鼻咽癌组织中c-IAP2的表达及其临床意义

李恒丽 邢媛媛 张 莉

鼻咽癌属于常见恶性肿瘤,好发于鼻咽顶壁及侧壁,鼻咽癌发病早期症状不明显,多数患者出现明显症状时病情已进展至中晚期,增加治疗难度,整体预后较差[1]。细胞凋亡抑制蛋白-2(c-IAP2)属于凋亡抑制因子家族成员,在细胞凋亡的抑制过程中发挥重要作用。相关研究显示[2-3],c-IAP2在多种恶性肿瘤中存在异常表达,能够通过抑制肿瘤细胞凋亡的过程促使肿瘤发生。鉴于此,本研究分析鼻咽癌组织内c-IAP2的表达及临床意义,旨在为临床提供指导。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018年1月至2020年1月我院收治的74例鼻咽癌患者的临床资料。其中男性47例,女性27例;年龄35～72岁,平均年龄(58.96±5.27)岁;体质量指数19.2～28.1 kg/m2,平均体质量指数(23.36±1.92)kg/m2;临床分期:35例Ⅰ～Ⅱ期,39例Ⅲ～Ⅳ期;分化程度:30例低分化,44例中高分化;颅底侵犯:20例有,54例无;神经侵犯:23例有,51例无;淋巴结转移:29例有,45例无。纳入标准:患者均经病理活检确诊为鼻咽癌;临床资料完整;患者精神状态正常。排除标准:存有肝肾功能障碍;病理采集前经抗肿瘤治疗;合并严重脑血管疾病;伴有传染性疾病;伴有其他恶性肿瘤。

1.2 方法

所有患者均在抗肿瘤治疗前,经鼻内镜下采集肿瘤组织标本及癌旁组织标本,并及时送至病理科检测c-IAP2表达情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)开展检测工作:先在Trizol法辅助下完整组织内RNA提取,之后加入SYBR green染料开展PCR扩增处理,具体操作流程需严格按照说明书要求进行;具体引物为:c-IAP2-F,TGGATATTTCCGTGGCTCTT;c-IAP2-R,CCCACATAATAAAAACCCGCA;GAPDH-F,AATCCCATCACCATCTTCCA;GAPDH-R,CCTGCTT-CACCACCTTCTTG。Western印迹:先将组织内总蛋白提取出来,之后制备分离胶及浓缩胶,待电泳转膜后,以5%脱脂奶粉封闭处理,并在4 ℃环境下孵育鼠抗人c-IAP2抗体过夜,之后洗膜,滴加二抗,并在室温下孵育1.5 h,凝胶成像系统扫描。免疫组织化学染色:将标本经甲醛溶液固定后,常规进行石蜡包埋等处理,之后连续切片,保持组织切片厚度4 μm,经烤片、二甲苯脱蜡、乙醇水化、抗原修复等一系列处理后,血清封闭后加入一抗c-IAP2,之后4 ℃孵育过夜后加入二抗,经PBS溶液漂洗后,进行二氨基联苯胺显色,再经苏木精复燃、脱水封片等处理,显微镜下观察。结果判定:依靠染色强度及阳性细胞比判定,其中染色强度为0分无色,1分淡黄色,2分棕色,3分棕褐色;阳性细胞比为0分<5%,1分5%～25%,2分为>25%～50%,3分为>50%～75%,4分为>75%;两者乘积<6分为低表达,≥6分则为高表达。所有患者均随访2年,随访内容为肿瘤复发情况,随访方式为电话随访及门诊复查。

1.3 观察指标

(1)c-IAP2表达情况:比较c-IAP2在肿瘤组织及癌旁组织内的表达水平。(2)c-IAP2表达与临床病理特征的关系:分析不同c-IAP2表达患者在年龄、性别、体质量指数、肿瘤分期、分化程度、颅底侵犯、神经侵犯等病理特征间的差异。(3)c-IAP2表达与患者预后的关系:随访2年,记录患者肿瘤复发情况,比较不同c-IAP2表达患者复发率。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 c-IAP2表达情况

