简析禽白血病诊断及防控

王 研，周 浪，杨 蔚，周 群

（1.大理白族自治州州动物疫病预防控制中心，云南 大理 671000；2.大理农林职业技术学院，云南 大理 671000）

1  禽白血病病毒生物学特性

禽白血病是由禽白血病病毒引起多种肿瘤性疾病的统称，属于逆转录病毒科α逆转录病毒属，在形态上是典型的C型肿瘤型病毒，基因组大小约为7.2kb，病毒不耐高温，在外界存活时间短，禽白血病病毒根据囊膜糖蛋白抗原差异可分为A-J及K共11个亚群，鸡是本群所有病毒的自然宿主，具有致病性的主要为外源性的禽白血病，其中J亚群对家禽的传播性、致病性和危害性最强，2018年我国爆发了J亚群禽白血病给我国养殖业带来了巨大的损失[1]。不同亚群病毒通常利用宿主细胞的不同受体介导感染，主要受体有Tva、Tvb、Tvc及chNHE1[2]。

2  禽白血病的危害

禽白血病感染的家禽会出现生长迟缓、产蛋下降、免疫抑制、肿瘤死淘等危害。禽白血病可通过水平及垂直传播，垂直传播时禽白血病的放大效应危害从曾祖代次逐渐放大，严重影响种系的培育。有研究表明阳性公鸡的后代垂直传播性要高于阳性母鸡[3]，加强种公鸡的管理对预防禽白血病具有重要意义。先天感染的鸡产生免疫耐受可能会终生带毒，禽白血病可引起禽淋巴细胞的凋亡进而造成免疫器官发生病变特别是法氏囊发育不良，禽白血病病毒可引发禽的免疫抑制，降低家禽的疫苗免疫抗体水平，李鑫等[4]通过将1日龄SPF鸡接种禽白血病病毒后接种禽流感疫苗，结果显示禽白血病对禽流感疫苗具有显著的抑制作用。张桂芝等[5]在经1日龄鸡感染禽白血病病毒对疫苗免疫效果的检测中发现禽白血病能显著降低鸡新城疫禽流感的抗体水平。做好禽白血病的防控，可消除其对家禽疫苗免疫的危害。同时禽感染禽白血病可能会引起禽的腹水及肝脾肿大[6]。做好禽白血病的防控不仅可以减少直接的经济损失，还有利于种系的培育。

3  禽白血病的诊断

禽白血病的净化诊断是关键，禽白血病的检测相对于其他禽病检测较为复杂，主要是禽白血病病毒检测如何排除内源性禽白血病病毒的干扰，目前采用的主要方法有病毒分离、血清学检测、分子生物学检测等，各养禽场可根据不同目的选择不同的检测方法，

3.1  病毒分离

病毒分离作为禽白血病检测的金标准，成为禽白血病净化检测的重要检测方法，通常将样本接种DF1细胞后培养1周左右。病毒分离时应根据检测目的选择不同的样本，目前多选择蛋清、胎粪、血液、精液等样品，在病毒分离过程中不同样本对检测结果有差异，张亚文等[7]用种公鸡精液鸡血液病毒分离检测地方鸡禽白血病时结果存在差异。王明月等[8]用血清、血浆及蛋清样品使用DF1细胞进行病毒分离检测，结果显示蛋清最敏感。病毒分离是检测禽白血病最可靠的方法，可以排除内源性禽白血病病毒干扰。但是对技术要求较高，操作比较繁琐周期较长不适合大规模检测，同时在病毒分离时要结合检测目的选择合适的样本。

3.2  血清学检测

血清学检测是利用禽白血病特异性抗原与特异性抗体相结合的一种检测方法，主要有ELISA、病毒中和试验、琼脂扩散试验等。目前ELISA检测方法以其快速、敏感、适合大批量检测等特点，被广泛用于禽白血病的诊断及净化检测中，现就最主要的检测方法ELISA作简要介绍，ELISA检测方法可以检测禽白血病的抗原及抗体，曹利利等[9]利用纯化后的P27重组蛋白为包被抗原建立的ELISA方法具有良好的特异性及重复性，但不同样本对结果会造成影响。陈晨等[10]利用原核表达P27蛋白作为抗原制备包被抗体，酶标兔抗P27作为酶标抗体，建立了双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的特异性。不同样本对检测结果会有影响，徐国洋等[11]用20只10日龄鸡进行攻毒试验后采肝脏、血清、泄殖腔拭子和骨髓进行ELISA检测，结果表明血清检测结果更为可靠。检测试剂盒对检测结果也有影响，郭慧君等[12]用3种不同试剂盒检测禽白血病病毒结果有差异。但在实际情况中应根据检测目的选择不同的样本及方法。

