LncRNA DSCAM-AS1 调控miR-433-3p 对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响*

2023-07-03赵轶峰李明霞张超胡小敏王雄赵铁军

肿瘤预防与治疗 2023年5期

赵轶峰，李明霞，张超，胡小敏，王雄，赵铁军

075000 河北张家口，河北北方学院附属第一医院胃肠肿瘤外科（赵轶峰、胡小敏、王雄），内分泌科（李明霞），介入科（张超）；075000 河北张家口，河北北方学院生命科学研究中心（赵铁军）

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率较高，严重威胁着人类健康和生命［1］。随着医疗技术的发展，人类在胃癌的诊断和治疗方面取得了一定的进展，然而有关胃癌发病机制目前尚不清楚。肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移等恶性生物学行为是癌症发生发展的主要原因之一，分析与胃癌细胞恶性生物学行为的有关机制，可能为胃癌的生长、发展机制的研究提供理论基础。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）含有微小RNA（microRNA，miRNA）反应原件，通过调控miRNA 的表达参与肿瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡等多种生物学过程［2-3］。研究表明lncRNA 唐氏综合征细胞黏附分子反义1（Down syndrome cell adhesion molecule antisense 1，DSCAM-AS1）可促进前列腺癌的发展［4］。生物信息学分析预测显示，lncRNA DSCAM-AS1 与微小RNA-433-3p（microRNA-433-3p，miR-433-3p）具有靶向关系，miR-433-3p 可能是lncRNA DSCAM-AS1的靶miRNA。miRNA 是一类进化上保守的非编码小分子RNA，参与细胞的增殖、凋亡、迁移和分化等多种生理病理过程［5］。针对miR-433-3p的研究发现，miR-433-3p 与胃癌、结肠癌等消化道肿瘤的发生、发展有关［6-7］。然而，lncRNA DSCAM-AS1 是否能通过调控miR-433-3p 参与胃癌的发生和发展尚不清楚。因此，本研究旨在探讨lncRNA DSCAM-AS1 能否通过调控miR-433-3p 影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭，为进一步明确胃癌的发病机制提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 样本采集收集河北北方学院附属第一医院胃肠肿瘤外科2019 年至2021 年手术切除后的56 例胃癌患者［22 名女性和34 名男性，年龄（53.4±7.2）岁］的胃癌组织和成对的邻近正常组织。患者在手术前未接受任何放疗、化疗或其他治疗。组织在液氮中速冻并储存在-80℃下用于进一步实验。本研究经河北北方学院附属第一医院伦理委员会批准（批准文号：20190112004）。所有患者均签署书面知情同意书。

1.1.2 细胞株人胃癌细胞系BGC-823（批号：bio-105908）、MGC-803、AGS、SGC-7901 和人正常胃上皮细胞系GES-1 购自上海弘顺生物科技有限公司。

1.1.3 主要试剂 LncRNA DSCAM-AS1 小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA阴性对照、miR-433-3p、miR-433-3p 阴性对照、miR-433-3p siRNA 均由北京密码子生物科技有限公司设计合成；RPMI-1640 培养基（批号：31825）、胎牛血清（批号：39127）、胰蛋白酶（批号：60138）、实时荧光定量PCR（real-time quantitative reverse transcription PCR，qRT-PCR）试剂盒（批号：216213）均购自美国Gibco 公司；RNA 提取试剂盒（批号：9108Q）购自广州吉赛生物科技有限公司；反转录试剂盒（批号：SR205311）、CCK-8 试剂盒（批号：C13079）、结晶紫染液（批号：CP16174）、山羊抗兔二抗（批号：CN-10634）均购自德国QIAGEN 公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒（批号：DL1107K）、蛋白提取试剂盒（批号：DL1923K）均购自北京索莱宝科技有限公司；羊抗兔增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）（批号：S13110）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2（批号：S40994）、MMP-9（批号：S13667）多克隆抗体均购自美国CST 公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养与处理常规复苏胃癌细胞系BGC-823、MGC-803、AGS、SGC-7901 和人正常胃上皮细胞系GES-1，加至含10%胎牛血清的RPMI-1640 培养液中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。隔天换液，细胞融合度达到80%左右，胰蛋白酶消化传代。

