NuSAP1、FAM83A蛋白表达与乳腺癌改良根治术后局部复发的关系

王 晶 邱献华

乳腺癌是指发生在乳腺的良性或恶性肿瘤,根据其发病情况可分为早、中、晚三个阶段[1]。乳腺良性肿瘤患者一般通过手术治疗,恶性肿瘤患者早期首选手术治疗,中晚期患者手术加药物或放疗、化疗等综合治疗[2]。但是存在部分患者会在术后出现局部复发或远处转移的情况,因此能否及早的发现和治疗对于疾病的预后至关重要。多项研究表明NuSAP1与FAM83A两种因子均与乳腺癌细胞的生成、发展和转移存在着一定关系[3],如果能够探清两者与乳腺癌复发之间的联系,对于乳腺癌患者的预后来说有着重大价值。本次研究选取我院2019年1月至2020年5月期间收录的221例乳腺癌并行改良根治术的患者作为观察研究对象,具体研究报告内容如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2019年1月至2020年5月期间收录的221例乳腺癌并行改良根治术的患者,将术后一年之内出现复发情况的27例患者作为观察组,其余194例未出现术后复发的患者作为对照组。纳入标准:①观察组患者经检查均符合乳腺癌诊断标准[4];②无术前癌细胞远处转移;③年龄18～71岁;④患者均行改良根治术;⑤患者均为浸润性乳腺癌。排除标准:①合并心脏病等其他脏器重大疾病者;②合并有神经系统疾病者;③孕期及分娩期妇女;④男性患者。其中观察组27例,年龄18～68(42.38±8.33)岁;TNM分期:Ⅱ期16例,Ⅲ期11例;对照组194例,年龄18～71(43.09±8.16)岁;Ⅰ期患者109例,Ⅱ期患者61例,Ⅲ期患者24例。

1.2 方法

1.2.1 组织提取 取乳腺癌患者手术切除的肿瘤组织及其癌旁距肿瘤组织将其封存制片。

1.2.2 NuSAP1mRNA的检测 使用实时荧光定量聚合酶联反应法( RT-PCR)对总RNA进行提取,首先使用DEPC水将匀浆器进行处理,取出备用患者组织样本100 mg左右,将样本与Trizol提取液以100∶1的比例进行混合后倒入匀浆器,并使其完全混合、粉碎,将混合液倒进EP管,分装5～6管以备用,并置于常温环境下放置10 min,以混合液:氯仿5∶1的比例将两种液体完全混合,于常温环境下放置10 min,随后进行10 min离心操作(1.2 kr/min)取其上清液以1∶1的比例加入异丙醇,常温环境下放置15 min,再次进行10 min离心操作(1.2 kr/min),弃上清,倒入Ep管内备用,同时使用DEPC水配制出75%乙醇,将乙醇倒入处理后的样本EP管内复行离心操作(7000 r/Min)3 min,弃上清,置于常温环境下5 min,最后加入DEPC水至总体积35 μl。浓度测定,使用紫外分光光度计测量Total RNA浓度,保持2.0>A280/A260>1.8的范围,并将TotalRNA琼脂糖凝胶电泳鉴定,能够发现三条带(5 s、18 s、28 s),在37 ℃逆转录15 min,及时逆转录为cDNA,引物序列见表1。

表1 PCR引物序列

1.2.3 FAM83AmRNA检测 TRIZOL试剂提取两组细胞标本中的总RNA 。将RNA逆转录成cDNA 并进行实时荧光定量聚合酶联反应法检测,检测步骤同NuSAP1相同,引物序列如表1 。

1.3 观察指标

(1)两组患者术后局部复发的单因素分析;(2)两组患者术后局部复发的多因素回归分析;(3)NuSAP1、FAM83A与患者术后局部复发的预后价值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组患者术后局部复发的单因素分析

两组患者的年龄对比无显著差异(P>0.05),观察组NuSAP1及FAM83A表达水平均高于对照组,且两组肿瘤类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、NuSAP1、FAM83A水平差异具有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 两组患者术后局部复发的单因素分析

2.2 两组患者术后局部复发的多因素分析

肿瘤类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、NuSAP1、FAM83A均为患者术后局部复发的独立影响因素(P<0.05),见表3。

