浙江中部地区NF-κB1 基因rs28362491 位点多态性与CHD 严重程度及炎症因子的相关性研究

李超 陈云 李俊 盛晓生

[摘要] 目的 探讨核转录因子-κB1（nuclear transcription factor-κB1，NF-κB1）基因rs28362491 位点多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atherosclerotic heart disease，CHD）患者的严重程度、炎症因子的相关性。方法 前瞻性选取2018 年6 月至2021 年6 月浙江省金华市人民医院CHD 患者173 例为观察组，同期非CHD 的患者107 例为对照组，采用聚合酶链反应–限制性片段长度多态性技术分析NF-κB1 基因rs28362491 位点基因多态性，检测肿瘤坏死因子-α（tumornecrosis factor–α，TNF-α）、白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8 水平。结果 观察组NF-κB1 基因rs28362491 位点DD基因型频率高于对照组，Ⅱ、ID 基因型频率低于对照组（P<0.05）。两组D、I 等位基因频率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组中，DD 基因型组Gensini 评分均高于ID 和Ⅱ基因型组（P<0.05）；ID 组和Ⅱ基因型组病变支数、Gensini 评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）。观察组血清TNF-α、IL-6、IL-8 水平显著高于对照组（P<0.05）。观察组DD 基因型TNF-α、IL-6、IL-8 水平明显高于ID 和Ⅱ基因型，差异有统计学意义（P<0.05）；ID 组和Ⅱ基因型组TNF-α、IL-6、IL-8 水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 NF-κB1 基因rs28362491 位点多态性与CHD 严重程度及炎症因子相关，DD 基因型可能上调TNF-α、IL-6、IL-8 水平，成为预测CHD 病变程度的危险因子。

[关键词] NF-κB1；冠心病；基因多态性；炎症因子

[中图分类号] R541   [文献标识码] A   [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.12.001

冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary heartdisease，CHD）属于心血管系统疾病，具有发病率高、致残率高及致死率高等特点[1-3]。研究表明，CHD发病风险除受到环境因素影响外，与基因多态性密切相关[4]。核转录因子-κB1（nuclear transcription factor-κB1，NF-κB1）基因rs28362491 位点是NF-κB1 基因中唯一具有表达功能的单核苷酸多态性（singlenucleotide polymorphises，SNPs），與甲状腺疾病、2 型糖尿病、系统性红斑狼疮、炎症性肠病等慢性炎症性疾病发生风险密切相关[5-6]。近年来，许多研究证实中国西北地区汉族及维吾尔族人群NF-κB1-rs28362491 位点多态性与CHD 的遗传易感性相关，携带DD 基因型在CHD 中具有危险性[7]，但与CHD 严重程度和炎症因子关系的相关报道较少。基于以上研究背景，本研究分析浙江中部地区NF-κB1 基因rs28362491 位点多态性与CHD 严重程度及炎症因子的相关性，旨在为CHD 的诊断和治疗提供合理的依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年6 月至2021 年6 月就诊金华市人民医院心血管内科疑似CHD 患者280 例，根据冠脉造影结果诊治的173 例CHD 患者作为观察组，107例非CHD 患者作为对照组。观察组男102 例，女71例，平均年龄（62.22±5.99）岁；对照组男65 例，女42 例，平均年龄（61.73±5.83）岁。诊断标准：参照《美国心脏病学会和心脏协会CHD 心绞痛诊断指南》和《2007 年中国慢性稳定性心绞痛诊断与治疗指南》制定的稳定性心绞痛[8]。本研究中所有受试者均为浙江中部地区汉族常住人群，相互间均无血缘关系；年龄18～75 岁，性别不限，排除先天性心脏病、严重急慢性感染、肝肾功能不全、恶性肿瘤等疾病，两组患者的性别、年龄、糖尿病、高血压、高脂血症、吸烟等方面比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。受试患者均签署知情同意书，本研究经浙江省金华市人民医院伦理委员会审核批准（伦理审批号：IBR-2021073-R）。

1.2 方法

1.2.1 冠状动脉造影术 采用Judkin 法造影冠状动脉其中一条或者较大的分支，直径狭窄≥50%，即可以诊断CHD[9]。冠状动脉病变支数的判定：①单支病变：前降支、回旋支及右冠状动脉中任何一支血管直径狭窄≥50％；②双支病变：前降支、回旋支及右冠状动脉中任何两支或者左主干狭窄≥0%；③三支病变：任意三支动脉狭窄≥50%。Gensini 评分法：冠脉管腔狭窄程度系数乘以各病变血管的系数，最后总评分为各分支血管评分之和。每支血管狭窄程度，狭窄≤25%计1 分，26%～_______50%计2 分，51%～75%计4 分，76%～90%计8 分，91%～99%计16 分，100%计32 分。各段冠状动脉病变系数：左主干为5，前降支及回旋支近段为2.5，前降支中段为1，前降支远段为1，回旋支中远段为1，右冠状动脉近中远段为1，第一对角支为1，第二对角支为1，右心室后支为1，其他小分支为0.5。

