高血压病人血清锌指蛋白A20、p53表达及与冠状动脉病变的关系

胡树凤,程方兵,王嘉伟,马 斌

高血压是心脑血管疾病的危险因素,与冠心病关系密切[1]。我国高血压合并冠心病的发病率及死亡率日趋上升,目前冠心病确诊主要依靠冠状动脉造影,但其设备要求高,操作有一定难度[2]。而冠心病病人动脉粥样硬化的主要原因是由于氧化型低密度脂蛋白升高,导致动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞受损,从而释放大量炎性因子,导致血管内皮发生慢性炎症反应[3]。锌指蛋白A20作为内源性调节蛋白,参与机体炎症反应,可能影响冠状动脉粥样硬化斑块的发生和发展[4]。p53为凋亡相关因子,有抑制癌细胞生长的作用,中晚期肝癌病人血清p53水平显著降低,同时其具有调节脂质作用[5]。本研究探讨高血压病人血清锌指蛋白A20、p53表达与冠状动脉病变的关系,以期为高血压合并冠心病病人的诊断和治疗提供参考。现作报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020年1月至2021年1月于我院心内科住院并行冠状动脉造影检查的高血压病人120例,其中男71例,女49例,年龄45～69岁。根据冠状动脉造影结果[6],任一冠状动脉管径狭窄≥50%者作为冠状动脉病变,将病人分为冠状动脉病变组(病变组)70例和冠状动脉正常组(正常组)50例。收集病人一般资料,包括年龄、性别、血压、心率、体质量指数(BMI)、吸烟史、高血压病程等。纳入标准:(1)符合高血压诊断标准;(2)可进行冠状动脉造影;(3)知情同意自愿参与。排除标准:(1)合并肝肾功能不全;(2)严重创伤、手术及重症感染;(3)合并恶性肿瘤;(4)资料不全。根据Gensini评分[7],将病变组分为轻度组40例(Gensini评分<20分)、中度组20例(Gensini评分20～40分)和重度组10例(Gensini评分>40分)。本研究经过医院伦理委员会审批同意(伦理批准号:20191209)。

1.2 方法

1.2.1 生化指标检测 2组病人均于入院时采集清晨空腹静脉血5 mL,采用全自动生化检测仪测定血糖(Glu)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、血尿酸(uric acid,UA)、丙氨酸氨基转移酶(alanine amiotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate amiotransferase,AST)等生化指标。

1.2.2 血清锌指蛋白A20 mRNA检测 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清锌指蛋白A20 mRNA表达。用EDTA-2K抗凝管采集病人动脉血4 mL,Ficoll密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA后,进行qRT-PCR反应。反应条件:97 ℃预变性30 s,然后96 ℃变性10 s,54 ℃退火30 s,70 ℃延伸30 s,共41个循环。血清锌指蛋白A20 mRNA及内参基因β-actin引物由上海生工生物有限公司合成,引物序列见表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.3 血清p53蛋白水平检测 使用ELISA法检测病人血清p53蛋白表达水平,实验步骤严格按照人p53 ELISA试剂盒(货号:ab171571,Abcam公司)说明书进行。

1.3 统计学方法 采用t(或t′)检验、χ2检验、方差分析、q检验和Pearson相关分析及ROC曲线分析。

2 结果

2.1 病变组和正常组一般资料比较 病变组和正常组高血压病人年龄、性别、血压、心率、BMI、吸烟史、高血压病程差异均无统计学意义(P>0.05)(见表2),具有可比性。

表2 病变组和正常组一般资料比较

2.2 病变组和正常组相关生化指标比较 病变组病人A20 mRNA、p53表达和LDL-C水平均明显高于正常组(P<0.01),2组Glu、TG、TC、HDL-C、AST、ALT、UA差异均无统计学意义(P>0.05)(见表3)。

表3 病变组和正常组相关生化指标比较

2.3 病变组不同严重程度病人血清A20 mRNA和p53比较 重度组病人A20 mRNA明显高于轻度组和中度组,中度组亦明显高于轻度组(P<0.01);重度组病人p53高于轻度组(P<0.05)(见表4)。