肿瘤组织内c-IAP2高表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同组织内c-IAP2表达情况对比(例,%)

2.2 c-IAP2表达与鼻咽癌临床病理特征的关系

高表达组临床分期Ⅲ～Ⅳ期、分化程度低分化及淋巴结转移占比高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 c-IAP2表达与鼻咽癌临床病理特征的关系(例,%)

2.3 c-IAP2表达与患者预后的关系

74例鼻咽癌患者随访2年,复发22例,复发率为29.73%(22/74);高表达组复发率高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 c-IAP2表达与患者预后的关系(例,%)

3 讨论

鼻咽癌病因复杂,临床认为EB病毒感染为主要病因,与遗传、环境及饮食等多种因素相关,多种因素综合作用,则可促使EB病毒于鼻腔黏膜大量繁殖代谢,从而释放多种毒性代谢产物,引起黏膜上皮细胞损伤[4]。EB病毒感染后还可整合至宿主细胞DNA内,对受感染细胞的凋亡起到抑制作用,并可激活其生长,最终诱导增殖失控,形成肿瘤。临床治疗鼻咽癌以早确诊、早治疗为原则,临床需有计划、合理地制定个体化综合治疗方案,以阻止肿瘤进展,提高患者生存质量。放射治疗为治疗鼻咽癌的首选根治性手段,由于鼻咽癌细胞对放射治疗敏感性极高,早期鼻咽癌经放射治疗后可获得良好的治疗效果,但对于中晚期鼻咽癌治疗难度较大,即使放疗技术不断改进,并联合化疗等综合手段,仍有部分患者存在较高复发风险,预后欠佳[5-6]。因此,还需寻找新的分子标志物评估鼻咽癌患者病情及预后,以便于提高整体疗效。

凋亡抑制因子属于高度保守的内源性抗细胞凋亡因子家族,能够通过参与调解核因子NF-κB及抑制Caspase活性等方式阻止细胞凋亡,从而广泛参与多种病理及生理过程的调控[7-8]。但临床发现,细胞凋亡是机体预防细胞过度增殖、消除有害细胞的重要生理过程,细胞凋亡调控则有助于机体维持正常更新及增殖,故细胞凋亡机制一旦发生障碍,则难以控制有害细胞过度增殖,加速肿瘤发生及发展[9]。c-IAP2则属于凋亡抑制因子家族成员,在恶性肿瘤中研究较为少见,在鼻咽癌中的表达情况及临床意义仍需深入分析。本研究结果显示,肿瘤组织内c-IAP2高表达率高于癌旁组织,高表达组临床分期Ⅲ～Ⅳ期、分化程度低分化及淋巴结转移占比高于低表达组;74例鼻咽癌患者经2年随访,复发率为29.73%(22/74);高表达组复发率高于低表达组。提示c-IAP2在鼻咽癌中呈高表达,其表达与临床分期、淋巴结转移、分化程度密切相关,且c-IAP2高表达患者复发风险更高高,可作为评估预后及指导治疗的重要参考指标。其原因为c-IAP2作为与细胞凋亡存在密切关系的蛋白,能够参与肿瘤细胞凋亡的调控,当c-IAP2处于高表达状态时,则具有促癌活性,会抑制鼻咽癌细胞凋亡,使得生长能力大幅提高,从而迅速增殖及扩散,加速鼻咽癌进展,故高表达患者普遍肿瘤分期高,更易伴有淋巴结转移[10]。而肿瘤分期高、淋巴结转移与患者预后密切相关,相较于早期患者肿瘤细胞清除难度更大,易出现远期复发,预后欠佳。因此,临床可将c-IAP2作为鼻咽癌治疗的新靶点,通过抑制c-IAP2表达促使肿瘤细胞凋亡,以阻止肿瘤增殖及扩散,降低远期复发风险。

综上所述,鼻咽癌组织中c-IAP2呈高表达,且高表达与不良临床病理特征密切相关,c-IAP2表达水平越高则复发风险越高,可为临床治疗提供指导。