甲氧西林耐药及敏感金黄色葡萄球菌快速鉴定中梅里埃VTIEK MS 质谱仪的应用价值探究

陈卉，肖海娟

南京医科大学康达学院附属涟水县人民医院检验科，江苏涟水 223400

金黄色葡萄球菌属于临床中比较常见的一种高病毒性致病菌，通过将多种细胞外毒素，如溶血素、肠毒素等释放出来，而表现出比较强的致病力[1-2]。于社区获得性感染或者医源性感染等病灶中比较常见，除此以外，软组织及皮肤感染也比较常见，也可以将其视为中毒性休克及败血症等疾病的致病菌。金黄色葡萄球菌被视为一种“超级病菌”，一旦感染后便会很难控制[3]。因此，及时且准确地对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（dumethicillinresistant staphylococcus aureus, MRSA）及甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（methicillin-sensitive staphylococcus aureus, MSSA）进行鉴定极为重要，并实时对MRSA 的流行情况展开监测，利于及时提供给临床有效的治疗方案及控制感染措施。由于质谱技术鉴定速度较快且具有极高的准确率，受到更多人的关注，且被更多医务人员广泛应用于细菌的快速鉴定及耐药性研究[4-5]。为对质谱技术的应用效果展开进一步探究，本文共从2022年1 月—2023年1 月期间于南京医科大学康达学院附属涟水县人民医院检验科接受治疗的患者中随机选择80 例作为研究对象，探究耐MRSA 及MSSA 快速鉴定中梅里埃VTIEK MS 质谱仪的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

从本院收治的骨科患者中随机选择80 例作为研究对象，均接受迪尔96L 及药敏板、梅里埃VITEK MS 质谱鉴定。男35 例，女45 例；年龄40～60岁，平均（50.25±3.17）周岁。本研究已通过本院伦理委员会审核。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①意识清晰者；②临床资料完整者；③统一加入本研究并签署知情同意书者。

排除标准：①诊疗依从性较差者；②患有严重脏器疾病者；③患有血液系统疾病者；④患有肿瘤疾病者；⑤患有传染性疾病者。

1.3 方法

分离出致病菌后，采用全自动微生物鉴定和药敏分析系统进行分析，最终确定金黄色葡萄球菌。所有样本放在温度为35℃的CO2温箱内进行孵育，孵育时间为24 h。分别给予所收集到样本同时使用DL-96llX 细菌药敏检定仪、梅里埃VITEK MS 质谱仪进行鉴定。

①挑取纯菌落，涂布靶板，加基质液，放置于梅里埃VITEK MS 质谱仪中读取，同时间观察特征峰出现的峰值，并记录。

②菌悬液制备：挑取纯培养单个菌落于稀释液瓶内壁研磨呈细菌悬液（0.5 M）。吸菌悬液50 μl，加至M-H 肉汤培养基内，充分混匀，继续加入试剂板的其余各孔[所有抗菌药物常规药敏定量试验（MIC）法测定试验孔及生长对照孔C]，100 ul∕孔。用连续移液器（配无菌移液吸头）吸取该菌悬液加入试剂板A1-A12 和B1-B10 孔内，100 ul∕孔。在A1～A3 孔分别滴加无菌石蜡油2 滴。撕开不干胶对齐贴于试剂板，35～37℃孵育24 h（个别生长缓慢者可延长至36～48 h）后判读结果，将苯唑西林MIC 值≥4∕mL 作为MRSA 判定标准，苯唑西林MIC 值≤2∕mL作为MSSA 判定标准。

③将分离后得到的金黄色葡萄球菌菌株进行编号，利用无菌滤纸将其收集好，并放置于-80°C 冰箱内冻存。

1.4 观察指标

采用布鲁克公司所提供的Clinpro Tools（3.3.0版本）软件建立模型并进行验证。建立Clinpro Tools 模型，特异峰纳入标准：所有菌株中，峰值分析分类值均超过70.00%、峰值强度超过2 000。对MRSA 及MSSA 特征图谱重合率及峰质荷比展开分析。

1.5 统计方法

采用SPSS 26.0 统计学软件对数据进行分析，计数资料采用[n(%)]表示，差异比较进行χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 梅里埃VITEK MS 质谱法与MIC 法对比

所有患者随机分离出来80 株金黄色葡萄球菌，其中MRSA 42 株（52.50%），MSSA 38 株（47.50%）。分别从分离出来的金黄色葡萄球菌中抽取MRSA 22 株、MSSA 20 株，建立ClinPro Tools 模型，按照上述纳入标准找出MRSA 主要特征峰质荷比，共找出两个，即2 305.6 Da 和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 20 株、MSSA 20 株验证该模型。比对MIC 法，结果提示特征峰1 灵敏度为78.95%，特异度为76.19%；特征峰2 灵敏度为82.35%，特异度为73.91%；联合两点灵敏度为73.91%，特异度为82.35%，见表1。