1.2.2 NF-κB1 基因多态性检测 空腹取静脉血5ml，采用低渗法分离白细胞，提取DNA，利用聚合酶链反应– 限制性片段长度多态性技术扩增NF-κB1 基因启动区-94 位点，进行NF-κB1 基因多态性检测。

1.2.3 炎症因子分析 取晨空腹肘正中静脉血5ml，乙二胺四乙酸抗凝管收集，ALLEGRAX-15R 医用低速离心机，离心1000 转/min，离心15min，血清于–80℃冰箱储存。采用酶链免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor–α，TNF-α）、白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8 水平，试剂盒由北京百奥莱博科技有限公司提供。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件对数据进行处理分析，计量资料以均数±标准差（x s ）表示，组间比较采用t 检验，多组间比较采用方差分析；计数资料以例数（百分率）[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组NF-κB1 基因rs28362491 位点多态性比较

NF-κB1基因rs2836249位点的基因型及等位基因频率在观察组和对照组的分布均符合Hard-Weinberg平衡定律。NF-κB1 基因rs28362491 位点DD 基因型频率高于对照组，Ⅱ、ID 基因型频率低于对照组（P<0.05），两组D、Ι等位基因频率比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 观察组不同基因与冠状动脉严重程度的相关性

观察组中3 种不同基因组病变支数、Gensini 评分比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。DD 基因型組Gensini 评分高于ID 和Ⅱ基因型组患者（P<0.05）。

ID 组和Ⅱ基因型组病变支数、Gensini 评分比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3 两组患者TNF-α、IL-6、IL-8 表达水平比较

观察组患者的TNF-α、IL-6、IL-8 表达水平明显高于对照组（P<0.05），见表3。

2.4 观察组不同基因型炎症因子水平比较

观察组中3 种不同基因组TNF-α、IL-6、IL-8 水平比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。DD 基因型组TNF-α、IL-6、IL-8 水平均高于ID 和II 基因型组（P<0.05）。ID 组和Ⅱ基因型组TNF-α、IL-6、IL-8水平比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表4。

3 讨论

越来越多研究支持，炎症反应通过影响动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS），贯穿CHD 的形成、发展与预后的全过程[10]。炎症因子一般起源于血管内皮和巨噬细胞的促炎细胞颗粒，在外周血液中被检测。相关研究表明，TNF-α 由单核细胞和巨噬细胞产生，侵袭血管内皮细胞，诱导血栓形成，引起血管狭窄及心肌细胞坏死，最终导致心脏功能恶化[11-12]。葛丽英等[13]研究证实，IL-6、IL-8 水平与CHD 发生密切相关。本研究结果表明，观察组患者血清中TNF-α、IL-6、IL-8 水平高于对照组。

核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）是一种重要的核转录因子，参与机体炎症反应，主要由NF-κB 和RelA 基因编码组成[14]。NF-κB 介导炎症细胞信号转导通路在AS 的发生、发展中发挥关键作用，故NF-κB 的活化可能是CHD 发生的重要因素[15]。NF-κB1 为NF-κB 重要组成部分，其基因位于人类第4 号染色体长臂2 区4 带（4q24），由24 个外显子和内含子组成，跨度为1.56×105bp，编码NF-κB 亚单位p105 与p50，调节转录因子反应[16]。p50/p65 异源二聚体作为NF-κB 转录轴的组成部分，诱导促炎细胞因子的转录而具有促炎作用。相反，p50 在p50 同型二聚体中具有抗炎特性，其能够抑制促炎细胞因子，刺激单核巨噬细胞分泌IL-10，起到持续的抗炎作用[17]。rs28362491 位点多态性表现为ATTG 碱基的插入/缺失，编码野生纯合基因型（ins/ins，Ⅱ），杂合突变基因型（ind/del，ID），纯合突变基因型（ del/del ，DD） 3 种基因[18]。大量证据表明，NF-κB1-rs28362491 多态性与CHD 遗传易感相关，D等位基因和DD、ID 基因型可能增加CHD 的发病风险[19]，究其原因可能是影响p50/p50 的浓度，导致促炎/抑炎平衡失调[20-21]，但与CHD 的严重程度研究不多，且研究证实Gensini 评分可反映冠状动脉病变严重程度，其与患者的预后呈负相关。本研究中，观察组NF-κB1 基因rs28362491 位点DD 基因型和D等位基因分布频率显著高于对照组，表明D 等位基因可能是CHD 发生的遗传易感基因。另外，通过观察组NF-κB1-rs28362491 多态性分布情况，DD 基因型的冠脉病变三支支数增多以及Gensini 评分增高，进一步说明等位基因D 增多与CHD 的发生、发展密切相关。

本研究结果显示，观察组NF-κB1-rs28362491位点DD 与ID+Ⅱ基因型比较，DD 基因型TNF-α、IL-6、IL-8 水平高于ID+Ⅱ基因型（P<0.05），提示CHD 患者NF-κB1-rs28362491 位点与炎症反应有一定的联系，推测NF-κB1-rs28362491 位点ATTG 缺失（等位基因D）不能与核蛋白结合，抑制NF-κB 转录效率，导致p50 蛋白合成能力下降，引起p50/p65异源二聚体和p50/p50 同源二聚体失衡，损害内皮细胞，刺激平滑肌细胞增殖，最终促进CHD 的发生、发展，因此对CHD 的高危人群进行NF-κB1 基因筛查，从而早诊断、早预防、早治疗。

综上所述，NF-κB1 基因rs28362491 位点多态性与浙中地区汉族人群CHD 的发生和发展密切相关，DD 基因型可能通过影响TNF-α、IL-6、IL-8 表达，使机体处于高炎症状态，成为易感基因型，易导致冠脉病变程度加重。

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（收稿日期：2022–08–17）

（修回日期：2023–03–08）