），KH-250DB 超声波清洗机（昆山禾创超声仪器有限公司）[6]。
1.1.2 药品与试剂 供试样品：丹芍清胃颗粒（生产批号：20200601、20200602、20200603）。芍药苷对照品（批号：110736-201741，供含量测定用，规格：每只20 mg，购于中国食品药品检定研究院）；乙腈为色谱纯，水为超纯水[6]。
1.2 色谱条件与系统适应性
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂十八烷；流动相：乙腈-0.1%磷酸水（14:86）；检测波长为230 nm；芍药苷的理论塔板数＞2 000[5]；流速1.0 mL·min-1；柱温为25℃；进样量10 μL。
1.3 对照品溶液的制备
取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL 含51.45 μg 的溶液，即得[5]。
1.4 供试品溶液的制备
取本品研细，取约0.6 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加稀乙醇35 mL，超声处理（功率240 W，频率45 kHz）30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[5]。
1.5 测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得[5]。
2 方法学验证
2.1 专属性考察
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，依法测定[6-7]，色谱图见图1、图2、图3。结论：在此hplc 条件下，芍药苷峰分离好，阴性无干扰。
图2 供试品溶液的HPLC 图
图3 阴性对照溶液的HPLC 图
2.2 线性关系考察
分别精密吸取芍药苷对照品溶液2 mL、4 mL、6 mL、10 mL、12 mL、16 mL、18 mL、20 mL，注入液相色谱仪，根据结果绘制标准曲线[6-7]。回归方程：Y= 1 549 492.7 861X+ 4 875.307 7。r= 0.999 9，芍药苷线性范围为0.102 9 ～1.029 0 mg，结果见表1[6-7]。
表1 线性关系考察
2.3 耐用性考察
2.3.1 流速的考察 选择1.2 mL·min-1、1.0 mL·min-1、0.8 mL·min-1的流速测定含量[6-7]，结果见表2。结论：流速对含量测定影响较小[6-7]。
表2 流速考察的结果
2.3.2 柱温考察 选择35 ℃、30 ℃、25 ℃的柱温测定含量[6-7]，结果见表3。结论：柱温对测定结果影响较小[6-7]。
表3 柱温考察的结果
2.3.3 不同色谱柱的考察 选择不同品牌的色谱柱依法测定含量[6-7]，结果见表4。结论：不同色谱柱对含量测定结果影响较小[6-7]。
表4 不同色谱柱考察的结果
2.3.4 不同流动相比例的考察 选择4 种不同流动相比例测定含量[6-7]，结果见表5。结论：不同流动相比例对含量结果影响较小[6-7]。
2.4 稳定性考察
取同一对照品和供试品溶液，分别在0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h，依法测定[6-7]，结果见表6。结论：试验样品的稳定性好[6-7]。
表6 稳定性试验结果
2.5 精密度考察
取同一芍药苷对照品溶液，依法测定6 次[6-7]，结果见表7。结论：本试验方法的精密度好[6-7]。
表7 精密度考察
2.6 重现性试验
精密称取同一批样品6 份，制备方法同1.4 供试品溶液项下方法，依法测定[6-7]，结果见表8。结论：本试验方法重现性好[6-7]。
表8 重现性试验结果
2.7 准确度试验
称取已知含量的同一批样品6 份，每份0.3 g，精密称定，分别置50 mL 量瓶中，加入1 mL 浓度为1.453 mg·mL-1芍药苷对照品溶液和34 mL 稀乙醇，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，加入稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液[5-7]，依法测定，计算回收率，结果见表9。结论：本试验方法的准确性好[6-7]。
表9 回收率试验结果
2.8 含量测定与含量限度确定
取三批中试样品，依法测定，每批二份，结果见表10。本品规格为每袋装10 g，含量限度按测定结果平均值的80%计算[9]：3.7 235 mg·g-1×10 g/袋×80% = 29.7 878 mg/袋。故暂定：本品每袋颗粒含芍药苷（C23H28O11）计，不得少于29.00 mg[9]。
表10 三批中试样品含量测定结果
3 结论
本试验应用高效液相色谱法，以芍药苷对照品为对照，建立了丹芍清胃颗粒中含量测定方法，此方法的专属性良好，方法学验证符合规定，可以作为本制剂的质量控制方法。
