安乃近残留溶剂甲醇气相色谱检测方法
2023-07-13张晓灿李焕君王莉莉马凤霞刘晓莲马宁宁
张晓灿,康 倩,李焕君,王莉莉,王 丽,马凤霞,刘晓莲,马宁宁
(河北冀衡药业股份有限公司,河北 衡水 053000)
0 引 言
安乃近(Metamizole sodium) 为老牌解热镇痛类原料药,由于其疗效好,使用方便,价格低廉,在医学上发挥了重大作用。可用于头痛、神经痛、偏头痛、肌肉痛、关节痛和痛经等症状;如出现高热,可用于解热,安乃近极易溶于水,作用较为迅速,解热镇痛作用强而快,在解热镇痛类药中是为数不多的既能口服又可注射的品种;还可以用于滴鼻,尤其小儿鼻腔内毛细血管丰富,药液接触面大,易于吸收,使用时药效快,作用强。
安乃近合成工艺一般以吡唑酮为基础原料,经甲基化反应制得安替比林,再经亚硝化还原成4-氨基安替比林,然后经甲酰化和甲基化得4-甲氨基安替比林,最后经缩合反应得到安乃近。生产过程中用到的甲醇会残留到安乃近中,但各国药典均没有关于安乃近残留溶剂甲醇的检测方法的报道,按照国际制药指南ICHQ3C,甲醇属于对人体有害的有机溶剂,故应对残留溶剂给予控制,本实验开发了安乃近残留溶剂甲醇的定量检测方法,为安乃近生产提供重要的理论依据,同时也达到了提高安乃近质量的目的。
1 实验部分
1.1 仪器及试剂
1.1.1 仪 器
QUINIX124-1CN 分析天平,赛多利斯。
Clarus 580 气相色谱仪,PE 气相色谱仪。
SPN-300 高纯度氮气发生器,北京中惠普分析技术研究所。
SPH-300 高纯度氢气发生器,北京中惠普分析技术研究所。
SPB-3 全自动空气源,北京中惠普分析技术研究所。
1.1.2 试 剂
N,N-二甲基甲酰胺,天津大茂。
安乃近,河北冀衡药业股份有限公司。
甲醇,默克。
1.2 色谱条件
色谱柱,Agilent DB-WAX,30 m×0.32 mm×0.50 μm。
载气。
氮气。
检测器,FID。
柱温,起始温度55 ℃,以每分钟3 ℃的速率升温至80 ℃,然后以5.0 ℃的速率升温至140 ℃保持5 min。
检测器温度,230 ℃。
进样器温度,200 ℃。
流速,20 mL/min。
进样量,1.0 μl。
量程,1。
载气流速,3。
计算方法,外标法。
2 结果与讨论
2.1 定性分析
2.1.1 溶液配制
标准溶液:精密称取0.05 g 甲醇于100 mL 容量瓶中,用DMF 溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液。
供试试液:精密称取2 个0.5 g 样品分别于10 mL 容量瓶中,用DMF 溶解并稀释至刻度,摇匀。
2.1.2 操作步骤
分别吸取标准溶液1.0 μL,重复进样5 次;分别吸取样品溶液1.0μL 进样。
计算式如下:
式中:As样品溶液中甲醇的峰面积;Ar 标准溶液中甲醇的峰面积;Wr 配制标准溶液称取甲醇的质量;Ws 称取样品的质量。
2.2 气相色谱方法学考察
2.2.1 检测方法的系统适用性
对照液:精密称取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中,用DMF 溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液。
取对照溶液1.0 μL 重复进样6 次,记录色谱图,6 次结果的平均值为77 353.5,RSD 为1.55%,<5.0%,符合规定。系统适用性检测结果见表1。
表1 系统适用性检测结果Table 1 Testing result of system suitability test
2.2.2 检测方法的专属性
吸取DMF1.0 μL 进样,记录色谱图。与系统适用性中的溶液1 进行比较。从溶剂图谱未检测到甲醇,对甲醇的测定没有影响,专属性符合规定。
2.3 甲醇检测限和定量限的测定
2.3.1 定量限
吸取系统适用性项下对照液1.0 mL 于10 mL量瓶中,用DMF 溶解并稀释至刻度,摇匀,作为定量限的储备液;吸取定量限储备液0.8 mL 于50 mL 容量瓶中,用DMF 溶解并稀释至刻度,摇匀。吸取1.0 μL 重复进样6 次,记录色谱图。
定量限重复性,甲醇面积平均值为190,面积RSD 为7.6%,<10.0%;甲醇的信噪比均介于8~15,此时的浓度0.742 4 μg/mL 为甲醇定量限浓度。
2.3.2 检测限
精密称取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中,用DMF 溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照液。吸取对照液1.0 mL 于10 mL 量瓶中,用DMF 溶解并稀释至刻度,摇匀,作为定量限的储备液;吸取定量限储备液0.8 mL 于50 mL 容量瓶中,用DMF 溶解并稀释至刻度,摇匀,作为定量限溶液。吸取定量限溶液2.5 mL 于10 mL 容量瓶中,用DMF溶解并稀释至刻度,摇匀作为检测限溶液。吸取检测限溶液1.0 μL 注入气相色谱仪,记录色谱图,甲醇峰的信噪比为3.04,介于2~4,保留时间为1.810 min,此时的浓度0.19 ug/mL 为甲醇检测限浓度。
