乙肝肝硬化患者血清TLRs、vWF 水平表达及与患者肝功能的关系

李翠兰，姚辉前，陈燕春

1.巨野县人民医院检验科，山东菏泽 274900；2.巨野县北城医院普外科，山东菏泽 274900；3.郓城县人民医院检验科，山东菏泽 274700

乙肝即为慢性乙型肝炎，由乙型肝炎病毒（hepadnavividae, HBV）引发，HBV 感染呈世界流行性，但不同地区HBV 感染的流行强度存在差异，病死率较高，尤其是HBV 感染相关的肝硬化患者，病死率高达30%[1-2]。乙肝肝硬化是乙肝进展的结果，分为代偿期与失代偿期，早期无明显症状，随着疾病的进展，疾病所属类型不同，临床症状也有所差异，代偿期可出现轻度乏力、食欲减退、腹胀等症状，失代偿期会存在明显的肝功能失代偿现象，对患者的生命健康造成严重威胁，所以对乙肝肝硬化患者的早期诊断尤为重要[3-4]。现阶段检查机体肝功能常用的方法为肝细胞穿刺活检法，但会对机体造成一定创伤，且对技术要求较高，临床应用受到了限制，需要寻找临床应用价值更高的可反应机体肝功能的标志物。血清单核细胞Toll 样受体（toll-like receptors, TLRs）可识别细菌、病毒等病原体相关分子模式，参与免疫、抵御微生物入侵[5-6]。血管性假血友病因子（von willebrand factor, vWF）属于多聚体糖蛋白，水平高低与机体肝功能有密切关系[7-8]。现阶段关于乙肝肝硬化患者的TLRs、vWF 水平表达及与肝功能的相关性的研究较少，本研究在此基础上选取了巨野县人民医院2020年1 月—2021年1 月诊治的26例乙肝肝硬化患者作为观察组，选取同期本院收治的26 例未发生肝硬化的乙肝患者为对照组进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择于本院诊治的26 例乙肝肝硬化患者视为观察组，选取同期本院收治的26 例未发生肝硬化的乙肝患者为对照组。观察组男16 例，女10 例；年龄40～66 岁，平均（53.24±10.17）岁；肝功能Child-Pugh 分级：A 级10 例，B 级9 例，C 级7 例。对照组男17 例，女9 例；年龄41～67 岁，平均（53.36±10.20）岁；肝功能Child-Pugh 分级：A 级11 例，B 级9 例，C 级6例。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已获得本院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①观察组经影像学、实验室检查确诊为乙肝肝硬化者；②入院前未接受过肝脏疾病治疗者；③配合度高者。

排除标准：①存在心肺功能障碍者；②存在严重感染性疾病者；③自身免疫系统障碍引起的肝脏疾病者。

1.3 方法

（1）血清TLRs[单核细胞Toll 样受体2（TLR2）、单核细胞Toll 样受体4（TLR4）]、血管性假血友病因子（vWF）水平检测方法：①血清vWF 水平检测。采集患者空腹外周静脉血5 mL，置入含柠檬酸三钠的试管中，1 500 r∕min 离心15 min，分离血清，利用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测患者vWF 水平。②血清单核细胞Toll样受体（TLR2、TLR4）水平检测方法。采集患者外周静脉血2 mL，置于抗凝管内，分别为每位患者标记A、B 两支试管，A 试管为阴性对照组，B 试管中加入聚乙烯（polyethylene, PE）标记的鼠抗人TLR2、TLR4，剂量为10 μL，加入抗原提呈细胞（antigenpresenting cells, APC）标记的抗体10 μL，然后加入100 μL 抗凝全血；利用流式细胞仪检查细胞混悬液，利用平均荧光强度几何均数表示TLRs（TLR2、TLR4）水平。

（2）肝功能分级：根据肝功能分级Child-Pugh分级标准评价患者的肝功能，包含5 个指标，总分5～15 分，分值越高，肝功能越差，A 级为分值≤6 分，B 级为分值7～9 分，C 级：10～15 分[7]。

1.4 观察指标

①比较两组的血清单核细胞Toll 样受体（tolllike receptors, TLRs)（TLR2、TLR4）、血管性假血友病因子（von willebrand factor, vWF）水平。

②比较观察组不同肝功能分级患者的血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平。

③分析乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平和肝功能的之间的关系。

1.5 统计方法

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据处理，符合正态分布的计量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以[n(%)]表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比较

观察组血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比较(±s)

表1 两组患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比较(±s)

组别观察组（n=26）对照组（n=26）t 值P 值TLR2（%）72.41±4.66 42.61±4.50 23.456＜0.001 TLR4（%）82.34±5.66 69.40±5.71 8.207＜0.001 vWF（ng∕mL）32.59±2.25 18.51±2.44 21.631＜0.001