1.2.2 细胞转染及分组构建重组质粒lncRNA DSCAMAS1 siRNA（沉默lncRNA DSCAM-AS1）、lncRNA DSCAMAS1 siRNA 阴性对照、miR-433-3p（miR-433-3p 过表达）、miR-433-3p 阴性对照、miR-433-3p siRNA（沉默miR-433-3p）。验证成功后，将lncRNA DSCAMAS1 siRNA、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 阴性对照、miR-433-3p、miR-433-3p 阴性对照和miR-433-3p siRNA 片段酶切，转入慢病毒载体pCDH-CMVMCS-EF1-copGFP，并用293T 细胞进行包装，然后收集、浓缩病毒，进一步定量。慢病毒转染前24 h，收集1.2.1 中BGC-823 细胞，调整细胞数目为1×105个/孔接种至6 孔板中，次日加入嘌呤霉素，2 h 后，分别加入制备好的病毒。实验一：探究沉默lncRNA DSCAM-AS1 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移的影响：将BGC-823 细胞分为对照组（仅添加新鲜培养基）、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 阴性对照组（转染lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 阴性对照）、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 组（转染lncRNA DSCAM-AS1 siRNA）。实验二：探究过表达miR-433-3p 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移的影响：将BGC-823 细胞分为对照组（仅添加新鲜培养基）、miR-433-3p 阴性对照组（转染miR-433-3p阴性对照）、miR-433-3p 组（转染miR-433-3p）。实验三：验证沉默lncRNA DSCAM-AS1 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移的影响机制：将BGC-823 细胞分为lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 组（转染lncRNA DSCAMAS1 siRNA）、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA + miR-433-3p 阴性对照组（转染lncRNA DSCAM-AS1 siRNA和miR-433-3p 阴性对照）、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA + miR-433-3p siRNA 组（转染lncRNA DSCAMAS1 siRNA 和miR-433-3p siRNA）。每组均设8 个平行样。培养48 h 后，更换培养基，再继续培养24 h，荧光显微镜观察，细胞呈现绿色荧光为转染成功。

1.2.3 qRT-PCR 法检测组织/BGC-823 细胞中lncRNA DSCAM-AS1、miR-433-3p 表达 RNA 提取试剂盒提取胃癌组织和邻近正常组织以及BGC-823 细胞中RNA，反转录试剂盒将RNA 反转录为cDNA，之后进行qRT-PCR 反应，反应条件为：95 ℃预变性，1 min；然后45 个循环（95 ℃变性，10 s；60 ℃退火，20 s；70℃延伸，10 s）。lncRNA DSCAM-AS1 以GAPDH 为内参基因，miR-433-3p 以U6 为内参基因，引物由北京密码子生物科技有限公司设计合成，采用2-ΔΔCt法计算BGC-823 细胞中lncRNA DSCAM-AS1、miR-433-3p的相对表达量。引物设计见表1。

表1 引物序列Table 1．Primer Sequences

1.2.4 CCK-8 法检测BGC-823 细胞活性收集1.2.2中各组BGC-823 细胞，调整细胞数目为1×104个/孔接种至96 孔板中，37℃、5% CO2培养箱中培养48 h，每孔加入10 μL CCK-8 试剂，37℃避光培养2 h，弃上清，酶标仪450 nm 波长处检测每孔吸光度（optical density，OD）值，计算细胞活力（%） = （实验组OD 值/对照组OD 值）×100%。

1.2.5 Transwell 法检测BGC-823 细胞侵袭和迁移侵袭实验：收集1.2.2 中各组BGC-823 细胞，无血清培养液稀释细胞浓度至1×106个/mL，吸取100 μL加至铺有Matrigel 基质胶的Transwell 小室上室，下室加入600 μL 含胎牛血清的RPMI-1640 培养基，37 ℃，5% CO2孵育箱中培养24 h，倒掉上室培养液，棉签擦去未迁移细胞和多余的Matrigel 基质胶，无水甲醇固定，结晶紫染色，光镜下计数滤膜底面每视野的平均细胞数。迁移实验：Transwell 小室上室不铺Matrigel 基质胶，其余步骤同细胞侵袭实验。

1.2.6 双荧光素酶报告实验检测lncRNA DSCAMAS1与miR-433-3p的靶向关系 Starbase数据库（http://starbase.sysu.edu.cn/index.php）显示lncRNA DSCAMAS1 的3′UTR 含有与miR-433-3p 的结合位点（chr21:41756690-41756711），对含结合位点lncRNA DSCAMAS1 区域进行扩增，并连至pGL4 质粒，构建lncRNA DSCAM-AS1 野生型（lncRNA DSCAM-AS1-Wt）质粒；以此质粒对模板进行定点缺失突变，测序确定突变成功，构建lncRNA DSCAM-AS1 突变型（lncRNA DSCAM-AS1-Mut）质粒。