3.3  分子生物学检测

在禽白血病的检测中分子生物学检测也扮演重要的角色，目前运用最多的是聚合酶链式反应、基因芯片检测等方法。Pcr 检测作为现代实验室检测方法已广泛用于动物疫病的诊断，禽白血病的诊断也建立了多种pcr诊断方法，严立福等[13]用荧光定量PCR方法检测30份七彩山鸡血浆样品的细胞培养物时具有良好的特异性及敏感性，但是此方法无法区分内源性的禽白血病，适合临床样品的检测。俞燕等[14]也建立了多重荧光定量PCR的方法检测A、B、J、K亚群禽白血病用于禽白血病的流行病学调查。PCR方法的建立使禽白血病的检测更加方便快捷，但由于禽白血病病毒的生物学特性禽白血病容易发生变异重组对PCR的引物探针特异性要求较高，可能会出现假阳性结果，另外使用PCR检测方法不能区分内源性禽白血病病毒，所以禽白血病在净化过程中不建议以PCR检测为主要依据。基因芯片检测方法已经广泛用于疫病检测，具有高通量、快速、灵敏的特点，苏霞等[15]利用禽白血病A、C、D亚群参考毒株设计扩增引物及探针制备基因芯片检测禽白血病其灵敏度达到106cop-ies/mL，比 pcr敏感性高出100倍。张悦[16]根据用禽白血病B、E、J亚群参考毒株设计扩增引物及探针制备基因芯片对50份临床样品进行检测具有较高的特异性和敏感性。为了检测结果的准确性，基因芯片检测方法对引物及基因芯片设计有较高要求，在实际检测过程中更多用于实验室研究。

4  禽白血病的防控

禽白血病的防控，对养禽业来说具有重要的意义，做好禽白血病的防控不仅能减少经济损失，还能提升养殖场形象有利于市场竞争。由于禽白血病病毒的生物学及传播特性，还因其能够垂直传播，对种系的培育及禽类遗传资源的保护带来了巨大的挑战。由于目前没有有效的疫苗预防，且禽白血病没有特效药治疗，防控主要依靠净化及饲养管理。

4.1  加强种源管理

禽白血病是垂直传播性疾病，加强种源管理对禽白血病的防控至关重要。种鸡引进需来自非疫流行区，种源场取得国家的各项许可且场源固定，引种前应对种源加强检测合格后方能引进，引进后还需隔离饲养观察一个潜伏期，在隔离期间每隔一周采样监测结果无异常才能并群饲养，加强种源管理是净化控制禽白血病的关键措施[17]。

4.2  加强饲养管理

饲养管理对于禽白血病的防控至关重要，除执行常规饲养管理制度外，应严格控制人员和物品的流动，减少各种应急，由专人负责受精，加强饮用水管理水源无污染符合农业标准，加强对禽粪便管理及时无害化处理避免交叉污染。虽然禽白血病没有特效药物但是据研究逆转录酶抑制剂类药物有助于降低禽白血病垂直传播感染的危害[18]，豆春峰等[19].在体外实验中验证了二甲双胍具有抑制禽白血病增殖的作用。有研究表明黄芪、郁金、益母草、土茯苓对禽白血病gp37基因mRNA表达具有抑制作用，[20]银杏种皮多糖具有抑制禽白血病-J亚群复制的能力[21]在饲养过程中可以定期投喂，同时对做好家禽基础免疫工作，增强家禽抵抗力。

4.3  禽白血病净化

目前净化是防控禽白血病最有效的措施，也是种禽场的必要选择。2012年我国提出了将禽白血病等16种动物疫病作为优先防治动物疫病逐步进行控制、净化、消除。在我国不少种禽场都着手禽白血病净化，禽白血病净化鸡群在生产性能上明显优于非净化鸡群。张锐等[22]收集全国297个规模化养殖场的调查数据发现净化后的鸡场可有效降低禽白血病的发病率。有研究表明种鸡场禽白血病净化后禽流感新城疫抗体合格率由48.5%提高到95%以上，鸡白痢感染率由62.05%下降到9.37%[23]。然而在禽白血病的净化过程中还存在一系列的困难，净化需对检出阳性的禽群进行淘汰，增加养殖场成本且周期较长短期内的不会带来经济效益，维持净化场所开展的工作存在资金、技术、成本等压力。禽白血病的净化工作是一项复杂而漫长的过程，需要经过数个世代不断地净化才能实现，如何保证每个世代孵化、育成、产蛋等各环节做到严格把控相互协调尤为重要，最为关键的是净化后如何维持，在给禽群开展基础免疫时一定要开展检测不使用污染的疫苗[24]，尽管面临着许多困难但禽白血病的净化已是大势所趋。