多发性骨髓瘤患者骨髓细胞中CD269、CD317的表达及其意义

陈素洁 王亚南

多发性骨髓瘤(MM)属克隆浆细胞异常增殖性恶性肿瘤,该病以骨髓内产生无限增殖的异常浆细胞为主要的临床表现[1-2]。临床有关研究表明,MM的治疗效果依靠于免疫应答反应,而免疫反转抑制能够潜在的强化内源性抗骨髓瘤活性[3-4]。因而,探寻一敏感度、特异度均处于较高水平的免疫测定指标,对于临床精准判断MM预后、指导个体化治疗方案的制定具有重要意义。白细胞分化抗原269(CD269)为B细胞成熟性抗原,主要在体液免疫中发挥相对应的生物学功能[5]。分化抗原簇317(CD317)又可称作骨髓基质细胞性抗原2,亦可被称作终末分化型B细胞的一个特异性标志物,属于肿瘤相关抗原。然而临床关于CD269、CD317在MM骨髓细胞内的表达研究报道较为缺乏,还有待进一步研究。基于此,本研究以2019年4月至2022年4月本院收治的56例MM患者为研究对象,分析CD269、CD317在MM患者骨髓细胞内的表达与临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

将2019年4月至2022年4月本院收治的56例MM患者纳入观察组,同时期经由骨髓穿刺证明骨髓功能正常的非血液系统病症患者60例纳入对照组。纳入标准:经病理检查证实为MM;患者病历有关资料齐全;MM患者均为初诊,且入院之前未行抗肿瘤诊治;全部研究对象的一般身体状况优良,依从性较高;自愿签署知情同意书。排除标准:合并其他恶性肿瘤者;存有精神障碍或难以进行正常沟通;存在全身性感染者;存在免疫性疾病者;存有严重脏器损伤者;存有酒精、药物依赖史者;存在传染性病症者。对照组男性34例,女性26例;年龄35～71岁,平均年龄(57.75±6.41)岁;体重指数(BMI)18.5～27.4 kg/m2,平均BMI(23.57±1.78)kg/m2。观察组男性30例,女性26例;年龄32～68岁,平均年龄(57.24±6.38)岁;BMI 18.4～27.1 kg/m2,平均BMI(23.41±1.70)kg/m2。比较两组一般资料,无统计学差异(P>0.05)。

1.2 方法

标本采集:所有患者均于入院第2 d的清晨遵循无菌操作抽取2 ml骨髓细胞,并予以肝素抗凝。检测方法:采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)测定,首先取100 μl TRIzol混合均匀,之后把500 μl氯仿加入,充分混匀,静置5 min,在室温条件之下以12000 r/min的速率离心10 min;离心完毕过后小心的转移100 μl上层水相抵达新的1.5 ml离心管;之后放入相同体积的异丙醇,于混合均匀之后在室温条件下放置5 min;运用12000 r/min的速度进行10 min的离心处理;弃上清,加入300 μl无水乙醇洗涤沉淀,以相同的速率离心5 min后弃上清,风干3～5 min,以50 μl DEPC水溶解,留存待用;之后按检测试剂盒操作步骤获取cDNA,对CD269、CD317予以扩增,反应体系共10 μl,反应条件为:94 ℃ 4 min,94 ℃ 15 s,60 ℃ 40 s,72 ℃ 30 s,共进行40个循环;并以水为模板当成阴性对照,最后以2-ΔΔCt法计算CD269、CD317相对表达量。

1.3 观察指标

(1)两组CD269、CD317相对表达量对比。(2)CD269、CD317表达与MM患者临床病理特征的关系:收集所有患者的年龄(≥60岁、<60岁)、性别(男、女)、BMI(≥24 kg/m2、<24 kg/m2)、细胞学类型(成熟浆细胞型、幼浆细胞型、原浆细胞型)、复发(有、无)、临床分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期)等一般资料,分析CD269、CD317两者的表达与患者上述临床病理特征的关系。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 两组CD269、CD317相对表达量对比

观察组CD269、CD317相对表达量高于对照组,有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 两组CD269、CD317相对表达量对比

2.2 CD269、CD317表达与MM患者临床病理特征的关系

CD269、CD317表达与MM患者年龄、性别、BMI、细胞学类型、复发无关(P>0.05);CD269、CD317表达与MM患者临床分期有关(P<0.05)。见表2。

3 讨论

MM为浆细胞恶性增值性疾病,中老年人是主要发病群体,且男性发病率高于女性[6]。MM的发病机制较为复杂,临床尚不明确,多认为分子细胞遗传异常与其发病有关,而辐射污染、病毒感染等亦参与该病的发生与发展[7]。同时,MM的起病较为隐匿,临床表现复杂,且缺乏特异性,漏诊和误诊风险较高[8-9]。当前治疗MM的方式较为多样,如化疗、自体骨髓移植等,均可起到一定效果,但受个体差异性等影响,上述方法所取得的整体疗效难以达到预期[10]。因此,临床为探寻更为完善、更具针对性的治疗方案,对MM分子学层面进行深入分析具有重要的意义。

CD269是与B淋巴细胞联系紧密的刺激因子的一种受体,基因定位在人染色体16p13,而CD269仅仅于成熟的B细胞表层表达,属于一类较为重要的B细胞生物标志物,在B细胞发育、自身免疫应答等过程中均扮演重要角色[11-12]。CD269可与肿瘤坏死因子配体超家族成员13b进行特异性的结合,并导致核转录因子-kB(NF-kB)和MAPK/JNK信号通路活化,促使细胞存活和增殖[13]。CD317则为Ⅱ型跨膜蛋白,其基因定位在19p13.2上,属肿瘤相关抗原,在B淋巴瘤、肺癌等肿瘤内均有异常升高现象。本研究结果显示,观察组CD269[(0.67±0.21)]、CD317[(1.46±0.38)]相对表达量高于对照组[(4.35±0.89)、(4.21±0.75)],由此表明,CD269、CD317两者在MM患者的骨髓细胞中呈现异常的高表达状态。其原因为当MM发生时,骨髓微环境之中的CD269的配体APRIL水平显著上涨,将会使得CD269表达、活化,并通过激活下游靶基因,提高白介素-10等因子的水平。同时,CD269的活化还会使得JNK信号激活,继而造成MM细胞增殖,而JNK信号通路的激活亦会使得CD269表达上升,最终形成正反馈回路,使得CD269的表达升高。而CD317在癌细胞亦或可分泌免疫球蛋白的已成熟B细胞内表达,可作为晚期B细胞已经成熟的重要特异性标记物。CD317还可调节机体内的免疫应答反应,起到抗炎与抗病毒等作用,参与癌细胞的免疫反应,故CD317在MM患者的骨髓细胞内呈高表达。本研究结果还显示,CD269、CD317表达与MM患者的年龄、性别、BMI、细胞学类型、复发无关;CD269、CD317表达与MM患者的临床分期有关。说明CD269、CD317表达升高可能促使MM的恶性进展,引发不良预后。但本研究尚存在纳入样本量较少等不足,会在一定程度上干扰本次研究结果的精准度。因此,临床之后还需持续的完备研究设计,增加样本量,以开展更深层次的研究,从而进一步了解CD269、CD317表达与MM患者之间的关系,指导临床制定更具个体化的治疗措施,以改善患者预后。

表2 CD269、CD317表达与MM临床病理特征的关系

综上所述,CD269、CD317在MM患者的骨髓细胞内异常升高,其高表达与患者的临床分期密切相关。