表1 梅里埃VITEK MS 质谱法与MIC 法对比

2.2 MRSA 及MSSA 质谱峰图分析

选择梅里埃VITEK MS 质谱仪分析MRSA 及MSSA 所产生的质谱仪m∕z，质谱m∕z 为322 000、263 000 即金黄色葡萄球菌特征峰，MSSA 组质谱峰m∕z在2 637 时小于MRSA 组，MRSA 质谱峰m∕z 为4 308时大于MSSA 组，菌株不同MRSA 的质谱峰稍有差异，MRSA 标本菌株来源于分泌物、血及痰；MSSA标本菌株来源于血、分泌物。见图1、图2。

图1 部分MRSA 及MSSA 在2 000～7 000 质谱峰图

图2 部分MRSA 及MSSA 在2 000～7 500 质谱峰图

3 讨论

金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌致病菌，极易诱发肺炎、化脓感染、伪膜性肠炎，甚至会诱发脓毒症及败血症等全身感染[6]。于1961年，MRSA 首次被发现，感染几乎遍及到全球，感染率也呈现出逐年增加趋势[7]。近几年，临床中由于金黄色葡萄球菌所诱发的感染性疾病逐渐增多，抗生素的应用也更加广泛，耐药菌株也日益增多，尤其是MRSA 具备多重耐药性，对临床中比较常用的抗生素，如四环素、大环内酯类、氯霉素及氨基糖苷类等均存在比较明显的耐药性[8-10]。曾有文件介绍，MRSA 对所有β 内酰胺酶药物均表现耐药[11]。值得注意的是，诱发感染的金黄色葡萄球菌不但包含MRSA，还含有MSSA，两种治疗方式并不相同，合理应用抗生素可以促使耐药菌的产生有所延缓[12-13]。既往传统诊断病原菌微生物的方式存在流程复杂及耗时长等局限性，且诊断后也会产生一定的误差概率，不仅会在判断微生物中产生差错事件，诊疗方案的制订和临床疗效的判断均会受到一定影响[14-15]。因此，对以金黄色葡萄球菌为代表的病原菌微生物诊疗方案展开制订，临床应用价值较为显著[16]。质谱技术为临床中应用最为广泛的一种优质鉴定方式，其具备通量高、敏感性高及准确率高等特点，基于蛋白质峰值的差异展开细菌判读，并将其广泛应用于食物检验及临床检验等各领域中[17]。本研究结果提示，患者随机选择分离出来80 株金黄色葡萄球菌，其中MRSA 42 株（52.50%），MSSA 38 株（47.50%）。分别从分离出来的金黄色葡萄球菌中抽取MRSA 22 株、MSSA 20 株，共找出两个MRSA主要特征峰，即2 305.6 Da 和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 20 株、MSSA 20 株验证该模型。比对MIC 法，结果提示特征峰1 灵敏度为78.95%，特异度为76.19%；特征峰2 灵敏度为82.35%，特异度为73.91%；联合两点灵敏度为73.91%，特异度为82.35%。吴文强等[18]在其研究中选择1 153 例患者作为研究对象，通过对患者体液、血液和坏死性组织样本进行检测，分离出致病菌，通过利用全自动微生物鉴定及药敏分析系统确定为金黄色葡萄球菌，利用质谱仪鉴定分析细菌，与ClinPro Tools软件建立模型联合对MRSA 及MSSA 质谱图之间的差异展开分析，结果显示，1 153 例患者共分离出100 株金黄色葡萄球菌，其中MRSA 58 株（58.00%）、MSSA 42 株（42.00%），分别从分离出来的金黄色葡萄球菌中抽取MRSA 26 株、MSSA 19株，共找出两个MRSA 主要特征峰，即2 305.6 Da和3 007.3 Da。利用其他的MRSA 32 株、MSSA 23株验证该模型。比对MIC 法，结果提示特征峰1灵敏度为71.9%，特异度为82.6%；特征峰2 灵敏度为68.8%，特异度为87%，与本研究结果相似。结果提示，质谱对MRSA、MSSA 的鉴定价值良好，灵敏度高，且特异性较好。

综上所述，MRSA 及MSSA 快速鉴定中，梅里埃VTIEK MS 质谱仪特异性更好，且灵敏度更高。