妊娠妇女高危型人乳头瘤病毒感染特点及基因分型

樊 荣,王雪梅

(北京市通州区中西医结合医院 1.病理科;2.妇产科,北京101100)

子宫颈癌在女性常见恶性肿瘤中发病率居第二位,人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是导致宫颈癌的主要原因,其中高危型人乳头瘤病毒持续感染是引起宫颈癌的最主要原因。随着HPV在女性中感染率的增加,妊娠期妇女感染HPV的患者在逐年上升。国外文献报道妊娠期HPV感染在5.5%～65%,平均为24%[1]。国内有研究显示HPV的感染率为13.42%[2]。另有报道妊娠期子宫颈癌的患病人数占妊娠总人数的1.5/10万～12/10万,是妊娠期间最常见的恶性肿瘤[3]。目前,对妊娠期宫颈癌临床筛查和预防不到位,积极监测高危型HPV分布及其亚型流行情况,对妊娠期宫颈癌防治具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集251例妊娠妇女临床资料,其中18～25岁患者67例,26～35岁患者168例,36～45岁患者16例;所有患者均有性生活史,没有宫颈病变手术史及其他恶性肿瘤疾病史,均处于妊娠状态。

1.2 主要试剂与仪器

DNA提取试剂盒、荧光定量PCR试剂盒均购至上海之江生物技术有限公司;AUTRAX全制动核酸提取仪购至上海之江生物技术有限公司;医用核酸扩增仪购买自上海宏石公司;超速离心机购买自贝克曼库尔特公司。

1.3 HPV检测与分型

医护人员用窥阴器暴露宫颈,用无菌棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去,取出专用宫颈刷置于宫颈口,单向旋转4-5圈以获得足量的上皮细胞样本,然后将宫颈刷头部放入含有3 ml宫颈细胞保护液的样本瓶中,4℃保存待测。24 h内对样本进行高危型HPV检测及基因分型。

1.3.1DNA提取 将样本放入AUTRAX全制动核酸提取仪中进行DNA提取。

1.3.2PCR扩增 将AUTRAX全制动核酸提取仪中完成的总反应体系管放PCR扩增仪,PCR扩增条件：94℃ 2 min预变性,93℃ 10 s变性、62℃ 31 s退火和延伸,经40个循环。

1.4 统计学分析

收集患者临床资料,包括患者年龄、性生活次数等,采用统计学分析软件SPSS25.0对数据进行统计学分析。P<0．05判定为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄妊娠妇女高危型HPV感染情况

251例妊娠患者,感染高危型HPV患者39例,感染率15.54%。18～25岁、26～35岁、36～45岁妊娠妇女HPV感染率分别为6.0%、19.05%、18.75%。其中26～35岁妊娠妇女高危型HPV感染率最高,36～45岁感染率次之(χ2=6.889,P<0.05)。年龄是影响妊娠妇女高危型HPV感染的因素。

2.2 不同性生活特征妊娠妇女高危型HPV感染情况

首次性生活年龄<18岁、性伴侣个数为2个及以上、性生活次数3次/周以上的妊娠妇女高危型HPV感染率明显高于其他患者(P<0.05),首次性生活年龄、性伴侣个数、性生活频率都是影响妊娠女性高危型HPV感染的因素,见表1。

表1 不同性生活特征的妊娠妇女高危型HPV感染情况

2.3 不同妊娠和分娩方式妊娠妇女高危型HPV感染情况

妊娠次数<2次、≥2次患者数分别为176和75例,高危型HPV感染数为21例和18例,感染率分别为11.93%和24.0%(χ2=5.836,P<0．05)。分娩方式为自然生产和剖宫产患者分别为197例和54例,感染数为27例和12例,感染率分别为17.78%和33.33%,(χ2=2.342,P>0．05)。妊娠次数是影响妊娠妇女高危型HPV感染的因素。

2.4 不同妊娠阶段中妊娠妇女高危型HPV感染情况

妊娠早期(≤12周)高危型HPV感染者15例,感染率为14.88%;妊娠中期(>12周且≤27周)高危型HPV感染者20例,感染率为24.39%;妊娠晚期(≥28周)高危型HPV感染者4例,感染率为36.36%;(χ2=6.986,P<0.05)。妊娠中、晚期是影响妊娠妇女高危型HPV感染的因素,见表2。

表2 不同妊娠阶段妊娠妇女高危型HPV感染情况

2.5 不同经济状况及受教育程度妊娠妇女高危型HPV感染情况

月收入≤2800元和>2800元患者分别为118和133例,感染数分别为25和14例,感染率分别为21.19%和10.53%,差异有统计学意义(χ2=5.141,P<0．05)。大学以下学历、大学以上学历患者数分别为139和112例,高危型HPV感染数分别为28和11例,感染率分别为20.14%和9.82%,(χ2=5.036,P<0．05)。经济状况和受教育程度是影响妇妊娠妇女高危型HPV感染的因素。

