分散固相萃取法-气相色谱-质谱法测定含叶绿素较多蔬菜中148种农残化合物

摘 要：本实验采用分散固相萃取方法对含叶绿素较多的绿色蔬菜进行前处理，并利用气相色谱-质谱法同时测定148种农药化合物。结果表明，148种农药化合物在5～200 ng·mL-1浓度下线性关系良好，相关系数在0.988 5～0.999 6，回收率在60.7%～129.1%，相对标准偏差为2.1%～12.8%。

关键词：分散固相萃取法；农药化合物；回收率；菠菜

Abstract： In this study， dispersive solid phase extraction was used to pretreat green vegetables with high chlorophyll content， and 148 pesticide compounds were determined by gas chromatography-mass spectrometry. The results showed that 148 pesticide compounds had good linear relationships at 5～200 ng·mL-1 concentrations， the correlation coefficients were 0.988 5～0.999 6， the recoveries were 60.7%～129.1%， and the relative standard deviations were 2.1%～12.8%.

Keywords： dispersed solid phase extraction; pesticide residues; rate of recovery; spinach

农药残留是评价食品安全与否的重要指标，但农药的使用也是保证农业增产增收的重要手段[1]。农作物的病害虫害多样而复杂，这就需要使用不同功效的农药进行防治。而为了降低种植过程中农药的喷施成本，现代农药多采用复配技术，通过一次喷洒来实现防治多种病虫害的效果[2-3]。为确保食品安全，需要对农药残留检测方法提出更高的要求[4]。气相色谱-质谱法因灵敏度高、分离选择性效果好而被广泛应用于农药残留检验中[5]。但由于复配农药成分复杂，在同时检测多组分农药残留时，还要去除基质干扰，确保多种化合物同时满足其标准曲线现行要求及准确性的要求，所以前处理方法的选择显得尤为重要[6]。在上机检测前，需要通过前处理手段对试样进行提取、净化等前处理，然后再上机检测[7]。分散固相萃取法由于具有对农药化合物回溶性好、不需要活化处理、操作简单等优点，被广泛用于前处理过程中[8-9]。为考察分散固相萃取法对消除样品基质干扰的有效性，本实验选取叶绿素含量较高的菠菜作为空白基质，采用QuEChERS前处理方法，通过加标回收实验，对拟除虫菊酯、有机磷、氨基甲酸酯、有機氯等148种农药残留检测结果的线性相关性、回收率和准确度进行研究。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

菠菜，市售。

提取盐（4 g MgSO4、1 g柠檬酸钠、1 g NaCl、0.5 g柠檬酸氢二钠）；净化试剂（900 mg MgSO4、150 mg D18C、150 mg乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶）；乙腈（色谱纯）；乙酸乙酯（色谱纯）；0.22 μm尼龙滤膜。

1.2 仪器设备

岛津GCMS-TQ8050气相色谱串联质谱仪，日本岛津公司；BSA124S-CW分析天平（感量0.000 1 g），德国赛多利斯；N1型氮吹仪，屹尧科技；Heraeus Multifuge X1R离心机，赛默飞世尔科技有限公司；A11型匀浆器，德国IKA。

1.3 标准溶液配制

1.3.1 混合标准中间液（1.0 μg·mL-1）

准确吸取10 μg·mL-1的混合标准溶液0.50 mL于5 mL容量瓶，加入乙酸乙酯溶解，稀释至刻线处，配制成浓度为1.0 μg·mL-1的农药化合物混合标准中间液。

1.3.2 内标溶液的配制

（1）环氧七氯内标标准贮备液（1.0 mg·mL-1）。准确称取环氧七氯10.00 mg标准品于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，稀释至刻度，配制成浓度为1.0 mg·mL-1的环氧七氯内标标准贮备液。

（2）环氧七氯内标使用液（5.0 μg·mL-1）。准确移取1.0 mg·mL-1环氧七氯内标标准贮备液0.050 mL于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，配制成浓度为5.0 μg·mL-1的环氧七氯内标使用液。