表4 病变组不同严重程度病人血清A20 mRNA和p53比较

2.4 病变组病人A20 mRNA与p53表达的相关性分析 Pearson相关分析显示,病变组病人血清锌指蛋白A20 mRNA表达与p53呈正相关关系(r=0.702,P<0.05)。

2.5 A20 mRNA和p53对高血压病人发生冠状动脉病变的诊断效能 ROC曲线分析结果显示,A20 mRNA、p53诊断高血压病人发生冠状动脉病变AUC分别为0.777、0.614,敏感度分别为78.30%、56.50%,特异度分别为74.50%、66.70%;二者联合诊断高血压病人发生冠状动脉病变AUC为0.799,敏感度为76.80%,特异度为78.40%。

3 讨论

高血压是心脑血管疾病的重要危险因素。研究[8]表明,全球因高血压死亡人数每年可高达750万例,其引起的伤残率排在第5位。我国因高血压疾病造成的经济负担相当严重。高血压若得不到有效控制,可逐渐形成冠状动脉病变[9]。高血压对血管的影响主要表现在弹力纤维及血管平滑肌,血压升高可使冠状动脉堵塞,当冠状动脉较大的分支完全堵塞时,相应的心肌因得不到血液的供应而坏死,就会发生心肌梗死。因此,寻找有意义的血清标志物诊断高血压病人是否发生冠状动脉病变,对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。

锌指蛋白为含有锌指结构的蛋白,其自身有不能折叠的结构区,可形成稳定结合并发挥其功能,锌指蛋白家族约占人类基因产物的1%,包括NI80、N36、ZNF-216等[10],具有广泛的生物功能,如DNA识别、RNA包装、转录及转录后调控、蛋白折叠和装配、脂质结合,并参与肿瘤的形成和机体免疫干预等[11]。本研究结果显示,病变组病人血清锌指蛋白A20 mRNA表达明显高于正常组;而病变组中重度组病人A20 mRNA明显高于中度组和轻度组,且中度组高于轻度组,与刘平贤等[12]研究结果相似,提示锌指蛋白A20与高血压病人发生冠状动脉病变有关,其原因可能是A20可负调节NF-κB,影响NF-κB介导的炎症过程,进而参与冠状动脉病变[13]。ROC曲线分析结果显示,血清A20 mRNA表达诊断高血压病人发生冠状动脉病变AUC为0.777,敏感度为78.30%,特异度为74.50%,提示A20对高血压病人发生冠状动脉病变具有一定诊断价值。

p53基因属于一种抑癌基因,该基因编码分子量为43 700的蛋白质,可促进癌细胞凋亡,防止癌变,还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能[14-15],同时,p53对细胞和组织的脂质代谢具有调节作用[16]。而脂质和胆固醇对膜生物发生、细胞增殖和细胞分化至关重要[17]。当心肌细胞DNA受损时,p53表达增加,当损伤严重无法修复时,则p53持续增高,因此,p53的表达是心肌细胞凋亡的重要特征[18]。本研究结果显示,病变组病人血清p53蛋白表达水平明显高于正常组,且重度组病人血清p53蛋白表达水平高于轻度组,与周思维等[19]研究相近,提示p53蛋白表达水平与冠状动脉病变严重程度有关,推测p53蛋白可能通过参与细胞增殖、影响巨噬细胞黏附和转运分化等,影响动脉粥样硬化,从而参与冠状动脉病变[20]。此外,病变组病人血清A20 mRNA与p53表达水平呈正相关关系,提示二者可能通过某种机制共同参与高血压病人冠状动脉病变的发生和发展。ROC曲线分析结果显示,血清p53水平诊断高血压病人发生冠状动脉病变AUC为0.614,敏感度为56.50%,特异度为66.70%;而A20 mRNA与p53联合诊断高血压病人发生冠状动脉病变AUC为0.799,敏感度为76.80%,特异度为78.40%,提示二者联合可提高诊断价值。然而本研究样本量较少,仍需要后续大样本研究进一步探讨。且本研究仅根据样本相关性分析得出结论,未来可开展相关试验以深层次挖掘其分子作用机制。

综上所述,高血压病人血清锌指蛋白A20 mRNA、p53表达水平随病人冠状动脉病变加重而升高,且二者呈正相关关系,可作为诊断冠状动脉病变发生的参考指标,二者联合检测具有较高的诊断价值。