不同病理类型慢性肾小球肾炎患者血清INF-γ、IL-4、IL-10 表达水平观察比较

李秀华，赵全能，崔学丽

肾小球肾炎患者多表现出蛋白尿、水肿、高血压、血尿等临床症状，若得不到及时治疗，易引起尿毒症，严重的会危及患者生命安全［1-2］。有研究指出，免疫紊乱所致的肾脏炎症损伤是肾小球肾炎疾病主要的病理生理机制［3］。不同免疫应答类型所引起的不同病理组织损伤，也多表现出不同的临床症状，而临床通过判断患者病理类型对制定治疗方案有一定参考作用［4-5］。肾小球肾炎早期疾病类型的判断是治疗开展的基本前提，其金标准是肾穿刺活检后病理检查，但此方式属于有创操作，患者舒适度低，且可能产生并发症。因此，寻求一种微创、无痛、更佳的病理类型评估方式具有一定价值。血清学指标因具有微创、操作便捷等优势,近年来应用较多，既往研究表明肾小球肾炎不同病理类型的患者血清学指标具有差异，常见的如中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutropil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）、胱抑素Cl（Cystatin C）等［6］。本研究纳入Th1 和Th2 型细胞因子［白细胞介素4（interleukin-4，IL-4）、白细胞介素10（IL-10）、干扰素-γ（interferon-γ，INF-γ）］进行分析，旨在为血清学指标评估慢性肾小球肾炎病理类型提供更多可参考的依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取南充市中心医院2018 年1 月至2020 年1 月收治的81 例慢性肾小球肾炎患者作为观察组，再根据病理类型划分为局灶节段性肾小球硬化（focal segmental glomerulosclerosis，FSGS，n=15）组、局灶增生性肾小球肾炎（focal proliferative glomerulonephritis，FPGN，n=16）组、系膜增生性肾小球肾炎（membrane proliferative glomerulonephritis，MsPGN，n=17）组、膜性肾病（membranous nephropathy，MN，n=16）组和狼疮性肾炎（lupus nephritis，LN，n=17）组，共5 个亚组。同时选择同期16 例于本院接受健康体检的人群作为对照组。其中 观 察 组 男43 例，女38 例，年 龄18～65 岁［（35.69 ± 7.26）岁］；合并疾病：糖尿病7 例，高血压33 例。对照组男9 例，女7 例，年龄20～69 岁［（37.42 ± 6.35）岁］；结合本人主诉或体检明确诊断的合并疾病包括糖尿病2 例，高血压7 例。2 组研究对象年龄、合并疾病等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究获南充市中心医院伦理委员会批准。

观察组纳入标准：（1）符合慢性肾小球肾炎诊断标准［7］；（2）年龄≥18 周岁；（3）签署知情同意书。排除标准：（1）FSGS、FPGN、MsPGN、MN 组排除肝炎相关性肾炎、系统性红斑狼疮性肾炎、高血压性肾损伤、糖尿病肾病、紫癜性肾炎等继发性肾脏病者；（2）妊娠期或哺乳期女性患者；（3）伴恶性肿瘤疾病者；（4）合并其他感染性或免疫性疾病史者；（5）近3 个月经免疫抑制剂、糖皮质激素等治疗者；（6）临床资料不全者。

1.2 研究方法 （1）采集研究对象一般情况。包括性别、年龄、血压［收缩压（systolic blood pressure，SBP）、舒张压（diastolic blood pressure，DBP）］、24 h尿蛋白、血清IL-4、IL-10、INF-γ、血沉、补体C3、尿液红细胞计数、血清白蛋白、血红蛋白、合并疾病。（2）肾穿刺检查。慢性肾小球肾炎患者均行肾穿刺术检查，术前凝血功能正常，在ACUSON X150 B 超引导下（西门子）采用负压吸引法行肾穿刺术；取4 mm 肾组织皮质，放置于生理盐水纱布（湿润）内，经10% 甲醛溶液固定其余部分，于4 ℃冰盒中保存；分别在24 h 内进行光学显微镜、免疫荧光检查，确定病理类型；（3）实验室指标检测。采用BU08J自动电子血压计（松下）测量DBP、SBP 水平；采用流式细胞荧光法测定INF-γ、IL-4、IL-10 水平（BM 公司FC500流式细胞分析仪）；采用焦酚红法测定24 h尿蛋白定量（日本LABOSPECT008AS 全自动生化分析仪）；测定血沉（VITAL 公司Monitor 100）、血清白蛋白（日本LABOSPECT008AS 全自动生化分析仪）、血红蛋白（迈瑞BC6900 全自动血细胞分析仪）、尿液红细胞计数（匈牙利LabUMat 尿液分析仪）、补体C3水平（BM公司IMMAGE800特定蛋白分析仪）。