测序验证成功的重组质粒lncRNA DSCAM-AS1-Wt和lncRNA DSCAM-AS1-Mut 重组质粒，分别与miR-433-3p 阴性对照、miR-433-3p 共转染至胃癌BGC-823细胞中，分为：lncRNA DSCAM-AS1-Wt + miR-433-3p阴性对照组、lncRNA DSCAM-AS1-Wt + miR-433-3p组、lncRNA DSCAM-AS1-Mut + miR-433-3p 阴性对照组、lncRNA DSCAM-AS1-Mut + miR-433-3p 组。各组设置8 个重复。利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组荧光素酶相对活性，严格按照试剂盒说明书进行实验操作。

1.2.7 RNA 结合蛋白免疫沉淀（RNA-binding protein immunoprecipitation， RIP）测定使用含有RNase抑制剂的RIPA 缓冲液裂解BGC-823 细胞，将裂解物以12 000 g 离心30 min 收集上清液。将上清液与Ago2或IgG抗体包被的磁珠一起孵育过夜。然后，加入蛋白酶K 以消化蛋白质，并使用TRIzol 试剂分离免疫沉淀的RNA，通过qRT-PCR 检测免疫沉淀中lncRNA DSCAM-AS1 和miR-433-3p 水平。

1.2.8 蛋白免疫印迹法检测BGC-823 细胞中增殖、侵袭和迁移蛋白（PCNA、MMP-2、MMP-9）的表达收集1.2.2 中各组BGC-823 细胞，调整细胞浓度为5×104个/mL，每孔100 μL 加至24 孔板中，弃上清，PBS 洗涤，蛋白提取试剂盒提取细胞总蛋白并检测蛋白浓度，之后进行电泳，电泳结束后将蛋白转移封闭；分别加入一抗稀释液PCNA、MMP2、MMP9、β-actin，均为1 : 1 000 稀释，4 ℃孵育过夜，TBST 洗膜，加入山羊抗兔二抗稀释液（1 : 2 000 稀释），室温孵育1 h，TBST 洗膜。蛋白凝胶成像仪成像，Image J软件分析蛋白表达水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS 25.0 进行数据统计分析，计量资料采用均数±标准差（）描述，两组间比较采用t检验，通过Pearson 相关性分析胃癌组织中lncRNA DSCAM-AS1 和miR-433-3p 之间的相关性，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q 检验。以P＜ 0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 LncRNA DSCAM-AS1 和miR-433-3p 在胃癌组织中的表达及相关性

与邻近正常组织相比，胃癌组织中lncRNA DSCAM-AS1 表达水平显著升高，而miR-433-3p 表达水平显著降低（P＜ 0.01；表2）。Pearson 相关性分析结果显示，胃癌患者癌组织中lncRNA DSCAMAS1 的表达水平与miR-433-3p 的水平呈负相关（r= -0.766，P＜ 0.01；图1）。此外，与人正常胃上皮细胞系GES-1 相比，胃癌细胞系（BGC-823、MGC-803、AGS、SGC-7901）中lncRNA DSCAM-AS1 表达水平显著升高，miR-433-3p 表达水平显著降低（P＜0.05），其中BGC-823 细胞中lncRNA DSCAM-AS1表达水平显著高于其他胃癌细胞，miR-433-3p 水平显著低于其他胃癌细胞，故选择BGC-823 细胞进行后续实验（表3）。

图1 胃癌组织中lncRNA DSCAM-AS1 和miR-433-3p 表达水平的相关性Figure 1．Correlation between the Expression Levels of LncRNA DSCAM-AS1 and miR-433-3p in Gastric Cancer Tissue

表2 LncRNA DSCAM-AS1 和miR-433-3p 在胃癌组织中的表达（N = 56，±s）Table 2．Expressions of LncRNA DSCAM-AS1 and miR-433-3p in Gastric Cancer Tissue（N = 56，±s）

aP ＜ 0.05，compared to adjacent normal tissue.