1.3.3 混合标准曲线溶液的制备

准确移取0.05 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL和2.00 mL的混合标准中间液（1.0 μg·mL-1），用乙酸乙酯定容至10 mL的容量瓶中，配成5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的混合标准系列工作液。

1.3.4 基质标准曲线的制备

准确移取以上各浓度标准系列工作液1 mL，添加至经提取、净化、氮气吹干步骤处理的5份空白样品残渣中，再加入浓度为5.0 μg·mL-1的环氧七氯内标使用液20 μL，涡旋均匀，制得浓度分别为5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的系列基质标准溶液。

以经内标物定量离子峰面积校正过的化合物定量离子峰面积为纵坐标、混合标准溶液质量浓度和内标物质量浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线。

1.4 前处理（QuEChERS法）

称取10 g均质后试样于50 mL塑料离心管中（精确至0.01 g），加入10 mL乙腈、4 g MgSO4、1 g柠檬酸钠、1 g NaCl、0.5 g柠檬酸氢二钠及1颗陶瓷均质子，剧烈振荡1 min，4 200 r·min-1离心5 min。取上清液6 mL，加到内含900 mg MgSO4、150 mg D18C、150 mg乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶的离心管中。涡旋1 min，4 200 r·min离心5 min，准确吸取1 mL上清液于试管中，40 ℃下水浴氮吹至近干。加入20 μL浓度为5 μg·mL-1的环氧七氯内标使用液，1 mL乙酸乙酯复溶，涡旋，过微孔滤膜，用于测定。

1.5 仪器条件

1.5.1 色谱条件

色谱柱：SH-Rtx-1701（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱温：40 ℃保持1 min；以40 ℃·min-1升温至120 ℃，保持0 min；以5 ℃·min-1升温至240 ℃，保持0 min；以12 ℃·min-1升温至300 ℃，保持10 min；进样口温度：280 ℃；载气速率（高纯氦气）：36.1 cm·s-1恒线速。

1.5.2 质谱条件

接口温度：280 ℃；离子源温度：230 ℃；离子源：EI源；扫描方式MRM[10]；进样量：1 μL。

1.6 回收率及精密度实验方法

准确称取5.000 g样品6份，分别加入混合标准中间液（1.0 μg·mL-1）0.10 mL，经过提取、QuEChERS净化过程，同样品处理，进样，测定回收率，计算RSD值。

2 结果与分析

148种化合物标准曲线、线性相关性、加标回收率及RSD值结果见表1。

由表1可知，标准曲线线性相关性均满足实验要求，148种化合物的曲線方程的相关系数均达到0.98的要求。其中，141种化合物曲线方程的相关系数≥0.995 0；8种化合物的相关系数在0.988 5～0.994 7。

148种化合物的加标回收率在60.7%～129.1%，其中8种化合物的加标回收率在60.7%～78.7%，占比较少，回收率最低值为60.7%；97种化合物的回收率在81.9～110%，回收效果好；31种化合物的回收率在110.1%～119.5%，回收率处在高水平，可以考虑为萃取成分带来的干扰和影响所致；12种化合物的回收率超过了120%，超出回收率误差范围，会给实验结果准确性带来影响，这12种化合物中（二溴磷、对氧磷、抑霉唑、地胺磷、硫环磷、苯草醚、三氟硝草醚、苯硫磷、哒嗪硫磷、氟丙菊酯、速灭磷和脱叶磷），有7种为有机磷化合物，可见该前处理法对部分磷基化合物的回收率有偏高影响。

148种化合物的精密度在2.1%～12.8%，RSD值较小，结果重现性好。

3 结论

通过结果分析发现，分散固相萃取前处理方法在提取方面克服了固相萃取法的强吸附、不易洗脱的缺点；但对少部分有机磷成分存在一定的干扰性。结合《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB 27404—2008）要求，该前处理方法适用于蔬菜中多农药残留化合物检验。

参考文献

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基金项目：辽宁省检验检测认证中心青年人才创新创业项目（SC20190117）。