HBV与HPV对宫颈上皮内病变及宫颈癌影响

周 飞,何江耀,夏丽丽,陈昌伟

(东莞东华医院 病理科,广东 东莞523110)

宫颈癌普遍易见,严重危害女性健康,报道发现2018年全世界将近57万人患宫颈癌,其中我国患者超过十万,死亡人数达4.8万[1]。宫颈癌患者数量逐年增长,日趋年轻[2],所以,找到宫颈癌新的突破口尤为重要。

通常情况下,宫颈正常上皮感染人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)后先发生宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),包括低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)及高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL),后续再转化为癌[3]。HPV感染引起宫颈腺上皮病变相对较少,但病变过程与鳞状上皮病变类似。

当前HPV亚型被发现100余种,在宫颈组织中近30种[4]。HPV包括高危型和低危型,持续感染高危型HPV容易导致CIN及官颈癌的发生[5]。但是只有HPV感染时不足以引起宫颈癌变,致癌因素多种多样,发生免疫疾病、改变人体微环境[6]以及相关基因均起着重要作用[7]。

据报道人宫颈癌基因在肝癌等多种恶性肿瘤中异常表达[8],乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染作为肝癌主要致病因素,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白是一种肿瘤发展关键蛋白,能加快肿瘤细胞增殖和迁移[9],与HPV感染明显有关,是宫颈癌肿瘤标记物[10]。因此,本实验研究HBV感染对宫颈癌及其癌前病变影响,以及和HPV感染的相关性,为探索宫颈癌相关影响因素奠定基础。

1 资料与方法

1.1 材料

1.1.1研究对象 收集东莞东华医院2014年至2018年首次行宫颈组织病理学、HPV分型检查及HBV-DNA载量检测的病例,统计进行每两组检查的患者,分析各两组间的关系。

1.1.2主要检测仪器及试剂 Luminex 200多功能流式点阵仪(Luminex公司,美国);ABI Prism 7500型实时荧光定量PCR仪(ABI公司,美国);5333 PCR仪(Eppendorf公司,德国);全自动核酸提取仪(深圳市美德瑞生物科技有限公司,中国);OLYMPUS BX51显微镜(OLYMPUS公司,日本);人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒(流式荧光杂交法,上海透景诊断科技有限公司);乙型肝炎病毒核酸测定试剂盒(PCR-荧光探针法,中山大学达安基因股份有限公司);核酸提取试剂盒(磁珠法,中山大学达安基因股份有限公司)。

1.2 方法

1.2.1HPV分型检测 根据HPV分型检测试剂盒说明书操作:主要包括以下3个主要步骤:样本处理,PCR扩增,杂交检测,最后是上机(Luminex 200多功能流式点阵仪)检测。该试剂盒检测27种亚型,包括17种HR-HPV和10种LR-HPV;HPV阳性即检测到亚型感染。

1.2.2HBV-DNA检测 根据HBV核酸测定试剂盒说明书操作:主要包括以下4个步骤:DNA提取,PCR试剂准备,加样,PCR扩增(使用ABI Prism 7500型实时荧光定量PCR仪,程序严格根据说明书设定检测)。本试剂盒线性检测范围是100 IU/mL～5.0×108IU/mL,HBV-DNA定量阳性即检测浓度大于1 000 IU/mL。

1.3 统计学分析

本研究数据均用SPSS 22.0 统计软件处理,计数资料用n(%)表示,采用χ2检验和Fisher精确概率法分析,P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV感染对宫颈上皮内病变影响

1 166例受检者HPV分型及宫颈组织病理学检查结果如表1所示,HPV阳性率为46.83%(546/1 166),在546例HPV阳性患者中,低级别上皮内病变的发生率44.14%(241/546)、高级别上皮内病变的发生率16.85%(92/546)、浸润性癌的发生率3.30%(18/546);在620例HPV阴性患者中,低级别上皮内病变的发生率23.06%(143/620)、高级别上皮内病变的发生率15.65%(97/620)、浸润性癌的发生率1.13%(7/620);两组相比,差异有统计学意义(χ2=89.87,P<0.01)。

