脐血Gal-9、IL-33 水平与早期婴儿湿疹相关性的前瞻性研究

杨云彦，王文革，杨云月，卢旭俊

1 河北北方学院研究生学院，河北张家口 075000；2 空军特色医学中心儿科，北京 100142

湿疹是婴儿时期最早出现、最常见的一种过敏性疾病，临床具有易反复等特点，严重影响儿童的身心健康。湿疹的发病受环境、遗传、免疫等多种因素的影响[1]，且发病机制尚未全面阐释，目前认为的免疫学发病机制为Th1/Th2 细胞免疫应答失衡，Th2 细胞优势应答是湿疹过敏性炎症形成的关键因素。有研究表明，早期患有湿疹的儿童后期发生过敏性鼻炎、哮喘等其他过敏性疾病的概率显著升高[2]。因此探索有效可靠的早期监测指标，尽早识别、预防湿疹的发生，对减少或避免儿童过敏性疾病的发生、发展意义重大。脐血相关指标可以反映机体最早期的免疫状态，一些脐血因子与过敏性疾病的发生具有相关性[3]。已有学者报道，半乳凝素-9(galectin-9，Gal-9)、白细胞介素-33(interleukin-10，IL-33)与支气管哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎等多种过敏性疾病的发生、发展密切相关[4-5]。但目前少有脐血Gal-9、IL-33 水平与湿疹关系的研究。因此本研究通过检测脐血Gal-9、IL-33 水平，探讨二者与婴儿湿疹发病的相关性及其对早期湿疹的预测意义，以期为婴儿湿疹的早期预防和治疗提供理论参考。

对象与方法

1 研究对象 选取2020 年9 月 - 2021 年5 月在空军特色医学中心产科出生的新生儿为研究对象。纳入标准：健康足月新生儿。排除标准：(1)存在先天畸形；(2)出生前有宫内窘迫史；(3)出生后有胎粪吸入、缺氧缺血性脑病、新生儿出血症等疾病；(4)新生儿疾病筛查异常者。本次研究已通过我中心医学伦理委员会的审核及批准，所有入组的研究对象均已取得其监护人的同意并已签署知情同意书。

2 Gal-9、IL-33 检测 新生儿出生时在产科医师协助下采集脐血约4 mL，保存于-4℃冰箱，24 h内取出，于空军特色医学中心实验室以2 500 r/min离心10 min，使用移液枪取上层血浆约1.5 mL 于EP 管内，编号后储存于空军特色医学中心实验室-80℃冰箱内待测。采用ELISA 法测定脐血Gal-9、IL-33 水平。Gal-9、IL-33 试剂盒均购自美国R&D Systems 公司。Gal-9 试剂盒货号为DGAL90，IL-33试剂盒货号为D3300B，脐血检测步骤严格遵循说明书进行操作。

3 调查随访 (1)新生儿出生信息：包括出生日期、性别、体质量、身长、胎龄、分娩方式。(2)母亲情况：包括年龄、孕期身体是否健康等；新生儿父母是否存在哮喘、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、荨麻疹等过敏性疾病。(3) 42 d 门诊随访：记录婴儿是否发生湿疹及哺乳期母亲是否进食牛奶、鸡蛋、花生、坚果、鱼、贝类等食物。婴儿湿疹诊断标准参照《湿疹诊疗指南(2011 年)》及2005 年版《实用皮肤科学》[6]。

4 分组及分析指标 根据42 d 随访是否发生湿疹分为湿疹组和无湿疹组。分析指标：(1)两组新生儿一般情况；(2)两组新生儿脐血Gal-9、IL-33水平；(3)早期婴儿湿疹发病的相关因素分析；(4)脐血IL-33 预测早期婴儿湿疹的ROC 曲线。

5 统计学方法 采用SPSS 25.0 系统进行数据分析。计量资料符合正态分布以±表示，不符合正态分布以Md(IQR)表示，计数资料以例数(百分比)表示。计量资料符合正态分布采用t检验进行组间比较，不符合正态分布采用Mann-WhitneyU检验进行比较；计数资料采用χ2检验进行组间比较。应用logistic 回归分析42 d 婴儿湿疹患病的危险因素。制作ROC 曲线评估脐血IL-33 水平对早期湿疹的预测价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

