外周血中miR-574-5p、miR-144-5p表达与腹主动脉瘤患者腔内血栓厚度的关系

张 阳 戴可可 闫海艳

腹主动脉瘤(AAA)为临床常见的慢性主动脉退行性病变,具有高水平的患病率与致死率,对中老年群体的身心安全构成严重威胁[1-2]。临床相关研究提示,AAA的发生与发展与破裂同腔内血栓(ILT)厚度联系紧密[3-4]。微小RNA(miRNA)是由18～22个核苷酸共同组成的非编码小RNA,与机体多种生理、病理过程存在显著联系,且临床检测便捷,稳定性与特异性高。临床相关研究指出,微小RNA-574-5p(miR-574-5p)、微小RNA-144-5p(miR-144-5p)的表达与主动脉瘤联系紧密[5]。但临床关于两项指标与AAA患者的ILT厚度之间关系有关报道较为缺乏,还有待进一步研究。基于此,本研究分析miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者外周血内的表达水平,以及两项指标表达水平与ILT厚度间的关系,旨在为临床提参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析60例AAA患者的临床资料,依据其腔内厚度将所有研究对象划分成两组,其中对照组共28例(薄ILT,ILT≤7.89 mm),观察组共32例(厚ILT,ILT>7.89 mm)。纳入标准:经病理检查证实为AAA;患者有关资料齐全;经CT检查显现肾下腹主动脉≥3.00 cm。排除标准:存在精神疾病者;合并全身性感染者;存在其他恶性肿瘤者;存有认知、语言沟通、视听、智力障碍,难以进行正常交流者;合并免疫系统与凝血功能异常者;存在严重的脑器质性疾病者;存有血液系统疾病者;存在酒精、药物依赖史者;合并严重的脏器功能受损者。对照组男性18例,女性10例;年龄52～79岁,平均年龄(65.78±5.34)岁;体重指数(BMI)19.3～27.5 kg/m2,平均BMI(24.06±1.48)kg/m2;腹主动脉最大直径3.5～6.1 mm,平均直径(4.89±0.53)mm;吸烟史:有16例,无12例。观察组男性20例,女性12例;年龄53～80岁,平均年龄(65.86±5.49)岁;BMI 19.4～27.3 kg/m2,平均BMI(24.01±1.45)kg/m2;腹主动脉最大直径3.7～6.3 mm,平均直径(4.93±0.56)mm;吸烟史:有18例,无14例。两组一般资料比较,无统计学差异(P>0.05)。

1.2 方法

标本采集:所有患者入院后的第2 d,采集其晨起空腹5 ml外周静脉血,以3000 r/min的速率行10 min的离心处理,离心半径10 cm,获取上层血清后,于-80 ℃的环境下留存待检。检测方法:以血浆RNA提取试剂盒提取所有血清标本的总RNA,并以逆转录试剂盒进行逆转录反应;之后取逆转录产物开展逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)扩增,扩增条件为95 ℃预变性5 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 20 s,72 ℃ 20 s,共进行40次循环;以U6当成内参,以2-ΔΔCt法计算miR-574-5p、miR-144-5p相对表达量。所有的检测操作均严格依据试剂盒操作说明行规范操作,以此保障检测结果的可信度及准确性。ILT厚度检测:通过CT血管造影(CTA)检测,于ILT横截面上选取3、6、9、12点钟方向,检测其厚度,计算平均值即为ILT厚度,为7.89 mm。同时依据ILT厚度把患者分为两组,其中ILT≤7.89 mm的薄ILT患者纳入对照组,ILT>7.89 mm的厚ILT患者纳入观察组。

1.3 观察指标

(1)两组miR-574-5p、miR-144-5p表达水平对比。(2)以多因素Logistic回归分析模型分析miR-574-5p、miR-144-5p表达水平与ILT厚度的关系。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 两组miR-574-5p、miR-144-5p表达水平对比

