狗头赤芍质量标准的提升研究

蔡远东 薛朝金 李天佑 何羽

【摘 要】 目的：高效液相色谱（HPLC）法同时测定狗头赤芍中没食子酸和芍药苷的含量，为狗头赤芍质量标准的提升提供依据。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长为230 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。结果：线性和范围分别为，没食子酸：Y=22472X+2118.9，r=0.9999（n=5），在4.237～33.884 μg范围内线性关系良好；芍药苷：Y=13583X-12485，r=0.9999（n=5）在5.197～41.578 μg范围内线性关系良好。没食子酸的平均回收率为99.58%，RSD为1.17%；芍药苷的平均回收率为99.84%，RSD为0.45%。结论：建立的方法简便快捷、重复性良好、准确度较高、分离度较好，可用于狗头赤芍中没食子酸和芍药苷的含量测定。

【关键词】 狗头赤芍；HPLC法；没食子酸；芍药苷；质量标准

【中图分类号】R927.2   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2023）02-0016-03

Research on the Improvement of Quality Standard of  Radix Paeoniae Mairei

CAI Yuandong XUE Chaojin* LI Tianyou HE Yu

Bi jie Inspection and Testing Center of Administration for Maeket Superrvision，Bijie 551700， China

Abstract：Objective Simultaneous determination of gallic acid and paeoniflorin in Radix Paeoniae Aairei by high performance liquid chromatography （HPLC），Provide a basis for the improvement of the quality standard of Radix Paeoniae Aairei.Methods  Columns using octadecylsilane-bonded silica as filler，The mobile phase is acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution，gradient elution，The flow rate is 1mL/min，Detection wavelength is 230nm，The column temperature is 30 ℃，The injection volume is 10 μL. Results  Linear and range are，Gallic acid： Y=22472X+2118.9， r=0.9999 （n=5），The linear relationship is good in the range of 4.237～33.884 μg；Paeoniflorin： Y=13583X-12485， r=0.9999 （n=5），The linear relationship is good in the range of 5.197～41.578 μg.The average recovery rate of gallic acid was 99.58%， and the RSD was 1.17%；The average recovery of paeoniflorin was 99.84%， and the RSD was 0.45%.Conclusion  The established method is fast， simple， with good repeatability， high accuracy and good separation.It can be used for the quality control of gallic acid and paeoniflorin in PRadix Paeoniae Aairei.

Keywords：Radix Paeoniae Aairei；HPLC method ；Gallic Acid；Paeoniflorin；Quality Standard

狗头赤芍为毛茛科植物美丽芍药Paeonia mairei Lévl.、草芍药Paeonia obovata Maxim.的干燥根。春、秋二季采挖，除去根茎、须根及杂质，干燥。其功能为活血化瘀，凉血调经。用于瘀滞胸胁疼痛、腹痛、目赤、痛经、经闭、衄血、跌扑损伤［1］。美丽芍药主要分布于贵州毕节、威宁等地，草芍药主要分布在贵州麻江、锦屏、威宁、赫章、水城、遵义等地［2-3］。根据相关报道［4］，狗头赤芍主要化学成分为芍药苷、 羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药内酯苷（白芍苷）、 芍药新苷、 芍药苷元酮等。芍药苷具有保肝、保护神经细胞、保护缺血性的脑损伤及神经损伤的作用，还具有抗抑郁作用、抑制炎症作用［5］。没食子酸具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等活性［6］。狗头赤芍收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》（2003年版），标准只对其粉末进行了显微鉴别，不能全面反映药材整体质量。本文采用HPLC法同时测定狗头赤芍中没食子酸和芍药苷的含量，为质量标准的提升提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters e2695 高效液相色譜仪，2998二极管阵列检测器。电子天平：MSE3.6P-OCE-DM，由赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产；电子天平：AY120、BX420H由梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司生产。洁康超声波清洗机（超声功率：360 W，超声频率：40 KHz）由东莞市洁康超声波设备有限公司生产。

1.2 试药 没食子酸对照品（批号：110831-201602，含量以90.8%计）、芍药苷对照品（批号：110736-202044，含量以96.8%计）均由中国食品药品检定研究院提供。乙腈为色谱纯（美国TEDIA天地试剂公司），实验用水为娃哈哈纯净水，稀乙醇：取乙醇（95%，天津市富宇精细化工有限公司）529 mL，加娃哈哈纯净水稀释至 1000 mL，即得稀乙醇。

1.3 样品信息 采集的样品经贵州省中药研究所陈德媛老师鉴定，为毛茛科植物草芍药 Paeonia obovata Maxim。样品详见表1。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：COSMOSIL- Packed- Column  5C18-MS-II 4.6ID×250 mm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱；流速为1 mL/min；检测波长为230 nm；柱温为30 ℃；进样量：10 μL。梯度洗脱程序见表2，色谱图如图1，各成分分离度皆大于1.5。