2.6 基因分型

251例妊娠妇女,感染高危型HPV者39例,感染率15.53%。对39例感染高危型HPV患者进行基因分型,结果表明,妊娠妇女高危型HPV单一感染率为71.79%,多重感染率为28.21%。单一高危型HPV感染类型中,52型感染率64.3%(18例),其次是58型感染率为35.7%(10例)(P<0.05);多重高危型HPV感染类型中,二重感染率63.64%,三重感染率36.36%,P<0.05,见表3。

表3 妊娠妇女高危型HPV感染情况

3 讨论

女性一般自18岁左右趋于成熟,历时约30年。此时为卵巢生殖功能与内分泌功能最旺盛时期。在此期间,身体各部分发育成熟,出现周期性的排卵及行经,并具有生育能力。通常从40岁以后,女性卵巢功能开始衰退,机体对HPV清除能力减弱,阴道内微生态平衡功能减弱,进而导致宫颈上皮内瘤变、甚至宫颈癌的可能性增加[4]。因此,不同年龄女性对HPV清除能力存在差异。本研究调查结果显示,不同年龄段妊娠妇女均有HPV感染发生,其中以26～35岁者居多,其次是36～45岁妊娠者。26～45岁的女性性行为相对较频繁,可能有多个性伴侣,导致该群体患者更容易发生HPV感染[5]。除年龄外,不同性生活特征、不同妊娠阶段和分娩特点都也是影响妊娠女性发生HPV感染的主要因素。首次性生活年龄较早的患者,性激素分泌水平增加,过早性行为和活跃的性生活,会导致HPV感染可能性增加[6]。因此,为了减少HPV感染,需要积极的安全教育宣传,减少过早性行为。同时性伴侣个数以及性生活次数也是影响妊娠女性发生HPV感染的主要因素,性伴侣个数增多,发生交叉感染可能性增加;频繁的性生活,可能改变患者自身免疫系统,降低患者自身对HPV清除能力,还可能使潜伏的HPV感染复发。本研究结果显示随着妊娠次数的增加,宫颈受损程度增加,亦增加HPV易感性;妊娠次数≥2次,其妊娠期发生HPV感染率明显增高,以上结果与文献报道一致以上结果与文献报道一致[7];有文献报道行剖宫产分娩者感染率高于自然生产患者以上结果与文献报道一致[7],本研究结果显示两者无差异,可能是样本量少导致数据有差异;因此临床中应关注多次妊娠的妇女,积极监测HPV感染情况,及时进行管理,及时发现其他疾病的可能性。在妊娠期中胎盘分泌大量雌孕激素、绒毛膜促性腺激素、胎盘生乳素等均可抑制母体免疫应答,母体呈现出自然的免疫耐受或免疫无应答状态,母体抵抗病毒能力下降[8]。有研究结果显示,不同区域及人种中妊娠期HPV感染发生率差异较大(5.4%～68.8%),在妊娠中晚期感染率较高[9-10]。本研究调查结果显示妊娠晚期HPV感染率为36.36%,明显高于妊娠早期和中期。受教育程度较低的妊娠妇女HPV感染率明显高于其他患者,这可能与患者长期卫生习惯差、知识缺乏、对性行为卫生不重视有关。同时,经济状况较差者感染率明显高于其他患者,这与患者生活的营养条件、洗浴条件、HPV感染筛查不及时、卫生保健用品购买能力等有关[11]。

在妊娠期,因免疫力低下,抗病毒感染能力下降,HPV复制表达活跃,致使HPV母体感染率均高于非孕期,如同时有妊娠合并症(妊娠合并糖尿病等),感染率增加[12]。除免疫状态之外,妊娠期盆腔充血、生殖系统血供丰富,阴道分泌 物增加等也是孕期 HPV等病原体生长的极有利条件。本研究调查结果与相关研究结果一致[13],妊娠妇女高危型HPV单一感染率比多重感染率显著增高;单一高危型HPV感染类型中,以52型为主,其次是58型、16型;多重高危型HPV感染类型中,二重感染率显著高于三重感染率。有研究报道孕妇HPV感染可能导致了早产、胎膜早破、胎儿生长受限,与不良母婴结局具有一定相关性[14]。妊娠期HPV感染可以发生母婴传播,据国外文献统计,孕期HPV感染母婴传播率为4%～79%不等[15]。Wu等[16]报道妊娠期中国妇女子宫颈异常细胞检出率为8%～12%。妊娠期妇女CIN 发病率约为 1.3‰～2.7‰[17],有研究表明 CIN 2/3的孕妇罹患子宫颈癌的风险是正常人群的2～5倍[18]。因此,妊娠期人乳头瘤病毒(HPV)感染应得到临床的重视。