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0 统计软件对所得数据进行分析。计数资料以百分比（%）表示，组间行χ2检验。满足正态分布且方差齐性的计量资料采用表示，行单因素方差分析，组间比较采用Studen-Newman-Keuls 法。采用Pearson 积差相关分析两变量相关性。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组研究对象一般资料比较 2 组研究对象年龄、性别、合并疾病比较差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组患者血压均高于对照组的健康体检人群（P＜0.05），其中LN 组血压最高，其次为FSGS 组。LN 组尿液红细胞计数、血红蛋白、血清白蛋白、补体C3 水平均低于其他各组（P＜0.05）。LN 组血沉水平高于其他各组（P＜0.05）。观察组患者24 h 尿蛋白高于对照组的健康体检人群（P＜0.05），其中MN 组最高，其次为LN 组。见表1。

表1 观察组与对照组研究对象一般资料比较

2.2 各个亚组血清IL-4、IL-10、INF-γ 水平比较FPGN、MsPGN、MN、LN 组IL-4、IL-10 水平均高于FSGS 组（P＜0.05）；FPGN、MsPGN、MN 组INF-γ 水平均低于FSGS 组、LN 组（P＜0.05）。见表2。

表2 观察组各个亚组血清IL-4、IL-10、INF-γ 水平比较（pg/ml，n=81）

表2 观察组各个亚组血清IL-4、IL-10、INF-γ 水平比较（pg/ml，n=81）

注：IL-4 为白细胞介素4，IL-10 为白细胞介素10，INF-γ 为干扰素-γ，FSGS 为局灶节段性肾小球硬化，FPGN 为局灶增生性肾小球肾炎，MsPGN 为系膜增生性肾小球肾炎，MN 为膜性肾病，LN 为狼疮性肾炎

INF-γ 95.62 ± 9.52 67.58 ± 9.36 65.52 ± 9.15 64.39 ± 9.55 302.61 ± 21.63 21.526＜0.001组别FSGS 组FPGN 组MsPGN 组MN 组LN 组F 值P 值例数15 16 17 16 17 IL-4 18.96 ± 4.52 30.63 ± 4.56 35.12 ± 4.22 34.68 ± 4.63 32.14 ± 5.06 9.865＜0.001 IL-10 15.41 ± 2.14 22.66 ± 4.32 28.13 ± 6.12 27.41 ± 5.48 23.59 ± 5.42 8.415＜0.001

2.3 不同病理类型的慢性肾小球肾炎患者血清INF-γ、IL-4、IL-10 水平与24 h 尿蛋白、补体C3 的相关性分析 经Pearson 检验，MN、MsPGN、FPGN组INF-γ 水平与24 h 尿蛋白定量呈正相关（r=0.4123，0.628，0.215；P=0.000，0.000，0.010）。LN、FSGS 组IL-4、IL-10 水平与24 h 尿蛋白定量呈负相关（r=-0.415，-0.321；P=0.000，0.003），与补体C3 呈正相关（r=0.847，P=0.000）。

3 讨论

免疫应答类型不仅是肾小球肾炎患者病理组织损伤分化的主要因素，还会对疾病的发生、发展和转归等产生直接影响。因此，分析细胞免疫应答类型在慢性肾小球肾炎发病机制中的作用十分重要［8］。既往有较多报道指出，与慢性肾小球肾炎患者病理类型相关的临床因素包括补体、纤溶因子、凝血因子等，而且这些临床因素与慢性肾小球肾炎患者病理类型的具体关系已获得诸多研究成果［9-11］。