结 果

1 一般情况 共114 例婴儿完成了42 d 随访，男性62 例(54.4%)，女性52 例(45.6%)，胎龄为259.0 ～ 291.0(275.82 ± 6.08) d，出生体质量2 450 ～4 000(3 295.61 ± 351.64) g，身长43 ～ 57(50.52 ±2.03) cm。自然分娩82 例(71.9%)，剖宫产32 例(28.1%)，母亲的年龄为22 ～ 41(32.16 ± 3.78)岁，母亲孕期体检正常53 例(46.5%)，不正常61 例(53.5%)，母乳喂养62 例(54.4%)，混合喂养52 例(45.6%)，母亲哺乳期间进食易致敏食物98 例(86.0%)，未进食16 例(14.0%)，有家族过敏史83例(72.8%)，无家族史31 例(27.2%)。湿疹组68例，无湿疹组46 例，患病率为59.6%，两组在母亲哺乳期间是否进食易致敏食物方面有统计学差异(P＜0.05)，在性别、胎龄、身长、出生体质量、分娩方式、喂养方式、家族过敏史、母亲年龄及母亲孕期是否患病方面差异均无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 两组婴儿一般情况比较Tab. 1 Comparison of general conditions between the two groups

2 两组脐血Gal-9、IL-33 水平比较 湿疹组与无湿疹组的脐血Gal-9 水平差异无统计学意义(P＞0.05)，而脐血IL-33 水平湿疹组高于无湿疹组(P＜0.05)。见表2。

表2 两组婴儿脐血Gal-9、IL-33 水平的比较[Md(IQR)]Tab. 2 Comparison of the levels of Gal-9 and IL-33 in umbilical cord blood between the two groups (Md[IQR])

3 早期婴儿湿疹发病的多因素logistic 回归分析将患有湿疹设为因变量(回归哑变量赋值：1=湿疹，0=否)，将过敏性疾病家族史(1=有，0=无)、母亲哺乳期间是否致敏饮食(1=是，0=否)、喂养方式(1=混合，0=母乳)、脐血Gal-9 及IL-33 水平(连续数值原型输入)作为自变量，进行logistic 回归分析(全模回归)，结果表明母亲哺乳期间进食上述易致敏食物和脐血IL-33 高水平表达是早期湿疹发生的危险因素(P＜0.05)。见表3。

表3 42 d 婴儿湿疹相关危险因素的logistic 回归分析Tab. 3 Logistic regression analysis of factors associated with eczema in 42 d infants

4 脐血IL-33 对早期婴儿湿疹的预测价值 以湿疹组患儿作为阳性样本，以非湿疹组患儿作为阴性样本，建立ROC 分析模型。ROC 分析结果显示，ROC 曲线下面积AUC 为0.619，标准误为0.053，特异度为82.6%，敏感度为41.2%，95%CI为0.516 ～ 0.722，最佳截断值为34.63 pg/mL，表明脐血IL-33 水平对早期婴儿湿疹发生的预测价值不大。见表4、图1。

图1 脐血IL-33 的ROC 曲线Fig.1 ROC curve of umbilical cord blood IL-33 level

表4 脐血IL-33 水平的ROC 曲线分析Tab. 4 ROC curve analysis of cord blood IL-33 level

讨 论

湿疹是婴儿期最常见的一种慢性、复发性、炎症性疾病，临床表现为红斑、丘疹、糜烂渗出、皮肤红肿、干燥、粗糙肥厚等，常伴有明显的瘙痒，导致患儿出现不同程度的烦躁、夜间哭闹等，严重影响儿童的身心健康。调查数据显示，随着全球过敏性疾病发病率的逐年上升，湿疹的发病率也呈增高趋势[7]。本研究仅就空军特色医学中心产科出生的新生儿进行了调查随访，结果表明42 d 婴儿湿疹的患病率为59.6%，与王召阳等[8]报道的北京市海淀区42 d 婴儿湿疹患病率相近。本次研究结果表明，母亲哺乳期间进食易致敏食物是42 d 婴儿出现湿疹的危险因素，这与之前一些研究的结果一致[9]。有研究显示，母亲规避相关致敏食物，患儿湿疹症状有所好转，甚至不再发作[10]。这可能是由于回避敏感食物后，母亲体内的大分子相关免疫复合物生成减少，经由母乳进入婴儿体内的亦减少，提示哺乳期母亲适当合理的调整饮食有利于预防婴儿湿疹的发生。由于本次调查的局限性，未深入区分不同致敏食物对婴儿湿疹发生的影响，并且研究结果未提示不同喂养方式对早期湿疹患病的影响，后续将进一步深入研究。