表3 LncRNA DSCAM-AS1 和miR-433-3p 在胃癌细胞中的表达（N = 8，±s）Table 3．Expressions of LncRNA DSCAM-AS1 and miR-433-3p in Gastric Cancer Cells（N = 8，±s）

aP ＜ 0.05，compared to GES-1 cells； bP ＜ 0.05，compared to BGC-823 cells.

2.2 沉默lncRNA DSCAM-AS1 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移以及PCNA、MMP-2、MMP-9 蛋白表达的影响

对照组和lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 阴性对照组相比，lncRNA DSCAM-AS1、miR-433-3p、细胞活力、细胞侵袭和迁移数目、PCNA、MMP-2、MMP-9 表达水平的差异无统计学意义（P＞ 0.05）；与对照组和lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 阴性对照组比较，lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 组lncRNA DSCAM-AS1、细胞活力、细胞侵袭和迁移数目、PCNA、MMP-2、MMP-9 蛋白表达水平显著降低（P＜ 0.05），miR-433-3p 表达水平显著升高（P＜ 0.05；表4、图2、3）。

图2 对照组、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 阴性对照组、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 组BGC-823 细胞侵袭和迁移图（结晶紫染色，×200）Figure 2．Invasion and Migration of BGC-823 Cells in the Control Group, lncRNA DSCAM-AS1 siRNA Negative Control Group, and LncRNA DSCAM-AS1 siRNA Group (Crystal Violet Staining, ×200）

图3 对照组、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 阴性对照组、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 组BGC-823 细胞PCNA、MMP-2、MMP-9 蛋白印迹图Figure 3. Protein Blotting of PCNA, MMP-2 and MMP-9 in BGC-823 Cells in the Control Group, LncRNA DSCAM-AS1 siRNA Negative Control Group, and LncRNA DSCAM-AS1 siRNA Group

表4 沉默lncRNA DSCAM-AS1 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移以及PCNA、MMP-2、MMP-9 表达的影响（N = 8，±s）Table 4．Effects of Silencing LncRNA DSCAM-AS1 on the Proliferation， Invasion， and Migration of BGC-823 Cells， and on the Expressions of PCNA， MMP-2 and MMP-9（N = 8，±s）

aP ＜ 0.05，compared to the control group； bP ＜ 0.05，compared to the lncRNA DSCAM-AS1 siRNA negative control group.PCNA: Proliferating cell nuclear antigen ； MMp-2：Matrix metalloproteinase-2；MMP-9 : Matrix metalloproteinase-9.

2.3 过表达miR-433-3p 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移以及PCNA、MMP-2、MMP-9 蛋白表达的影响

对照组和miR-433-3p 阴性对照组相比，lncRNA DSCAM-AS1、miR-433-3p、细胞活力、细胞侵袭和迁移数目、PCNA、MMP-2、MMP-9 蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞ 0.05）；与对照组和miR-433-3p阴性对照组比较，miR-433-3p 组lncRNA DSCAMAS1 表达水平差异无统计学意义（P＞ 0.05），miR-433-3p 表达水平显著升高（P＜ 0.05），细胞活力、细胞侵袭和迁移数目、PCNA、MMP-2、MMP-9 表达水平显著降低（P＜ 0.05；表5、图4、5）。

图4 对照组、miR-433-3p 阴性对照组、miR-433-3p 组BGC-823 细胞侵袭和迁移图（结晶紫染色，×200）Figure 4．Invasion and Migration of BGC-823 Cells in the Control group, miR-433-3p Negative Control Group, and miR-433-3p Group (Crystal Violet Staining, ×200）

图5 对照组、miR-433-3p 阴性对照组、miR-433-3p 组BGC-823 细胞PCNA、MMP-2、MMP-9 蛋白印迹图Figure 5．Protein Blotting of PCNA, MMP-2 and MMP-9 in BGC-823 Cells in the Control Group, miR-433-3p Negative Control Group, and miR-433-3p Group

表5 过表达miR-433-3p 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移以及PCNA、MMP-2、MMP-9 表达的影响（N = 8，±s）Table 5．Effects of Overexpression of miR-433-3p on the Proliferation， Invasion and Migration of BGC-823 Cells， and on the Expressions of PCNA， MMP-2 and MMP-9（N = 8，±s）

aP ＜ 0.05，compared to the control group； bP ＜ 0.05， compared to the miR-433-3p negative control group.Abbreviations as indicated in Table 4.

