WDR27 在胃癌组织中的表达及其临床意义

瞿 峰，胡懿淋，朱 斌，陈 煜

（南通大学附属医院胃肠外科，江苏 226001）

胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,目前居全球肿瘤发病率第三位,死亡率居第五位[1-2],在中国胃癌为公次于肺癌的第二常见恶性肿瘤。胃癌发病与幽门螺杆菌感染、吸烟、食用腌制食品和高盐饮食有关[3]。尽管近年来手术结合放疗、免疫治疗和靶向治疗明显改善胃癌患者的预后,但5年生存率仍很低,因此寻找胃癌的有效治疗靶点具有重要意义。

WD 重复结构域27（WD Repeat Domain 27,WDR27）属于含WDR 结构域超家族,编码具有多个WD 重复的蛋白质,WDR 结构域由多个β-螺旋结构组成,通常用作蛋白质相互作用的支架,并为多蛋白质复合物的组装提供平台,参与广泛的细胞网络,如信号转导、转录调节、细胞周期控制、细胞骨架组装和染色质修饰等,其中许多与人类疾病有关[4]。本研究收集2010年1月—12月南通大学附属医院胃肠外科胃癌手术标本150 例,采用qRT-PCR 检测胃癌组织及癌旁组织中WDR27 mRNA 的表达,分析WDR27 mRNA 表达与临床病理参数及预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 胃癌手术患者150 例,男性96 例,女性54 例,年龄28～84 岁,平均61.16±11.54 岁。纳入标准：（1）手术标本经病理确诊为原发性胃癌;（2）术前未接受过任何抗肿瘤治疗;（3）无其他部位肿瘤;（4）临床资料及随访资料完整。患者出院后进行随访,随访截止于2015年8月或患者死亡,随访时间3～67 个月。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 RNA 提取、cDNA 合成和qRT-PCR 胃癌及癌旁组织用生理盐水冲洗干净后迅速放入-80 ℃冻存。使用Trizol 试剂（Invitrogen,美国）按说明书提取RNA,逆转录试剂盒（生工生物）进行逆转录,采用PCR 试剂盒（生工生物）进行扩增反应,检测胃癌及癌旁组织中WDR27 mRNA。以GAPDH 作为内参,引物序列为：WDR27：5’-GTGGTTCATCCATCAGGGGG-3’（F）,5’-GGGGATCCCTTTTGAGGAGC-3’（R）。根据WDR27 mRNA 表达水平分为高表达组（癌组织高于癌旁组织）和低表达组（癌旁组织高于癌组织）。

1.3 线上数据库 利用TCGA 数据库网（https：//cancergenome.nih.gov/）,收集375 例胃癌样本和32例癌旁样本数据,其中27 对为配对样本,分析WDR27 在胃癌组织和癌旁组织中的表达。

1.4 统计学处理 应用SPSS 21.0 统计软件进行数据分析。WDR27 与患者年龄、性别、临床分期等临床特征间的关系采用χ2检验,绘制Kaplan-Meier 生存曲线,生存率比较采用Log-rank 检验,预后因素分析采用Cox 比例风险模型。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 胃癌组织中WDR27 表达 分析TCGA 数据库数据发现,非配对样本或者配对样本,胃癌组织中WDR27 表达均高于癌旁组织,差异均有统计学意义（P＜0.05）（图1A,1B）。本研究对150 例组织样本进行qRT-PCR 检测显示,88 例（58.67%）（高表达组）胃癌组织中WDR27 mRNA 表达水平高于癌旁组织,62 例（41.33%）（低表达组）癌旁组织中WDR27 mRNA 表达水平高于胃癌组织（图1C）。

图1 胃癌组织及癌旁组织WDR27 mRNA 表达

2.2 胃癌组织中WDR27 表达水平与临床病理特征的关系 WDR27 mRNA 表达与肿瘤T 分期（P=0.003）、TNM 分期（P=0.001）和淋巴结转移（P=0.049）有关,而与性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小及位置无关（P＞0.05）。见表1。

表1 胃癌组织中WDR27 mRNA 表达与临床特征的关系 例（%）

2.3 影响胃癌患者预后的因素分析 单因素Cox回归模型分析显示,WDR27 mRNA 表达、分化程度、肿瘤大小、TNM 分期、T 分期、淋巴转移与胃癌患者预后相关。多因素Cox 回归分析显示,WDR27 mRNA表达水平（HR=2.173,95%CI：1.119-4.221,P=0.022）和淋巴结转移（HR=5.049,95%CI：1.704-14.962,P=0.003）是影响胃癌预后的独立因素,见表2。WDR27 mRNA 低表达胃癌患者总生存期长于高表达者,差异有统计学意义（P=0.002）,见图2。

图2 WDR27 mRNA 低表达组与高表达组胃癌患者总生存期比较

表2 Cox 回归分析影响胃癌患者预后因素

3 讨 论

胃癌异质性高,具有侵袭能力强、易转移等特点。目前早期胃癌的主要治疗方法是手术和化疗,术后化疗的效果影响患者的预后和生存率[5]。恶性肿瘤一旦发生转移,患者预后就较差[6]。因此,有必要寻找新的标志物为胃癌诊断和治疗提供靶点。

近年来关于含WDR 结构域超家族的研究取得较大进展。研究显示,WDR76 与包括肿瘤在内的多种疾病密切相关[7-9]。WDR34 在胶质瘤、乳腺癌和肝细胞癌中表达上调,且与患者不良预后相关,敲除WDR34基因可以抑制胶质瘤细胞的侵袭能力[10-12]。WDR54在结直肠癌患者中高表达,且是疾病特异性生存的独立风险因素。在体内和体外模型中敲除WDR54可显著抑制结直肠癌细胞的生长和侵袭性[13]。

为了解WDR27 在胃癌中的表达及其与患者预后的关系,本研究对TCGA 公共数据库进行分析,发现WDR27 在胃癌组织中高表达;采用qRT-PCR 检测150 例组织样本,证实WDR27 mRNA 在胃癌组织中异常上调,提示该基因可能发挥促癌作用,一定程度上参与胃癌的发生发展。Cox 回归模型单因素分析显示,WDR27 mRNA 表达、分化程度、肿瘤大小、TNM 分期、T 分期、淋巴转移与胃癌患者预后相关。多因素Cox 回归分析显示,WDR27 mRNA 表达水平和淋巴结转移是影响胃癌预后的独立因素。WDR27 mRNA 低表达胃癌患者总生存期长于高表达者,差异有统计学意义。表明WDR27 异常升高与胃癌恶性程度及疾病分期有关,并预示患者预后较差。