表3 两组患者术后局部复发的多因素回归分析

2.3 NuSAP1、FAM83A水平对预测患者术后局部复发的价值

根据ROC 曲线获得,最佳界限以NuSAP1(0.78)、FAM83A(36.86)可获得ROC 曲线下最大面积,两项联合检测结果阳性,表明乳腺癌术后局部复发与Survivin-mRNA、OTUD3-mRNA密切相关,单项检测敏感度分别63.0%、70.4%,特异度89.7%、82.8%,且两项联合检测的敏感度(77.8%)、特异度(87.9%)均高于单项检测(P<0.05),见表4,图1。

表4 NuSAP1、FAM83A对预测患者术后局部复发的价值

3 讨论

流行病学研究显示,乳腺癌在世界范围内的发病率长年居高不下,据统计乳腺癌人数占比世界女性癌症人数的两成及以上,而这其中有将近半数的患者都位于亚洲地区的发展中国家。国内的女性乳腺癌确诊人数高达三十万每年,而且从目前来看,这个数字呈现逐年上升的趋势[5]。国内45岁及以上的中老年患者发病率要显著高于年轻的女性,虽然国内乳腺癌的发病率呈现上升趋势,但是由于近年来对于乳腺癌出现各种新的治疗方式,该病的死亡率正在逐渐降低[6]。近年来对于乳腺癌患者进行个体化治疗,预测早期疗效和预后效果的研究已经成为癌症治疗的热门话题[7]。改良根治术在乳腺癌的治疗方面占有重要地位,但是存在部分患者会因为各种原因出现术后局部复发的情况,因此如果能够对乳腺癌根治术后的复发进行一定程度上的评估和预测,能够对临床癌症治疗方面起着重大影响[8]。目前来说,常用的形态影像学预测效果并不理想,而对于生物标志物方面的研究似乎可以作为新的方向,因此找到能够预测评估癌症术后复发的生物标志物以成为目前的重要研究方向[9]。

本次研究对两组患者术后局部复发的单因素分析结果显示两组患者的年龄对比无显著差异,肿瘤类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、NuSAP1、FAM83A差异具有统计学意义。而多因素检测结果也显示肿瘤类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、NuSAP1、FAM83A均为术后局部复发的独立影响因素,与以往学者研究的结果相符合。现在临床上对乳腺癌根治术的术后复发多是根据患者病理学结果来进行判断,众多数据研究表明患者的肿瘤类型和肿瘤分期等因素与术后复发之间存在着密切联系,不过指依据病理学分型结果进行判断不能完整体现出癌症的分子层面的表达差异[10]。NuSAP1属于微管核蛋白的一种,它能够在机体细胞进程中呈现循环性变化趋势,并且NuSAP1mRNA表达状况以及自身蛋白的表达情况接受着严格的管控[11]。NuSAP1的基因启动子区域存在着能够与转录因子E2F进行结合的基点,而转录因子则是与细胞的周期性进程存在着密切联系。转录因子会对NuSAP1的转录情况起到调控作用,已有研究表明NuSAP1在很多癌症中会呈现明显过表达状况,而这也能够表明NuSAP1与癌细胞的侵袭和预后存在着重要联系[12-13]。FAM83A则是属于近年来新发现的肿瘤特异性抗原[14]。Yu等[15]的研究表明FAM83A在肺腺癌患者的癌组织中呈现过表达状态,而在癌旁组织及正常组织都呈现低表达或不表达状态,同时FAM83A还与病理学因素中的肿瘤分期,肿瘤类型以及孕激素等指标存在联系[16]。与本研究结果相一致,提示该指标对于癌症的发生、转移及复发存在着相关关系。对NuSAP1、FAM83A与患者术后局部复发的预后价值的计算结果显示,根据ROC 曲线获得,最佳界限以NuSAP1(0.78)、FAM83A(36.86)可获得ROC 曲线下最大面积,两项联合检测结果阳性,表明乳腺癌术后局部复发与Survivin-mRNA、OTUD3-mRNA密切相关,单项检测敏感度分别63.0%、70.4%,特异度89.7%、82.8%,且两项联合检测的敏感度(77.8%)、特异度(87.9%)均高于单项检测,提示两者对乳腺癌患者术后局部复发的预测及诊断具有预后价值。

综上所述,NuSAP1、FAM83A与乳腺癌的发生、转移及复发都存在密切联系,对乳腺癌术后局部复发的临床诊断及预测具有预后价值。