2.4 LncRNA DSCAM-AS1 靶向调控miR-433-3p基因的关系验证

Starbase 数据库（http://starbase.sysu.edu.cn/index.php）预测结果表明，lncRNA DSCAM-AS1 基因3'UTR 区有miR-433-3p 的结合位点，位于lncRNA DSCAM-AS1（chr21:41756690-41756711）区域（图6）。荧光素酶报告实验结果表明，与lncRNA DSCAMAS1-Wt + miR-433-3p 阴性对照组比较，lncRNA DSCAM-AS1-Wt + miR-433-3p 组荧光素酶相对活性显著降低（P＜ 0.05）；lncRNA DSCAM-AS1-Wt + miR-433-3p 阴性对照组、lncRNA DSCAM-AS1-Mut + miR-433-3p 阴性对照组、lncRNA DSCAM-AS1-Mut + miR-433-3p 组荧光素酶相对活性差异无统计学意义（P＞ 0.05；表6）。RIP 检测结果显示，相对于lgG，lncRNA DSCAM-AS1 和miR-433-3p 在Ago2 免疫沉淀中显著富集（P＜ 0.05；图7）。

图6 LncRNA DSCAM-AS1 靶向调控miR-433-3pFigure 6．Targeted Regulation of miR-433-3p by LncRNA DSCAM-AS1

图7 circPTK2 和miR-761 可被Ago2 抗体沉淀（RIP 实验）Figure 7. circPTK2 and miR-761 Can be Precipitated by Ago2 Antibody (RIP）

表6 各组荧光素酶相对活性比较（N = 8，±s）Table 6．Relative Activity of Luciferase in Each Group（N = 8，±s）

aP ＜ 0.05，compared to the lncRNA DSCAM-AS1-Wt + miR-433-3p negative control group.

2.5 抑制miR-433-3p 表达可逆转沉默lncRNA DSCAM-AS1 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移以及PCNA、MMP-2、MMP-9 表达的抑制作用

LncRNA DSCAM-AS1 siRNA 组和lncRNA DSCAMAS1 siRNA + miR-433-3p 阴性对照组lncRNA DSCAMAS1、miR-433-3p、细胞活力、细胞侵袭和迁移数目、PCNA、MMP-2、MMP-9 表达水平差异无统计学意义（P＞ 0.05）；与lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 组和lncRNA DSCAM-AS1 siRNA+miR-433-3p 阴性对照组比较，lncRNA DSCAM-AS1 siRNA+miR-433-3p siRNA 组lncRNA DSCAM-AS1 表达水平差异无统计学意义（P＞ 0.05），miR-433-3p 表达水平显著降低（P＜ 0.05），细胞活力、细胞侵袭和迁移数目、PCNA、MMP-2、MMP-9 表达水平显著升高（P＜ 0.05；表7、图8、9）。

图8 各组组BGC-823 细胞侵袭和迁移图Figure 8．Invasion and Migration of BGC-823 Cells in Each Group

图9 各组PCNA、MMP-2、MMP-9 蛋白印迹图Figure 9．Protein Blotting of of PCNA, MMP-2 and MMP-9 in Each Group

表7 抑制miR-433-3p 表达可逆转沉默lncRNA DSCAM-AS1 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移以及PCNA、MMP-2、MMP-9 表达的抑制作用（N = 8，±s）Table 7．Inhibition of miR-433-3p Expression Can Reverse the Inhibitory Effect of Silencing LncRNA DSCAM-AS1 on the Proliferation， Invasion and Migration of BGC-823 Cells， and on the Expressions of PCNA， MMP-2 and MMP-9（N = 8，±s）

aP ＜ 0.05，compared to the lncRNA DSCAM-AS1 siRNA group； bP ＜ 0.05，compared to the lncRNA DSCAM-AS1 siRNA + miR-433-3p negative control group.Abbreviations as indicated in Table 4.

3 讨论

LncRNA DSCAM-AS1 位于21q22.2，属于细胞黏附分子的免疫球蛋白超家族，以往研究表明lncRNA DSCAM-AS1 在多种人类癌症中起重要作用［8-9］。Lu等［10］研究表明，结肠癌组织和细胞系HCT8、HT-29、SW480 及Lovo 中lncRNA DSCAM-AS1 的表达分别显著高于癌旁组织和正常人结肠上皮细胞系NCM460，且lncRNA DSCAM-AS1 表达与结肠癌患者临床肿瘤分期、淋巴结转移有关，lncRNA DSCAM-AS1 高表达患者总体生存率相对较差。本研究发现，lncRNA DSCAMAS1 在胃癌组织和细胞中呈高表达，沉默lncRNA DSCAM-AS1 的表达能够抑制胃癌BGC-823 细胞的增殖、侵袭和迁移，提示lncRNA DSCAM-AS1 可能与胃癌的发生、发展有关。