2.4 线性及线性范围的测定
在甲醇残留溶剂的定量限至甲醇残留溶剂限度的150%之间,相关系数R≥0.999,依次配制溶液,分别用DMF 配制成6 个不同浓度的溶液,甲醇 在 浓 度0.7424 ~721 μg/mL(LOQ- 限度 的150%) 具有良好的线性,线性方程为Y=171.24x+172.72,R2=0.999 8,R=0.999 9。甲醇标准溶液不同浓度峰面积见表2。
表2 甲醇标准溶液不同浓度峰面积Table 2 Table of different concentration peak areas of methanol standard solution
甲醇溶液线性关系如图1 所示。
图1 甲醇溶液线性关系Fig.1 Linear relationship of methanol solution
2.5 重复性的测定
吸取溶剂1.0 μL 注入气相色谱仪中,记录色谱图。
吸取检测限下的对照液1.0 μL,重复进样5次,记录色谱图。
甲醇对照的平均值为82 546.4,RSD 为0.94%,<5.0%,符合规定。甲醇对照液重复性检测结果见表3。
表3 甲醇对照液重复性检测结果Table 3 Testing result of methanol standard solution repeatability test
取一批安乃近样品,称取6 个样,各0.5 g,分别于10 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀。分别吸取1.0 μL,注入气相色谱仪中,记录色谱图。计算样品中检测到甲醇的平均值为40×10-6,RSD 为7.62%,<10%,符合规定。安乃近样品的甲醇检测结果见表4。
表4 安乃近样品的甲醇检测结果Table 4 Methanol testing result of three samples of metamizole sodium samples
2.6 样品溶液稳定性
吸取1.0 μL DMF 注入气相色谱仪中,精密称取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。
分别称取安乃近样品二个样,各0.5 g,分别于10 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀。
分别吸取溶剂、对照溶液、样品溶液各1.0 μL,注入气相色谱仪中,记录色谱图。
标准溶液、样品溶液、溶剂分别在0、4、8 h进样,记录色谱图。
溶剂、样品溶液、标准溶液在0、4、8 h 比较稳定;对照溶液的RSD 为1.5%,样品中甲醇检测结果的RSD 为3.5%,<5.0%,符合规定。
2.7 准确度的测定
在甲醇残留溶剂限度的80%、100%、120%3个水平项下。
(1) 空白溶剂,吸取1.0μL DMF 注入气相色谱仪中,空白溶剂中未检测到甲醇。
(2) 空白样品,精密称取安乃近0.5 g 于10 mL 量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀。吸取1.0 μL 注入气相色谱仪中,样品中未检测到甲醇。
(3) 标准储备液,精密称取甲醇对照0.25 g于50 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀。
(4) 进一针样品+ 标准溶液(甲醇限度的80%、100%、120%3 个水平)。
(5) 进一针标准溶液(甲醇限度的80%、100%、120%3 个水平)。
分别吸取各溶液1.0 μL 注入气相色谱仪,进一针样品+标准溶液、标准溶液(相应杂质限度的80%、100%、120%3 个水平),每个浓度取3 次,分别进样,记录色谱图,以平均回收率做为甲醇测定的准确度,各组分定量的准确度应在92%~108%之间,RSD 不得>10.0%。
然后用(4) -(2) /(5) - (1) 来计算各个残留溶剂的回收率。
注:(4):样品+标准品(2):样品(5):标准品(1):空白。
平均回收率100.27%介于90%~108%; RSD为0.84%<10.0%,符合规定。分别检测甲醇残留溶剂的80%、100%、120%,样品加标准溶液80%、100%、120%中的甲醇,最后测得甲醇的平均回收率为100.27%,RSD 为0.84%,符合规定。
2.8 耐用性
精密称取甲醇0.046 1 g 于100 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液。吸取1.0 μL 标准溶液,重复进样5 次。
精密称取安乃近0.781 3-0.281 2=0.500 1 g、0.781 7-0.281 6=0.500 1 g 于不同10 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀。
吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL,检测器、进样器、色谱柱、载气流速、柱温在正常条件下,注入气相色谱仪中,记录色谱图,耐用性项下正常条件检测结果见表5。
表5 耐用性项下正常条件检测结果Table 5 Testing result of robustness test on normal condition
2.8.1 柱温58 ℃
吸取2.8 项下溶液各1.0 μL,在其他条件不变,柱温58 ℃条件下,注入气相色谱仪中,标准溶液重复进样5 次,记录色谱图,耐用性项下柱温58℃检测结果见表6。
2.8.2 柱温62 ℃
精密称取甲醇0.046 8 g 于100 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液。
精密称取安乃近0.500 1 g、0.500 0 g 于不同10 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀。
分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL,在其他条件不变,柱温62 ℃条件下,注入气相色谱仪中,标准溶液重复进样5 次,记录色谱图,耐用性项下柱温62 ℃检测结果见表7。
表7 耐用性项下柱温62 ℃检测结果Table 7 Robustness testing result of column temperature 62 ℃
由表7 可知,柱温在60、58 和62℃条件下,样品均未检测到甲醇,甲醇的RSD<5.0%,符合规定。
2.8.3 进样口温度
进样口温度在200、195 和205 ℃条件下进行。
2.8.3.1 进样口195 ℃
分别吸取柱温62 ℃项下的溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL,在其他条件不变,进样口温度195 ℃条件下,注入气相色谱仪中,标准溶液重复进样5 次,记录色谱图,耐用性项下进样口195℃检测结果见表8。
表8 耐用性项下进样口195℃检测结果Table 8 Robustness testing result of injection port 195 ℃
2.8.3.2 进样口200 ℃(同柱温60 ℃)
精密称取甲醇0.046 1 g 于100 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液。
精密称取安乃近0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀。
分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL,在正常条件下,注入气相色谱仪中,标准溶液重复进样5 次,记录色谱图,耐用性项下进样口200 ℃检测结果见表9。
表9 耐用性项下进样口200 ℃检测结果Table 9 Robustness testing result of injection port 200 ℃
2.8.3.3 进样口205 ℃
精密称取甲醇0.044 7 g 于100 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液。
精密称取安乃近0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL 容量瓶中,用DMF 稀释至刻度,摇匀。
分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL,在其他条件不变,进样口205 ℃条件下,注入气相色谱仪中,标准溶液重复进样5 次,记录色谱图,耐用性项下进样口205 ℃检测结果见表10。
表10 耐用性项下进样口205 ℃检测结果Table 10 Robustness testing result of injection port 205 ℃
由表10 可知,进样口温度在200 ℃、195 ℃和205 ℃条件下,样品中均为检测到甲醇,甲醇的RSD 为0,<5.0%,符合规定。
2.9 3 批样品的测定
取3 批样品,按照2.1.1 项下描述的方法进行检测,3 批样品残留甲醇测定的结果分别为28×10-6,16×10-6,22×10-6。安乃近样品中残留甲醇含量检测结果见表11。
表11 安乃近样品中残留甲醇含量检测结果Table 11 Residual methanol content in the metamizole sodium samples
3 结 语
本文以DB-WAX 柱(30 m×0.32 mm×0.50 um),FID 检测器,在程序升温条件下进行检测安乃近残留溶剂甲醇的含量,具有操作简单、误差小,方便实验室操作的优点。使用DMF 作溶剂,溶剂峰与甲醇能很好的分离,该气相色谱法检测甲醇溶液线性关系良好,线性方程Y=171.24 x+172.72,R2=0.999 8,R=0.999 9。该方法能准确可靠的测定安乃近残留溶剂甲醇的含量,为提高安乃近产品的质量提供了保障。