通过测定血清INF-γ、IL-4、IL-10 表达水平，结合临床血常规、肾功能等指标，可初步判断慢性肾小球肾炎患者病程。本研究中，LN 组血压最高，其次为FSGS 组；LN 组尿液红细胞计数、血红蛋白、血清白蛋白、补体C3 水平均低于其他各组；LN 组血沉水平高于其他各组；MN 组24 h 尿蛋白最高，其次为LN 组。究其原因，FPGN、MsPGN、MN 是以Th2型细胞因子为主导的炎症反应，临床上以尿蛋白表达量明显增高为主要特征；FSGS 患者根据硬化比例观察其所处阶段，若硬化范围较为局限，则部分患者仍以Th2 型细胞因子为主导；若硬化范围较广，则以Th1 型细胞因子为主导；LN 患者在活动期以Th1 型细胞因子为主导，非活动期则以Th2 细胞因子为主导。通过观察慢性肾小球肾炎患者不同病理类型，可判断其处于何种炎症状态中，对患者治疗方案的制定有指导作用。

有研究指出，慢性肾小球肾炎发生、发展与T淋巴细胞功能紊乱密切相关，其病理改变与Th1/Th2 细胞因子失衡存在联系［12］。INF-γ 为临床上常见的血清Th1 型细胞因子，在自身免疫性肾炎的发展中起关键作用，可引起肾损伤。有学者认为IFNγ 在增殖性肾炎患者体内的含量要明显高于正常者；也有研究指出，LN 患者血清IFN-γ 含量较高［13-14］。本研究中，PGN、MsPGN、MN 组INF-γ 水平均低于FSGS 组、LN 组，其中LN 组INF-γ 水平最高，其次为FSGS 组，与上述研究结论相似。或是由于LN、FSGS 患者发生了以Th1 型细胞因子为主导的炎症反应，且LN、FSGS 患者肾小球硬化比例加大，疾病处于活动期，故INF-γ 水平明显增加，促进肾小球及肾小管免疫损伤。此外，本研究中，LN 患者补体C3、血红蛋白、尿液红细胞计数水平均明显降低，而血沉水平明显增加，进一步表明疾病处于活动期，而处于非活动期各指标改变并不明显，可能与LN 患者自身有较多体液免疫反应、抗体反应亢进相关。

IL-4、IL-10 为常见的Th2 型细胞因子。有研究指出，血清IL-4、IL-10 水平会随病理改变的增生程度升高而升高［15-16］。本研究中，以Th2 型细胞因子为主导的慢性肾小球肾炎病理类型分为3 种，包括MsPGN、FPGN、MN，其中MsPGN 增生程度最为明显，其次为FPGN、MN。本研究中，FPGN、MsPGN、MN、LN 组IL-4、IL-10 水平均高于FSGS 组，与上述报道结论相似。分析原因，可能是IL-4 对内皮细胞黏附因子-1 有一定的促进作用，能诱导分化肥大细胞因子，增加黏蛋白基因表达水平；同时IL-4 可趋化肾小球巨噬细胞，加重炎症反应，通过增加纤维母细胞的增殖作用而促进合成胶原细胞因子，导致患者发生肾小球纤维化反应；IL-10 为细胞因子合成抑制因子，具有免疫调节作用，可对单核巨噬细胞抗原递呈功能及分泌致炎细胞因子有一定的抑制作用，使Th1 型细胞因子功能受抑，减少肾组织巨噬细胞浸润；当患者体内IL-10 表达水平显著增加，炎症细胞因子会抑制肾小球系膜细胞产生而发生多种炎症反应，从而保护患者的肾脏功能［17］。

此外，本研究观察不同病理类型的慢性肾小球肾炎患者血清INF-γ、IL-4、IL-10 水平与24 h 尿蛋白、补体C3 的相关性，发现MN、MsPGN、FPGN 组INF-γ 水平与24 h 尿蛋白定量呈正相关；LN、FSGS组IL-4、IL-10 与24 h 尿蛋白定量呈负相关、与补体C3 呈正相关。说明血清INF-γ、IL-4、IL-10 表达水平不仅与慢性肾小球肾炎患者不同病理类型密切相关，也与其24 h 尿蛋白定量、补体C3 水平关系密切，推测血清INF-γ、IL-4、IL-10 可能参与慢性肾小球肾炎的发生与发展。可能因为IL-10、IL-4、INF-γ对一些免疫细胞具有免疫抑制、刺激的双向作用，可通过不同途径对Th1/Th2 型细胞因子平衡产生影响。

综上所述，血清INF-γ、IL-4、IL-10 水平与慢性肾小球肾炎患者不同病理类型有关，可作为临床评价患者病情变化及预后的有效指标。但由于研究时间过短、所选择的样本量过少等因素，本研究还存在一定局限性，今后可针对此方向进一步论证，以提供客观理论依据。