观察组miR-574-5p表达水平高于对照组,miR-144-5p表达水平低于对照组,有统计学差异(P<0.05),见表1。

表1 两组miR-574-5p、miR-144-5p表达水平对比

2.2 miR-574-5p、miR-144-5p表达与ILT厚度的关系

多因素Logistic回归分析显示:miR-574-5p表达水平高、miR-144-5p表达水平低,为AAA患者ILT厚度增加的独立危险因素(P<0.05),见表2。

表2 miR-574-5p、miR-144-5p表达与ILT厚度的关系

3 讨论

AAA为动脉扩张性病症,主要由动脉壁退行性变而引发,而外伤、感染、动脉炎的动均与该病的发生与发展密切相关[6-7]。多数AAA患者发病早期无明显症状,常于体检时发现,少数患者会出现腹痛、腹部搏动性肿块等表现,而当瘤体压迫四周组织器官时,将会导致对应的压迫症状[8]。同时,AAA与血小板活化和凝血功能紊乱相关,故AAA患者多有不同程度的ILT形成[9]。虽血栓形成可在AAA发展早期发挥保护作用,但ILT与血栓面积、血栓覆盖动脉瘤壁程度增加均会使得AAA扩张速度加快,促使动脉瘤破裂风险升高。ILT还会造成黏弹性蛋白降解、胶原合成与含量增加、血管平滑肌细胞凋亡与炎性细胞的过度浸润破坏血管壁的结构的完整性与稳定性,从而使得AAA破裂风险大大增加。而AAA破裂后会引起剧烈的腹痛、低血压、大出血等严重状况,增加患者死亡风险。

临床有关研究表明,ILT厚度被证实与动脉瘤直径、血管平滑肌细胞凋亡等具有一定的关系,且miRNA与ILT厚度联系紧密[10]。非编码RNA(ncRNA)包括miRNA和ciRNA等。miRNA为短链非编码RNA,可参与基因表达调节与机体较多的生命进程,包含炎症反应、肿瘤生长等。从进化层面而言,miRNA来自于植物界,可保护遗传物质,避免外界干扰,且具有测定便捷等优点,现已发展成较多疾病的生物标志物。相关研究发现,miRNA与RNA结合蛋白、高密度脂蛋白有一定关系,其表达水平与主动脉相关,在与主动脉有关的疾病中可能会出现表达失调情况[11]。miR-574-5p位于人染色体的内含子区域,miR-574-5p由人染色体4上编码的Noxp20基因的第一个内含子调节的,参与多种心血管疾病、恶性肿瘤的发生、发展,在较多恶性肿瘤病症中表达会异常升高[12]。miR-144-5p为前体miR-144的另一个成熟链,在多种疾病内均表达异常,通过调控靶基因的表达参与疾病的进程,具有抑制肿瘤作用[13-14]。本研究结果显示,观察组的miR-574-5p表达水平(4.95±0.83)高于对照组(3.20±0.69),miR-144-5p表达水平(0.26±0.09)低于对照组(0.48±0.13);多因素Logistic回归分析显示:miR-574-5p表达水平高、miR-144-5p表达水平低为AAA患者ILT厚度增加的独立危险因素。表明miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者机体内呈异常表达,而miR-574-5p表达升高、miR-144-5p表达降低与ILT厚度密切相关,有作为ILT生物标志物的潜力。然而本次研究仍存在中心单一、数据少、样本量少等不足,可能会影响本次研究的可信度。因此,临床后续在进行AAA相关的研究中尚需进一步完善试验设计,增加研究数据,扩大样本量,进行更为深入的分析,旨在为临床提供更为可靠、客观的指导。

综上所述,miR-574-5p、miR-144-5p在AAA患者外周血中异常表达,其中miR-574-5p呈过高表达,miR-144-5p呈过低表达,而两项指标异常表达水平与患者ILT厚度密切相关。