流式细胞术联合脑脊液检测在原发性中枢神经系统淋巴瘤诊断中的价值

郑勇浪 李相兵

1 四川省达州市中心医院检验科 635000; 2 眉山心脑血管病医院检验科

原发性中枢神经系统淋巴瘤(Primary central nervous system lymphoma,PCNSL)是指原发于颅内、眼睛、脊髓及软脑膜等部位, 并排除中枢神经系统以外的其他淋巴结受累的非霍奇金淋巴瘤,其中大部分为弥漫大B细胞淋巴瘤。PCNSL起病较急,进展快,侵袭性大,对身体损伤较大,患者预后较差[1]。PCNSL的临床诊断有一定的困难,误诊率较高,尽早诊断可以减少因疾病本身或者不必要的治疗导致的其他损伤,能够有效地改善患者的预后。脑脊液细胞形态学检测是监测脑脊液中是否存在异常细胞的常规检测方法,流式细胞术可提高脑脊液的检测准确度。有研究表明[2],流式细胞术可以提高诊断效率和准确率,可以快速准确地鉴别与诊断良恶性淋巴瘤。脑脊液检测在中枢神经系统相关疾病的诊断中有较好的应用,能提高中枢神经系统相关疾病诊断的准确性[3-4],而流式细胞术用于检测脑脊液中的肿瘤细胞可以提高检测结果的准确性。本文欲探讨脑脊液流式细胞术检测应用于PCNSL诊断中的价值。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年2月—2019年10月达州市中心医院收治的诊断为PCNSL的56例患者作为观察组。2018年2月—2021年10月诊断为中枢神经系统感染性疾病的60例患者作为对照组。观察组患者均经病理学检查确诊为原发性PCNSL,且既往无鞘注化学治疗史。对照组患者纳入标准为未合并淋巴结感染。两组患者均排除累及其他部位淋巴瘤侵犯者及基础状况较差无法配合研究治疗者。所有入组患者均对本研究知情同意并签署知情同意书。本研究符合并通过医院伦理委员会的批准。观察组:男38例,女18例,年龄23～65岁,平均年龄(55.63±9.23)岁。对照组:男36例,女24例,年龄29～64岁,平均年龄(53.75±9.73)岁。两组性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法 (1)取脑脊液:入组患者侧卧于硬板床上,尽量保持背部与床面垂直,将头弯曲于胸前,抱住双膝使腰部弓起,从第3、4腰椎间隙穿刺进去,垂直进针棘间隙与脊柱取脑脊液9ml。(2)流式细胞术:将3ml脑脊液离心1 500r/min,离心5min。涂片、干燥,进行瑞氏染色,放大1 000倍观察细胞形态。调整细胞浓度,取离心后的脑脊液标本,加入表面标志抗体的流式管中,混匀后静置15min,加入1ml磷酸盐缓冲溶液(PBS)冲洗、混匀、然后继续离心5min,转速1 000r/min,弃上清液,使用PBS洗涤2 次。使用 Becton-Dickinson公司 FACSDiva Version 6.1软件进行分析。(3)脑脊液常规检查包括一般性状检查、蛋白定性、细胞计数和分类。将脑脊液标本低温离心2 000r/min,离心10min,收集上清液保存,-80℃。脑脊液蛋白定性检测使用苯酚,定量检测用磺基水杨酸。使用生化分析仪直接定量测定脑脊液糖、蛋白、氯的水平,使用酶联免疫吸附法检测脑脊液中细胞因子趋化因子配体(CXCL-13)及白细胞介素(IL)-10浓度。

1.3 评价指标 (1)比较两组患者的脑脊液细胞学、脑脊液有核细胞数以及脑脊液糖、蛋白、氯、CXCL-13、IL-10的水平。(2)IL-10诊断原发性PCNSL的价值分析。

2 结果

2.1 原发性PCNSL脑脊液流式细胞术检测结果 56例原发性PCNSL患者中,脑脊液中淋巴瘤细胞占比为33.93%(19/56)。

2.2 两组脑脊液生化检测结果比较 观察组脑脊液蛋白高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组脑脊液糖、氯比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

表1 两组脑脊液生化检测结果比较

2.3 两组细胞因子检测结果比较 观察组脑脊液CXCL-13表达阳性率及脑脊液中IL-10含量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 两组细胞因子检测结果比较

2.4 脑脊液蛋白和IL-10联合诊断原发性PCNSL的价值分析 脑脊液蛋白和IL-10联合诊断原发性PCNSL的ROC曲线下面积为0.845,标准误为0.001,95%置信区间0.672～0.853,灵敏度和特异度为84.32%和92.13%。

3 讨论

原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)进展迅速,病程凶险,而且预后很差。近年来,PCNSL发病率呈增长趋势,而且其治疗结果依赖于诊断,早期PCNSL治疗结果及预后均较好[5-6]。由于PCNSL患者的主要临床症状比较隐匿,进展到后期会表现为明显的精神症状改变,颅内压增高及局部的压迫症状,但是早期症状不明显,导致大部分PCNSL患者就诊时已处于晚期[7-8]。颅脑影像学检查也无法明确诊断早期PCNSL[9-10],其他药物的使用也会降低活检检出率,活检检测会对患者的脑组织有一定程度的创伤,而且还有较高的误诊率[11-13]。因此,急需辅助诊断PCNSL的诊断方法。

本文结果显示,观察组患者脑脊液中淋巴瘤细胞占比为33.9%,因脑脊液中直接发现淋巴瘤细胞是诊断PCNSL的直接依据,显示流式细胞术用于PCNSL诊断中有较好的诊断价值。本文结果还显示,PCNSL患者脑脊液CXCL-13表达阳性率明显高于对照组(P<0.05),且观察组阳性率为100.00%。CXCL-13属于趋化因子家族成员之一,能够辅助促进辅助性T细胞、树突状细胞及巨噬细胞的成熟,在免疫应答中发挥重要作用,它能够促进恶性肿瘤的发生、发展和转移,因此在恶性肿瘤中含量较高。有研究显示,PCNSL患者的脑脊液中CXCL-13含量为100%,与本文结果一致[14]。

本文结果显示,观察组脑脊液蛋白高于对照组(P<0.05)。原因为PCNSL会引起脑脊液蛋白循环通路梗阻,然后导致蛋白的含量增加。本文脑脊液生化检测显示,两组脑脊液糖、氯含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组脑脊液中IL-10含量高于对照组(P<0.05)。IL-10主要参与免疫应答和炎症介导,能够从一定程度上促进肿瘤的生长,然后抑制肿瘤细胞凋亡。通过调节肿瘤细胞与其他细胞之间的相互作用,可以为肿瘤侵袭其他组织提供有利的环境。在淋巴瘤中,肿瘤细胞的自分泌导致IL-10含量高,使IL-10可作为诊断PCNSL的依据[15]。

综上所述,在PCNSL的诊断中可以通过脑脊液流式细胞术联合脑脊液测定尽早监测并辅助诊断,以期进行早期干预来降低疾病的病死率,改善预后。