表1 HPV感染对宫颈上皮内病变影响[n(%)]

2.2 HPV亚型感染数量对宫颈上皮内病变影响

546例HPV阳性患者中,多重感染的感染率为30.04%(164/546),在164例多重感染患者中,低级别上皮内病变发生率50.61%(83/164)、高级别上皮内病变发生率12.80%(21/164)、浸润性癌发生率3.05%(5/164);在382例单纯感染患者中,低级别上皮内病变发生率41.36%(158/382)、高级别上皮内病变发生率18.32%(70/382)、浸润性癌发生率3.14%(12/382);两组相比,差异无统计学意义(χ2=4.84,P=0.3038),见表2。

表2 HPV亚型感染数量对宫颈上皮内病变影响[n(%)]

2.3 HBV与HPV合并感染情况

本研究1 166例受检者中,有126例行HBV-DNA载量和HPV分型检测,结果如表3所示,HBV-DNA载量>1 000的检出率为35.71%(45/126),在45例HBV-DNA载量>1 000的患者中,HPV阳性率为20.00%(9/45),在81例HBV-DNA载量≤1 000的患者中,HPV阳性率为24.69%(20/81),两组相比,差异无统计学意义(χ2=0.36,P=0.5489)。

表3 HBV与HPV合并感染情况

2.4 HBV感染对宫颈上皮内病变影响

1 166例受检者中,有140例行HBV-DNA载量检测和宫颈组织病理学检查。结果如表4所示,HBV-DNA载量>1 000的检出率为37.86%(53/140),在53例HBV-DNA载量>1 000的患者中,有宫颈上皮内病变的发生率为47.17%(25/53);在87例HBV-DNA载量≤1 000患者中,有宫颈上皮内病变的发生率为42.53%(37/87);两组相比,差异无统计学意义(χ2=0.29,P=0.5918)。

表4 HBV感染对宫颈上皮内病变影响

3 讨论

宫颈癌作为妇科常见病之一,发病率逐年上升[11]。在CIN时期发现并及时治疗可以提高治愈率,但该时期无明显临床表现,因此找到宫颈癌新的突破点,尽早筛查、预防宫颈病变意义重大[12-13]。

HPV属于DNA病毒,能感染皮肤和黏膜上皮,唯一宿主是人,高危型HPV感染使宫颈癌患病率增加[14]。HBV和HPV是人类病毒感染常见类型,当人感染病毒后,病毒DNA与宿主基因整合,引起人体抑癌基因失活,癌基因过度表达从而致病[15-16]。虽然人体能一定程度抵抗致病菌,但大多患者自身免疫无法完全清除,容易造成感染[17]。

因此,本研究探索HBV与HPV关系,研究HBV及HPV亚型感染数量对宫颈上皮内病变的影响。结果显示,在1 166例HPV分型及宫颈组织病理学检查患者中,与HPV阴性组相比,HPV阳性组宫颈低级别、高级别上皮内病变及宫颈癌患病人数明显升高,说明HPV感染促进宫颈癌及其癌前病变发生;但是HPV亚型多重感染与单纯感染相比,宫颈癌及宫颈上皮内病变发生率无明显差异,说明HPV亚型感染数量与宫颈癌及其癌前病变无关,研究结果与国内外报道一致[18-20]。

在研究HBV与HPV及宫颈上皮病变关系中结果显示,与HBV阴性组相比,HBV阳性对HPV感染及宫颈癌相关上皮内病变没有明显影响,说明HBV感染与宫颈癌无关联,与HPV感染也无关联。乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白作为肿瘤发展关键蛋白,虽然被证实与HPV和宫颈癌[10]关系紧密,但本实验发现单纯感染乙型肝炎病毒不会促进HPV感染,也不会导致宫颈癌及其癌前病变的发生,为寻找宫颈癌新的突破点研究作铺垫。