2.2 观察组不同肝功能分级患者的血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比较

观察组26 例乙肝肝硬化患者，经肝功能分级Child-Pugh 分级标准评价显示，肝功能A 级10 例（38.46%），B 级9 例（34.62%），C 级7 例（26.92%），A级乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF水平及Child-Pugh 评分低于C 级、B 级，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 观察组不同肝功能分级患者的血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比较(±s)

表2 观察组不同肝功能分级患者的血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比较(±s)

注：与A 级相比，*P＜0.05；与B 级相比，△P＜0.05

肝功能分级A 级（n=10）B 级（n=9）C 级（n=7）F 值P 值TLR2（%）61.26±4.22（74.36±4.37）*（88.52±5.69）*△69.832＜0.001 TLR4（%）71.20±6.55（83.69±6.29）*（102.31±8.97）*△38.668＜0.001 vWF（ng∕mL）22.31±2.09（34.19±2.16）*（45.22±2.37）*△228.922＜0.001 Child-Pugh 评分（分）4.11±0.32（8.01±0.65）*（12.14±1.08）*△272.319＜0.001

2.3 乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平和肝功能的之间的关系分析

肝功能A 级、B 级、C 级与血清TLRs（TLR2、TLR4）均呈正相关（P＜0.05）。见表3。

表3 乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平和肝功能的之间的关系分析

2.4 乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平评价肝功能的效能分析

血清TLR2 的AUC、敏感度、特异度分别为1.000、100.00%、100.00%，TLR4 的AUC、敏感度、特异度分别为0.953、92.30%、92.30%，vWF 的AUC、敏感度、特异度分别为1.000、100.00%、100.00%，见表4。

表4 乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平评价肝功能的效能

3 讨论

本研究结果显示，观察组TLR2（72.41±4.66）% 、TLR4（82.34±5.66）% 水平高于对照组（42.61±4.50）%、（69.40±5.71）%（P＜0.05），A 级乙肝肝硬化患者TLR2、TLR4 水平及Child-Pugh 评分低于C 级、B 级（P＜0.05），证实了TLR2、TLR4与乙肝肝硬化患者肝功能损伤有密切关系，与机体的肝功能损伤程度呈正相关。阿迪莱·图尔荪尼亚孜等[9]学者的研究中乙肝肝硬化组的TLR2、TLR4 分别为（73.09±7.89）% 、（83.57±10.23）%，高于正常对照组的（42.52±5.69）%、（68.11±9.26）%（P＜0.05），认为血清TLR2、TLR4与乙肝肝硬化患者的肝功能状态存在密切联系，与本研究观点一致。分析原因：血清TLRs 可激活机体内的炎症介质，如白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α, TNF-α）等。TLR2、TLR4 属于TLRs，均存在于细胞表面，被激活后可发生迁移，且TLR2能够识别脂多肽等配体[10-11]。且TLR4 与TLR2具有相似的识别病原菌的功能，同时还能识别病原菌的核酸，另外可刺激体外经分离的外周单个核细胞，使其分泌大量IL-6、TNF-α 等促炎因子，引起机体的炎症反应，加重乙肝肝硬化患者的肝功能异常程度，因此可发现TLR2、TLR4与机体的肝功能损伤程度呈正相关[12-13]。而血清TLR2 的AUC、敏感度、特异度分别为1.000、100.00%、100.00%，TLR4 的AUC、敏感度、特异度分别为0.953、92.30%、92.30%，反应了血清TLR2、TLR4 评估肝功能状态的可靠性。

观察组vWF 水平高于对照组，A 级乙肝肝硬化患者vWF 水平及Child-Pugh 评分低于C 级、B 级（P＜0.05），随着乙肝肝硬化等级的升高，vWF 水平也随之升高，反应了乙肝肝硬化患者的vWF 水平会异常升高，且其水平变化与机体肝功能损伤程度呈正相关。庄焱等[14]学者的研究中，急性肝病患者的vWF水平为158.30～194.10 ng∕mL，慢性肝病组的为vWF水平为185.30～235.35 ng∕mL，认为vWF 可用于评估不同类型肝病患者的肝功能状态，慢性肝病患者的vWF 水平高于急性肝病毒患者，与本研究观点有相似之处。分析原因：vWF 属于一种超大分子的糖蛋白，来源于血管内皮细胞，可参与机体炎症的发生、组织的损伤等病理生理过程，当机体肝脏发生病变时，由于肝炎病毒、细菌衍生物、内毒素等因素的共同作用，内皮细胞发生活化、损伤，导致其分泌vWF的水平增加，所以可得出vWF 水平升高代表机体的乙肝肝硬化等级升高[15]。而经绘制ROC 曲线发现，vWF 的AUC、敏感度、特异度分别为1.000、100.00%、100.00%，说明了vWF 在反应乙肝肝硬化患者肝功能时的可靠性。

综上所述，乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平会有所升高，且随着肝脏损伤程度的加剧，其水平会随之升高。