Gal-9 是一种串联重复型半乳糖凝集素，具有调节细胞分化、聚集、黏附、凋亡等功能[11]。在过敏性疾病中Gal-9 对嗜酸性粒细胞具有显著的趋化活性[12]。Gal-9 表达于Th1 细胞和Th17 细胞，不在Th2 细胞中表达[13]。T 细胞免疫球蛋白和黏蛋白分子-3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3，Tim-3)是Gal-9 的天然配体，二者相互作用，在过敏反应中通过负向调节Th1 和Th17 细胞来调节T 细胞平衡，导致Th2 极化，从而诱导炎症因子释放[14]。研究发现，变应性鼻炎小鼠的鼻黏膜组织中Gal-9-Tim-3 表达水平升高，在给予相应的治疗后其水平显著下降，说明Gal-9-Tim-3通路参与了过敏性疾病的炎症调节过程[15]。Gal-9对过敏性疾病的严重程度亦有提示作用，特应性皮炎患者的血清Gal-9 水平与皮炎严重程度指数(SCORAD 评分)呈显著正相关，并且接受治疗后患者血清Gal-9 水平下降与皮损的明显改善亦有关，因此Gal-9 水平或许可以作为反映过敏性疾病的标志物[16]。此次研究探讨脐血Gal-9 水平与早期湿疹患病的相关性，结果未提示二者具有显著的关联性。这与上述学者的研究结果有所不同，由于考虑到尚不能排除因样本量偏小及地区局限性造成结果偏倚的可能，因此期待进一步多中心、大样本的研究检验二者是否存在相关性。

IL-33 是IL-1 家族的新晋成员，主要在上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等细胞中表达，当这些细胞受损，IL-33 可释放入血液。肿瘤生成抑制因子2 (suppression of tumorigenicity 2，ST2)是IL-33 的特异性配体，它在肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、Th2 淋巴细胞等多种免疫细胞中高度表达[17]。IL-33 是过敏性疾病的一个新兴关键因子，国内外学者针对其在支气管哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、食物过敏等疾病中的研究已取得了一定的进展[18-20]。本次就IL-33 在婴儿湿疹中的表达情况进行研究，结果表明湿疹组婴儿脐血IL-33 水平高于无湿疹组，这与之前学者研究发现哮喘患者血清IL-33 水平高于与非哮喘患者的结果一致[21]。IL-33 及其受体ST2 均参与了过敏性疾病的发病，二者在过敏性疾病中的表达水平均升高，当IL-33 结合并激活ST2 后，可对表达ST2 的细胞产生生物活性，促进炎性细胞的成熟并诱导这些细胞分泌释放IL-4、IL-5、IL-9、IL-13等下游炎性细胞因子，从而加剧过敏性炎症。湿疹相关危险因素的logistic 逐步回归分析显示，脐血IL-33 高水平表达是湿疹发生的危险因素，提示脐血IL-33 表达水平较高者患湿疹的风险可能增加，但ROC 曲线反映脐血IL-33 水平对早期婴儿湿疹的诊断能力有限。

综上所述，42 d 婴儿湿疹患病率较高，母亲哺乳期间进食牛奶、鸡蛋、坚果、鱼等易致敏食物可能增加婴儿患湿疹的风险，合理调控母亲饮食可能有利于预防早期湿疹的发生。脐血IL-33 水平与婴儿湿疹的发生存在相关性，而脐血Gal-9 水平与湿疹的相关性较差，IL-33 高水平表达是湿疹发生的危险因素，但对早期婴儿湿疹发生的预测价值较低。本次为单中心研究，存在随访时间短、样本量偏少等缺陷，并且未检测孕母亲血浆Gal-9、IL-33 水平与脐血进行对比，尚不能明确脐血Gal-9、IL-33 水平受母体免疫的影响程度，有待进一步研究。

致谢感谢空军特色医学中心临床医学实验室生物样本库对本研究标本的存储。

作者贡献杨云彦：提出研究选题，设计方案，数据收集，数据分析，文章撰写及修订；王文革：指导研究选题，研究方案，终审论文；杨云月：收集、整理研究数据；卢旭俊：收集研究数据。

利益冲突所有作者声明无利益冲突。

数据共享声明本篇论文相关数据暂不共享。