2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取对照品没食子酸、芍药苷适量，加稀乙醇制成每1 mL含没食子酸、芍药苷分别为0.042 mg、0.052 mg的混合对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，粉碎，研细，取约0.5 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率：360 W，频率：40 KHz）30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得［7］。

2.4 线性关系考察 精密量取“2.2”项下的混合对照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分别置10 mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度。分别精密吸取10 μL，按“2.1”项下的色谱条件测定，每个样品进样2次。以对照品浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归。得到没食子酸和芍药苷线性回归方程、相关系数，结果见表3。

2.5 精密度试验 取“2.2”项下的混合对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件重复测定5次，分别计算2种成分的峰面积积分值。结果没食子酸、芍药苷峰面积的RSD值分别为0.5%、0.6%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 取毕节市赫章县铁匠乡采集的狗头赤芍药材，粉碎，研细，取粉末5份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，每份平行测定2次，按“2.1”项下的色谱条件测定并计算各成分的含量。结果显示狗头赤芍中没食子酸、芍药苷的平均值分别为0.31%，2.28%；RSD值分别为1.33%、1.84%。表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取毕节市赫章县铁匠乡采集的狗头赤芍药材，粉碎，研细，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h进样，按“2.1”项下的色谱条件测定并计算各组分峰面积的RSD值，结果没食子酸、芍药苷峰面积的RSD值分别为0.50%、1.60%。说明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

2.8 加样回收试验 取毕节市赫章县铁匠乡采集的狗头赤芍药材，粉碎，研细，称取粉末6份，每份约0.25 g，加入没食子酸、芍药苷浓度分别为0.7258 mg/mL、5.4015 mg/mL的混合对照品溶液1 mL，按“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下测定并计算回收率。回收率平均值分别为99.58%、99.84%，RSD分别为1.17%、0.45%。结果见表4。

2.9 样品含量的测定 取不同产地的狗头赤芍样品适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，每份平行测定2次，按“2.1”项下的色谱条件测定并计算各成分的含量。测定结果见表5。

结果按干燥品计算，样品中没食子酸的含量为0.30%～0.47%，平均值为0.4%；芍药苷的含量为2.28%～3.24%，平均值为2.7%。从含量测定的结果看出，芍药苷的含量均高于《中国药典》（2020版）“赤芍”的含量限度1.8%，本品可以作为赤芍的替代品使用。没食子酸含量较高的样品，芍药苷含量也相对较高，如产于毕节市赫章县和威宁县的样品，含量的高低是否与地域和植物的生长周期有关，还待进一步的研究。

3 讨论

本研究分别采用甲醇-0.05 moL／L磷酸二氢钾溶液和乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，结果用甲醇-0.05 mol／L磷酸二氢钾溶液时，芍药苷色谱峰拖尾较严重，选用乙腈-0.1％磷酸溶液时，目标峰峰形较好，且与相邻杂质峰达到完全分离，取得了满意的效果。

采用稀乙醇为溶剂，分别考察了超声处理15 min、30 min和45 min，结果超声处理15 min时，样品含量较低，超声处理30 min和45 min时样品含量相差不大，说明超声处理15 min时，目标成分未提取完全，超声处理30 min和45 min时目标物提取较完全，为保证充分提取完全和缩短实验室操作时间，本次研究选择超声处理30 min。分别取稀乙醇、甲醇和50%甲醇作为溶剂，超声处理30 min，结果发现稀乙醇提取时目标物含量较高，故本研究采用稀乙醇为提取溶剂。

本实验采用HPLC法分别同时测定了5个不同产地的狗头赤芍中的没食子酸和芍药苷的含量，取得了较为满意的结果。该方法较为简便，重复性较好，可用于狗头赤芍的含量测定及质量评价，为狗头赤芍质量标准的提升提供方法依据。

参考文献

［1］贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准2003年版［M］.贵阳：贵州科技出版社，2003：251.

［2］贵州省中药资源普查办公室，贵州省中药研究所.贵州中药资源［M］.北京：中国医药科技出版社，1992：670.

［3］何顺志，徐文芬.贵州中草药资源研究［M］.贵阳：贵州科技出版社，2007：275.

［4］徐国钧，徐珞珊.《常用中药材品种整理和质量研究》南方协作组第二册［M］.福州：福建科技出版社，1997：110.

［5］張石凯，曹永兵.赤芍的药理作用研究进展［J］.药学实践杂志，2021，39（2）：97-101.

［6］孙辑凯，张梅娟，张宏莲，等. UPLC-Q-Trip-MS /MS 法测定赤芍中4 种成分的含量［J］.化学试剂，2021，43（2）：216-219.

（收稿日期：2022-05-16 编辑：刘 斌）