miRNA 是一类非编码小分子RNA，具有转录后调控基因表达的功能，是参与细胞生长、分化、发育和凋亡各种细胞活动的调节因子［11-12］。以往研究表明，肿瘤细胞内miRNA 的异常表达，使下游靶蛋白调控障碍，从而促进肿瘤的发生，并与肿瘤复发、肿瘤的恶性程度和临床分期、分级，组织浸润等病理特征有关［13-15］。miR-433-3p 是一种具有显著抗肿瘤作用的miRNA，Jin 等［16］研究表明miR-433-3p 在非小细胞肺癌细胞中呈低表达，过表达miR-433-3p 会抑制非小细胞肺癌的肿瘤生长。马文飚等［17］研究显示，甲状腺癌组织中miR-433-3p 呈低表达，过表达miR-433-3p 可使甲状腺癌SW579 细胞恶性生物学行为受到抑制。Sun 等［18］研究表明神经胶质瘤组织和细胞U251、U87 中miR-433-3p 表达显著降低，且miR-433-3p 能够抑制U251、U87 细胞的增殖、侵袭和迁移。本研究结果发现，miR-433-3p 在胃癌组织中呈低表达，过表达miR-433-3p 显著抑制胃癌BGC-823 细胞的增殖、侵袭和迁移，提示miR-433-3p可能与胃癌的发生有关。

肿瘤细胞的增殖和侵袭是导致癌症发生、发展的重要原因，PCNA 与细胞DNA 合成密切相关，在细胞增殖的启动上有重要作用，可作为评价细胞增殖状态的指标［19］。MMP 属于锌依赖性肽链内切酶家族，参与细胞外基质中蛋白质的降解和血管生成，促进细胞的增殖、迁移和侵袭，与肿瘤的发生有关［20］。本研究发现，miR-433-3p 过表达后，BGC-823细胞中PCNA、MMP-2、MMP-9 表达水平显著降低，进一步提示miR-433-3p 可能通过抑制BGC-823 细胞的增殖、侵袭和迁移，进而影响胃癌的发生发展，具体机制有待进一步研究。

lncRNA 能够通过调节miRNA 的表达从而参与人类癌症的进展，Yu 等［9］研究表明lncRNA DSCAM-AS1 通过靶向调控miR-101 的表达促进骨肉瘤细胞SAOS2、U2OS的增殖和迁移。本研究发现，miR-433-3p 的表达与胃癌组织中lncRNA DSCAMAS1 的表达呈负相关，抑制lncRNA DSCAM-AS1 的表达能够促进miR-433-3p 的表达，进一步双荧光素酶实验和RIP 结果表明lncRNA DSCAM-AS1 与miR-433-3p 具有靶向关系，提示lncRNA DSCAMAS1 能够靶向负调控miR-433-3p 的表达。对BGC-823 细胞进行lncRNA DSCAM-AS1 siRNA 和miR-433-3p siRNA 共转染，结果发现共转染的BGC-823细胞活力、侵袭和迁移细胞数目以及PCNA、MMP-2、MMP-9 表达水平均高于lncRNA DSCAM-AS1 siRNA组，提示抑制miR-433-3p 的表达可能逆转沉默lncRNA DSCAM-AS1 对BGC-823 细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用，进一步说明lncRNA DSCAM-AS1可能通过靶向调控miR-433-3p 的表达，影响BGC-823 细胞的增殖、侵袭和迁移，从而参与胃癌的发生发展。

综上所述，沉默lncRNA DSCAM-AS1 可通过靶向促进miR-433-3p 的表达抑制胃癌BGC-823 细胞的增殖、侵袭和迁移，可能是胃癌生长、发展机制研究的新方向。然而，本研究仅从体外细胞水平上分析了lncRNA DSCAM-AS1 和miR-433-3p 对胃癌BGC-823 细胞的生物学过程的影响，下一步需结合体内实验进一步验证。此外，未对miR-433-3p 的下游靶基因进行分析也是本研究存在的不足，在未来的研究中将对lncRNA DSCAM-AS1/miR-433-3p 调控网络进行深入探索。

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